范景輝 姚慧欣 尹松鶴 趙玉梅

[摘要] 目的 探討黃芩苷對糖尿病合并非酒精性脂肪肝大鼠瘦素、炎癥因子水平及游離脂肪酸代謝的影響。 方法 選擇健康雄性Wistar大鼠30只作為研究對象。造模成功后，采取隨機(jī)數(shù)字表法分為模型組和黃芩苷組兩組，每組15只。模型組不加以治療干預(yù)，黃芩苷組采取黃芩苷進(jìn)行治療。飼養(yǎng)12周后處死，檢查和比較兩組大鼠leptin、FFA、炎癥因子水平以及與FFA代謝相關(guān)血液指標(biāo)。 結(jié)果 黃芩苷組大鼠leptin和FFA檢測結(jié)果分別為（1.51±0.34）g/mL和（111.72±9.28）μmol/g，均低于模型組的（2.19±0.30）g/mL和（198.34±20.18）μmol/g。在炎癥因子水平檢測結(jié)果方面，黃芩苷組IL-6、IL-18和TNF-α檢測結(jié)果分別為（0.25±0.08）ng/mL、（0.35±0.10）ng/mL和（2.58±0.74）ng/mL，均低于模型組的（0.50±0.12） ng/mL、（0.57±0.13）ng/mL和（5.20±1.13）ng/mL。在與FFA代謝相關(guān)血液指標(biāo)檢測結(jié)果方面，黃芩苷組MALONYL-CoA、ACCa-se和FAS檢測結(jié)果分別為（2.34±0.79）mmol/L、（10.17±1.76）mmol/L和（9.79±1.00）mmol/L，均低于模型組的（3.62±0.77）mmol/L、（17.27±2.32）mmol/L和（17.15±1.51）mmol/L。差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。 結(jié)論 黃芩苷有效提高了糖尿病合并非酒精性脂肪肝大鼠的治療效果。

[關(guān)鍵詞] 黃芩苷;糖尿病;非酒精脂肪肝;大鼠;瘦素;炎癥因子水平;游離脂肪酸

[中圖分類號] R285.5? ? ? ? ? [文獻(xiàn)標(biāo)識碼] A? ? ? ? ? [文章編號] 1673-9701（2020）16-0032-03

Effects of baicalin on the level of leptin，inflammatory factors and free fatty acid metabolism in the rats with diabetes mellitus complicated with nonalcoholic fatty liver disease

FAN Jinghui1? ?YAO Huixin2? ?YIN Songhe3? ?ZHAO Yumei1

1.Department of Pharmacy， Hongqi Hospital Affiliated to Mudanjiang Medical University，Mudanjiang? ?157000， China;2.Department of Continuing Education， Hongqi Hospital Affiliated to Mudanjiang Medical College， Mudanjiang? ?157000， China; 3.Food and Drug Inspection Center of Mudanjiang City in Heilongjiang Province， Mudanjiang? ?157000， China

[Abstract] Objective To investigate the effects of baicalin on the level of leptin， inflammatory factors and free fatty acid（FFA） metabolism in the rats with diabetes mellitus（DM） complicated with nonalcoholic fatty liver disease （NAFLD）. Methods 30 healthy male Wistar rats were selected as the subjects of research. After successful modeling，the rats were divided into the model group and the baicalin group through the random number table method with 15 rats in each group. The model group was received no treatment intervention， while the baicalin group was received baicalin for treatment. After 12 weeks of feeding， the rats in both the two groups were killed， and the level of leptin， FFA， and inflammatory factors as well as blood indexes related to FFA metabolism were examined and compared between the two groups. Results The leptin and FFA detection results in the baicalin group were （1.51±0.34）g/mL and （111.72±9.28） μmol/g respectively， which were lower than the （2.19±0.30）g/mL and （198.34±20.18） μmol/g in the model group. In terms of detection results of the level of inflammatory factors， the detection results of IL-6， IL-18 and TNF-α in the baicalin group were （0.25±0.08）ng/mL， （0.35±0.10）ng/mL and （2.58±0.74） ng/mL respectively， which were lower than the （0.50±0.12） ng/mL，（0.57±0.13） ng/mL and （5.20±1.13） ng/mL in the model group. In terms of detection results of blood indexes related to FFA metabolism， the detection results of MALONYL-CoA，ACCa-se and FAS in the baicalin group were （2.34±0.79）mmol/L，（10.17±1.76）mmol/L and （9.79±1.00） mmol/L respectively， which were respectively lower than the （3.62±0.77） mmol/L，（17.27±2.32） mmol/L and （17.15±1.51） mmol/L in the model group. The differences were statistically significant（P<0.05） in all the above comparisons. Conclusion Baicalin has effectively improved the therapeutic effect on the rats with DM complicated with NAFLD.

