王晶瑤，趙 巖，蔡恩博，祝洪艷，李平亞，劉金平

(1.吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)中藥材學(xué)院, 吉林 長(zhǎng)春 130118; 2.吉林大學(xué)藥學(xué)院新藥研究室, 吉林 長(zhǎng)春 130021)

睡眠是人體十分重要的生理功能。隨著社會(huì)競(jìng)爭(zhēng)的加劇，人們的壓力越來(lái)越大，熬夜的人群數(shù)量逐年遞增，失眠已經(jīng)十分普遍。睡眠亞健康狀態(tài)嚴(yán)重地影響著人們的生活質(zhì)量和身體健康。近年來(lái)，隨著失眠患者數(shù)量的增多和人們自我保健意識(shí)的建立，鎮(zhèn)靜催眠藥的需求量已經(jīng)逐年增加。西醫(yī)的鎮(zhèn)靜催眠藥物存在較多不良反應(yīng)，如依賴性、成癮性和戒斷癥狀等[1]，因而其應(yīng)用受到限制。近年來(lái)研究[2]顯示：許多天然藥物(中藥復(fù)方、中藥提取物及中藥活性成分)具有良好的鎮(zhèn)靜催眠作用，而且不良反應(yīng)少，具有良好的開發(fā)利用價(jià)值，現(xiàn)已經(jīng)成為尋找潛在天然鎮(zhèn)靜催眠藥物的重要選擇。

五加科(Araliaceae)藥用植物刺五加[Acanthopanaxsenticosu(Rupr.et Maxim.) Harms]，也稱為“西伯利亞人參”，別名五加參、刺拐棒，為多年生落葉灌木，其根、莖、葉、皮和果實(shí)均可入藥[3]。研究[4]顯示：刺五加含有多種活性成分，自身毒性弱且不良反應(yīng)少，在全球醫(yī)學(xué)界的應(yīng)用已得到廣泛關(guān)注?，F(xiàn)代藥理學(xué)研究[5-12]表明：刺五加葉具有血小板聚集、抗炎和α-葡萄糖苷酶抑制活性，刺五加根具有抗疲勞作用，刺五加莖皮具有抗胃潰瘍作用，刺五加果具有抗疲勞和降血脂活性，但是關(guān)于刺五加資源的應(yīng)用主要是集中在其根、莖和葉部分，而有關(guān)刺五加果的藥理作用報(bào)道較少，以刺五加果為原料開發(fā)的產(chǎn)品較早是以藥酒的形式出現(xiàn)，到目前為止以刺五加果為原料開發(fā)的產(chǎn)品多為刺五加果酒和飲料等[13]。有研究[14-16]顯示：刺五加果提取物中含有多種人體必需微量元素、全部必需氨基酸、葡萄糖和果糖等單寡糖以及皂苷、維生素C等多種對(duì)機(jī)體有益的成分。也有研究[17]顯示：刺五加果口服液具有延長(zhǎng)戊巴比妥鈉睡眠時(shí)間、縮短戊巴比妥鈉睡眠潛伏期及協(xié)同閾下劑量戊巴比妥鈉催眠的功效，提示刺五加果具有鎮(zhèn)靜催眠的作用，但其作用機(jī)制尚不清楚。為促進(jìn)刺五加果的開發(fā)和利用，本研究利用刺五加果水提物(Acanthopanaxsenticosusfruit water extract,ASF-WE)和刺五加果醇提物(Acanthopanaxsenticosusfruit alcohol extract,ASF-AE)與5-羥色氨酸(5-hydroxytryptophan，5-HTP)、氟馬西尼(flumazenil，F(xiàn)LU)的聯(lián)合給藥實(shí)驗(yàn)、ASF-WE和ASF-AE改善對(duì)氯苯丙氨酸(parachloropheny lalanine，pCPA)誘導(dǎo)失眠小鼠的睡眠實(shí)驗(yàn)及觀察小鼠腦內(nèi)海馬區(qū)神經(jīng)遞質(zhì)水平的變化，初步考察ASF-WE和ASF-AE的鎮(zhèn)靜催眠機(jī)制，為以刺五加果為原料的保健食品和藥品的研發(fā)提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物、主要試劑和儀器

