袁翠霞，景小金，陳 紅，楊 峰，張 海，楊 源，劉 艷，景書(shū)灝，徐春志

（1.貴陽(yáng)市動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，貴州 貴陽(yáng) 550081；2.貴州省動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，貴陽(yáng) 550081）

近年來(lái)，隨著貴陽(yáng)市生豬產(chǎn)業(yè)的不斷發(fā)展，生豬頻繁調(diào)運(yùn)，疫病變得越來(lái)越復(fù)雜和多樣化，其中腹瀉類疫病成為困擾貴陽(yáng)市生豬養(yǎng)殖業(yè)發(fā)展的重要因素之一。在引起豬腹瀉的各種病因中，病毒性腹瀉的危害是最為嚴(yán)重的，主要是由豬流行性腹瀉病毒（Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV）、豬輪狀病毒（Porcine rotarvirus,PoRV）、豬傳染性胃腸炎病毒（Transmissible gastroenteritis virus of swine,TGEV）三大病原所引起。豬群中存在單獨(dú)感染或混合感染以上腸病毒，感染后的病豬出現(xiàn)水樣腹瀉、體溫降低、脫水、嘔吐和水鹽代謝紊亂死亡，感染豬沒(méi)有特效治療藥物，且臨床治療價(jià)值不大，所以對(duì)養(yǎng)殖業(yè)的危害嚴(yán)重，影響人民的正常生活，引起大家的高度關(guān)注[1-3]。

為了解2018—2019年貴陽(yáng)市規(guī)?；i場(chǎng)主要病毒性腹瀉疫病的發(fā)生和流行趨勢(shì)，本研究采集7個(gè)區(qū)（市、縣）38個(gè)養(yǎng)豬場(chǎng)292份疑似腹瀉糞便樣品進(jìn)行病原學(xué)的檢測(cè)，為貴陽(yáng)市規(guī)模化豬場(chǎng)主要病毒性腹瀉疫病的預(yù)防和控制提供參考。

1 材料

1.1 病料

292份豬腹瀉糞便樣本，采用5 mL的EP管密封保存?zhèn)溆?，?lái)自貴陽(yáng)市7個(gè)區(qū)（市、縣）38個(gè)養(yǎng)豬場(chǎng)。

1.2 試劑

豬流行性腹瀉病毒實(shí)時(shí)熒光RT-PCR試劑盒、豬輪狀病毒實(shí)時(shí)熒光RT-PCR試劑盒、豬傳染性胃腸炎病毒實(shí)時(shí)熒光RT-PCR試劑盒，均購(gòu)自北京世紀(jì)元亨動(dòng)物防疫技術(shù)有限公司。

2 方法

將采集的292份豬腹瀉糞便樣本，分別加入1 mL生理鹽水，反復(fù)凍融3次后高速離心，取上清液作為備檢樣本。按照上述3種病毒核酸提取試劑盒操作說(shuō)明，分別進(jìn)行PEDV、PoRV、TGEV的病毒核酸提取，并按實(shí)時(shí)熒光RT-PCR擴(kuò)增試劑盒操作說(shuō)明，分別進(jìn)行體系構(gòu)建和目的基因擴(kuò)增，擴(kuò)增結(jié)束后觀察擴(kuò)增曲線和CT值對(duì)結(jié)果進(jìn)行判定。

3 結(jié)果

對(duì)采集的292份豬腹瀉糞便樣本分別進(jìn)行PEDV、PoRV、TGEV的病毒核酸提取，實(shí)時(shí)熒光RT-PCR擴(kuò)增，結(jié)果：PEDV核酸陽(yáng)性病料129份，陽(yáng)性率44.2%（129/292），PoRV核酸陽(yáng)性病料25份，陽(yáng)性率8.6%（25/292），TGEV核酸陽(yáng)性病料10份，陽(yáng)性率3.4%（10/292）。其中PEDV/PoRV混合感染核酸陽(yáng)性病料9份，陽(yáng)性率3.1%（9/292）；PEDV/TGEV混合感染核酸陽(yáng)性病料5份，陽(yáng)性率1.7%（5/292）；PoRV/TGEV混合感染陽(yáng)性率為0，3種病原混合感染陽(yáng)性率為0。總體趨勢(shì)為感染陽(yáng)性率：TGEV＜PoRV＜PEDV。結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 不同地區(qū)豬群中病毒性腹瀉病毒檢測(cè)結(jié)果