[Key words] Baicalin; Diabetes mellitus; Nonalcoholic fatty liver disease; Rat; Leptin; Level of inflammatory factors; Free fatty acid

據(jù)流行病學(xué)統(tǒng)計，在普通人群中，非酒精性脂肪肝的發(fā)病率約為5%，而在糖尿病患者中，非酒精性脂肪肝的發(fā)病率高達(dá)21%～78%，由此可見，在糖尿病患者群體中，非酒精性脂肪肝的發(fā)病率較高。由于受到血糖異常情況的影響，嚴(yán)重降低了糖尿病患者的生活質(zhì)量，當(dāng)合并非酒精性脂肪肝后，會進(jìn)一步損傷患者的肝功能，從而增加患者整體的治療和康復(fù)難度[1，2]。而目前受到醫(yī)學(xué)發(fā)展的制約，對此類患者的相關(guān)醫(yī)學(xué)研究較少，治療方法較為有限。在此背景下，我院以糖尿病合并非酒精脂肪肝大鼠為研究對象，造模成功后采取黃芩苷對大鼠進(jìn)行治療干預(yù)。黃芩苷是中藥黃芩提取出的一種活性成分，具有良好的抑菌、利尿、抗炎和降膽固醇的作用。近年來，隨著醫(yī)學(xué)技術(shù)的發(fā)展，白慶云[3]證實，黃芩苷還具有良好的保護(hù)肝臟效果。以此為出發(fā)點，探討黃芩苷對糖尿病合并非酒精性脂肪肝大鼠瘦素、炎癥因子水平及游離脂肪酸代謝的影響，為臨床治療工作的開展提供借鑒和參考?，F(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1一般資料

選擇健康雄性Wistar大鼠30只作為研究對象[北京維通利華實驗動物技術(shù)有限公司，許可證號SCXK（京）2015-0001]，6周齡，體重140～160 g，平均（152.23±5.23）g，SPF級。Wistar大鼠均購自北京維通麗華實驗動物有限公司。經(jīng)我院實驗動物倫理委員會批準(zhǔn)實施。大鼠由牡丹江醫(yī)學(xué)院動物實驗中心飼養(yǎng)，室溫（22±1）℃，相對濕度50%～70%，按正常晝夜節(jié)律調(diào)整照明時間。

1.2 方法

1.2.1 試劑和設(shè)備? 黃芩苷和鏈脲佐菌素分別購自南京青澤醫(yī)藥科技開發(fā)有限公司和美國 Sigma公司，戊巴比妥鈉購自成都都格雷西亞化學(xué)技術(shù)有限公司。瘦素（leptin）和游離脂肪酸（FFA）采用酶聯(lián)免疫吸附實驗法，試劑盒購自北京奇松生物科技有限公司。在炎癥因子水平檢測方面，白介素-6（IL-6）、白介素-18（IL-18）和腫瘤壞死因子-α（TNF-α）均采用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附實驗法，試劑盒購自上海酶聯(lián)生物科技有限公司。在與FFA代謝相關(guān)血液指標(biāo)檢測方面[4]，脂肪酸合成酶（FAS）、乙酰輔酶A羧化酶（ACCa-se）和丙二酰輔酶A（MALONYL-CoA）同樣采用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附實驗法，試劑盒購自上海江萊生物科技有限公司。以上均采用日本Olympus Au2700全自動生化分析儀檢測。

1.2.2 模型誘導(dǎo)? 將30只Wistar大鼠均順應(yīng)性3 d后，給予高脂飼料喂養(yǎng)。高脂飼料總熱量為18.7 Kj/g，其中碳水化合物占30.04%、脂肪占55.37%、蛋白質(zhì)占14.59%。連續(xù)飼養(yǎng)5周后，按每克大鼠體重35 μg的比例，腹腔注射鏈脲佐菌素。3 d后，檢測大鼠空腹血糖數(shù)值，若檢測結(jié)果>11.1 mmol/L，表示造模成功[5-7]。然后采取隨機(jī)數(shù)字表法，將大鼠分為模型組和黃芩苷組。測量大鼠體重，模型組按10 mL/（k·d）比例給予生理鹽水灌胃。黃芩苷組給予黃芩苷干預(yù)。參照唐彬等[8]對脂肪肝模型大鼠的用藥劑量，即按30 mg/（kg·d），將黃芩苷融入與模型組等量的生理鹽水中，為大鼠進(jìn)行灌胃治療。

1.2.3 標(biāo)本采集? 兩組大鼠連續(xù)飼養(yǎng)12周后，按每4克大鼠體重3 mL的比例，注射濃度為2%的戊巴比妥鈉對大鼠進(jìn)行麻醉。打開腹腔，從大鼠下腔靜脈取血。低溫條件下離心處理15 min后，進(jìn)行相關(guān)指標(biāo)的檢測。

1.3 觀察指標(biāo)

觀察指標(biāo)包括leptin和FFA檢測結(jié)果;炎癥因子水平檢測結(jié)果，包括IL-6、IL-18和TNF-α等;與FFA代謝相關(guān)血液指標(biāo)檢測結(jié)果，包括MALONYL-CoA、ACCa-se和FAS等。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法

采用SPSS20.0統(tǒng)計學(xué)軟件處理結(jié)果。計量資料以（x±s）表示，多組間比較行單因素方差分析，兩兩比較行t檢驗，P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組leptin和FFA檢測結(jié)果比較