4 分析與討論

本研究對(duì)貴陽(yáng)市7個(gè)地區(qū)38個(gè)規(guī)?；B(yǎng)豬場(chǎng)292份疑似腹瀉糞便樣品，分別進(jìn)行流行性腹瀉病毒、輪狀病毒、傳染性胃腸炎病毒的病原學(xué)流行病學(xué)調(diào)查，結(jié)果：PEDV核酸檢出率為44.2%（129/292），PoRV核酸檢出率8.6%（25/292），TGEV核酸檢出率3.4%（10/292）。其中PEDV/PoRV混合感染核酸檢出率3.1%（9/292）；PEDV/TGEV混合感染核酸檢出率1.7%（5/292）；未檢出PoRV/TGEV混合感染和3種病原混合感染。說(shuō)明引起我市規(guī)?；i場(chǎng)腹瀉病毒總體趨勢(shì)：TGEV＜PoRV＜PEDV，且存在 PEDV/PoRV和PEDV/TGEV混合感染情況。

朱子鍵等[4]對(duì)2015—2016年間東北地區(qū)的88個(gè)疑似豬場(chǎng)的264份病料樣品進(jìn)行病原學(xué)檢測(cè)，結(jié)果 PEDV、PoRV、TGEV的陽(yáng)性率分別是 74.62%、25.76%、6.06%，且存在兩兩混合感染和三重感染，以PEDV/PoRV雙重感染為主。劉霞等[5]對(duì)2016—2017年間浙江省32個(gè)健康規(guī)模養(yǎng)殖場(chǎng)的611份豬糞便樣品、16個(gè)臨床發(fā)病豬場(chǎng)50份豬小腸樣品進(jìn)行PEDV、TGEV、PoRV檢測(cè)，結(jié)果健康規(guī)模養(yǎng)殖場(chǎng)豬糞便樣品中PEDV陽(yáng)性率為4.09%，PoRV陽(yáng)性率為6.55%。臨床發(fā)病豬場(chǎng)豬小腸樣品的PEDV、PoRV檢出率分別為74.00%、6.00%。薛瑞雪等[6]對(duì)2013—2014年山東省226份豬腹瀉樣本進(jìn)行PEDV、TGEV、PoRV檢測(cè)，結(jié)果陽(yáng)性率分別是34.96%、2.21%、28.76%。竇海燕等[7]對(duì)2015年黑龍江省67份豬糞便樣品進(jìn)行PEDV、TGEV檢測(cè)，結(jié)果PEDV陽(yáng)性率為73.2%，TGEV陽(yáng)性率為28.4%。段群棚等[8]對(duì)2016—2019年廣西366個(gè)規(guī)模豬場(chǎng)送檢的914份仔豬腹瀉病料樣品進(jìn)行PEDV、PoRV、TGEV檢測(cè)，調(diào)查PEDV、PoRV樣品平均陽(yáng)性率分別為59.74%、4.92%，未檢測(cè)出TGEV。陽(yáng)酉萍等[9]對(duì)四川省9個(gè)地區(qū)送檢的75份仔豬腹瀉病料（小腸及糞便）進(jìn)行PEDV檢測(cè)，結(jié)果陽(yáng)性率為88.00%。胡興義等[10]對(duì)2013—2015年貴州省5個(gè)地州（市）27個(gè)規(guī)模養(yǎng)豬場(chǎng)203份發(fā)病仔豬腹瀉糞便樣品進(jìn)行PEDV、TGEV和PoRV檢測(cè)，結(jié)果PEDV陽(yáng)性率為63.54%，TGEV陽(yáng)性率為 0.98%，PoRV陽(yáng)性率為7.88%，PEDV/TGEV混合感染率為 0.99%，PEDV/PoRV混合感染率為10.84%。

由于引起豬腹瀉的因素很多，其中既有傳染性因素，如病毒、細(xì)菌、寄生蟲(chóng)等，又有非傳染性因素，如飼養(yǎng)管理、營(yíng)養(yǎng)因素、應(yīng)激等。在引起豬腹瀉的各種病因中，病毒性腹瀉的危害是最為嚴(yán)重的，本研究表明，PEDV、PoRV單純或混合感染依然是我市豬腹瀉的最主要的兩大病原，TGEV雖然在本次研究中感染率相對(duì)較低，但豬群中依然存在。為此，豬場(chǎng)在防控過(guò)程中，既要加強(qiáng)PEDV、PoRV兩大病原的防控，同時(shí)也要加強(qiáng)TGEV的防控，只有做好綜合防控，才能確保豬群健康，養(yǎng)豬業(yè)持續(xù)發(fā)展。