見表1。黃芩苷組大鼠leptin和FFA檢測結(jié)果低于模型組，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。

2.2 兩組炎癥因子水平檢測比較

見表2。黃芩苷組大鼠IL-6、IL-18和TNF-α檢測結(jié)果低于模型組，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。

2.3 兩組與FFA代謝相關(guān)血液指標(biāo)檢測比較

見表3。黃芩苷組大鼠MALONYL-CoA、ACCa-se和FAS檢測結(jié)果低于模型組，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。

3 討論

在糖尿病合并非酒精性脂肪肝的臨床治療研究上，多以西醫(yī)治療為主，如利拉魯肽和吡格列酮等[9]，雖然可改善糖尿病合并非酒精性脂肪肝患者的相關(guān)檢測指標(biāo)，但由于糖尿病非酒精脂肪肝的治療是一個長期的治療過程，往往會逐漸增加肝、腎等臟器的工作負(fù)擔(dān)，且有一定的毒副作用，因此，尚無有效的治療措施和方法[10-12]。近年來，隨著我國傳統(tǒng)醫(yī)學(xué)的發(fā)展，中醫(yī)應(yīng)用日益廣泛。以黃芩苷為例，黃芩苷是從雙子葉唇形科植物黃芩的干燥根中提取分離出來的一種黃酮類化合物，黃色結(jié)晶，加醋酸鉛試液發(fā)生橘黃色沉淀[13]。其本身就有較強(qiáng)的抑菌、利尿、抗炎和降膽固醇等作用。隨著其相關(guān)研究的逐步深入，尤其在以大鼠為研究實驗對象，經(jīng)大量的實驗研究證實，黃芩苷更多的藥用價值被不斷的挖掘和發(fā)現(xiàn)[14]。

唐彬等[8]應(yīng)用黃芩苷對高脂-脂肪肝模型大鼠進(jìn)行干預(yù)。治療干預(yù)后，本組大鼠的TNF-α和IL-6等炎癥因子水平均明顯改善。劉長山等[13]選擇2型糖尿病大鼠為對象，造模成功后采取黃芩苷進(jìn)行治療。有效降低了大鼠瘦素等指標(biāo)的檢測結(jié)果。李紅山等[15]通過實驗研究證實，黃芩苷對脂肪肝大鼠游離脂肪酸的代謝具有良好的抑制作用，如FFA、AMPK和ACCa-se等指標(biāo)控制情況較為理想。

黃芩苷作用于大鼠后，對其瘦素、炎癥因子和游離脂肪酸等指標(biāo)均具有良好的改善作用。在檢驗醫(yī)學(xué)技術(shù)高速發(fā)展的背景下，越來越多的臨床資料證實，瘦素、炎癥因子和游離脂肪酸等指標(biāo)，與非酒精性脂肪肝的發(fā)生和發(fā)展具有明顯的對應(yīng)關(guān)系。如在瘦素方面，正常情況下，瘦素可使甘油三酯存儲在脂肪細(xì)胞中，具有調(diào)整非脂細(xì)胞的甘油三酯含量的作用。但當(dāng)瘦素作用出現(xiàn)障礙時，會影響以上過程，導(dǎo)致甘油三酯在肝臟中不斷聚集，從而導(dǎo)致非酒精性脂肪肝的發(fā)生;在炎癥因子方面，如以IL-6為例，體內(nèi)生成IL-6增多后，會抑制磷脂酰肌醇、葡萄糖轉(zhuǎn)運蛋白4和胰島素受體底物的表達(dá)，使胰島素受體后信號轉(zhuǎn)導(dǎo)異常，發(fā)生胰島素抵抗。胰島素抵抗后，帶來的直接結(jié)果如甘油三酯聚集和游離脂肪酸增多等，以上均是非酒精性脂肪肝的危險因素;在游離脂肪酸方面，血液中的游離脂肪酸是含C10以下的脂肪酸。游離脂肪酸升高后，超出肝臟細(xì)胞的攝取范圍，會促使其合成甘油三酯，從而發(fā)病。根據(jù)劉長山等[13]的研究結(jié)果，黃芩苷具有調(diào)節(jié)大鼠瘦素、炎癥因子和游離脂肪酸的作用。因此結(jié)合以上實驗成果和治療經(jīng)驗，我院將黃芩苷應(yīng)用于糖尿病合并非酒精脂肪肝大鼠的實驗研究中。試驗后發(fā)現(xiàn)，與未進(jìn)行藥物干預(yù)的模型組大鼠比較，黃芩苷組大鼠瘦素、炎癥因子和游離脂肪酸等檢驗結(jié)果均優(yōu)于后者，與劉長山等[13]的研究結(jié)果基本一致，證實了黃芩苷對糖尿病合并非酒精脂肪肝的大鼠具有較為理想的治療效果。

綜上所述，黃芩苷可以有效降低糖尿病合并非酒精脂肪肝的大鼠瘦素、炎癥因子和游離脂肪酸的水平。希望進(jìn)一步加強(qiáng)深入的研究和推廣，為黃芩苷的臨床應(yīng)用打下良好基礎(chǔ)。

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（收稿日期：2020-02-05）