ICR雄性小鼠，體質(zhì)量18～22 g，由長(zhǎng)春億斯實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)有限公司提供，動(dòng)物生產(chǎn)許可證號(hào)：SCXK (吉) 2016-0003。小鼠在標(biāo)準(zhǔn)實(shí)驗(yàn)室條件下(溫度25℃±2℃，相對(duì)濕度60%±5%，12 h光/12 h暗循環(huán))飼養(yǎng)，飼養(yǎng)期間隨意飲水?dāng)z食；馴化1周后，將所有小鼠隨機(jī)分為不同實(shí)驗(yàn)組。刺五加果實(shí)采自吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)藥用植物園，經(jīng)韓忠明副教授鑒定為五加科五加屬刺五加的果實(shí)，陰干備用。地西泮(diazepam，DZP)由太原振興制藥有限公司提供，戊巴比妥鈉購(gòu)于上海默克化工技術(shù)有限公司，F(xiàn)LU注射劑由海南靈康制藥有限公司生產(chǎn)， pCPA和5-HTP均購(gòu)自大連美隆藥業(yè)有限公司，ELISA試劑盒購(gòu)自南京建成生物工程研究所。JA2003J電子天平購(gòu)于上海舜宇恒平科學(xué)儀器有限公司，Avanti TM J-3OI冷凍離心機(jī)購(gòu)于海南赫敏儀器有限公司，Spectra MAX 190酶標(biāo)儀購(gòu)于上海美谷分子儀器有限公司，DY89-1電動(dòng)玻璃勻漿機(jī)購(gòu)于寧波新芝生物科技股份有限公司，ZZ-6小鼠自主活動(dòng)測(cè)試儀購(gòu)于成都泰盟軟件有限公司。

1.2 ASF-WE和ASF-AE的制備

ASF-WE：干燥的刺五加果樣品粉碎(過(guò)40目篩)，取200 g加蒸餾水浸泡過(guò)夜，10倍量蒸餾水100℃蒸煮3次，每次1 h，過(guò)濾，合并濾液，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀減壓濃縮后置于水浴鍋60°C蒸發(fā)至稠膏，即得水提浸膏，得率為22.3 %，按照參考文獻(xiàn)[18]中方法，測(cè)定ASF-WE總黃酮含量為4.50 %，總皂苷含量為2.65 %。

ASF-AE：干燥的刺五加果樣品粉碎(過(guò)40目篩)，取200 g加95%乙醇浸泡過(guò)夜，10倍量95%乙醇超聲波輔助(頻率100 Hz，溫度30℃)提取3次，每次1 h，過(guò)濾，合并濾液，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀減壓濃縮后置水浴鍋60℃蒸發(fā)至稠膏，即得醇提浸膏，得率為6.8%，按照參考文獻(xiàn)[18]中方法，測(cè)定ASF-AE總黃酮含量為6.21%，總皂苷含量為3.79%。

1.3 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分組及給藥

1.3.1 自主活動(dòng)儀測(cè)定小鼠自主活動(dòng)次數(shù) 雄性ICR小鼠120只，適應(yīng)性飼養(yǎng)1周后，隨機(jī)分為空白對(duì)照組、陽(yáng)性對(duì)照(DZP)組、不同劑量(4、8、16、32和64 mg·kg-1)ASF-WE組和不同劑量(4、8、16、32和64 mg·kg-1)ASF-AE組。藥物以蒸餾水配置成相應(yīng)濃度的藥液，各給藥組小鼠每日灌胃給予相應(yīng)劑量的藥物，給藥量為0.1 mL·10 g-1；空白對(duì)照組小鼠給予等體積的蒸餾水，每天1次，連續(xù)給藥5 d；DZP組小鼠灌胃給予等體積生理鹽水，連續(xù)給予4 d，第5天一次性灌胃給予3 mg·kg-1DZP，給藥量為0.1 mL·10 g-1。末次給藥30 min后，將各組小鼠放置于自主活動(dòng)記錄儀中，先適應(yīng)10 min，再開始記錄，記錄各組小鼠5 min內(nèi)的自主活動(dòng)次數(shù)[19]。在每次測(cè)量結(jié)束時(shí)，用75%酒精徹底清洗自主活動(dòng)記錄儀外殼，以避免對(duì)下一只小鼠活動(dòng)產(chǎn)生影響。

1.3.2 測(cè)定ASF-WE和ASF-AE協(xié)同閾下劑量戊巴比妥鈉誘導(dǎo)小鼠睡眠實(shí)驗(yàn)中小鼠入睡率 分組及給藥方法同“1.3.1”，末次給藥前8 h小鼠禁食不禁水，末次給藥30 min后，各組小鼠分別腹腔注射閾下劑量戊巴比妥鈉(使90%～100%小鼠翻正反射不消失的最大劑量，預(yù)實(shí)驗(yàn)測(cè)定最大劑量為28 mg·kg-1)。在30 min內(nèi)小鼠翻正反射消失達(dá)到1 min以上者視為發(fā)生睡眠現(xiàn)象，記錄睡眠小鼠數(shù)量。

1.3.3 測(cè)定ASF-WE和ASF-AE協(xié)同催眠劑量戊巴比妥鈉誘導(dǎo)小鼠睡眠實(shí)驗(yàn)中小鼠睡眠潛伏期和睡眠時(shí)間 分組及給藥方法同“1.3.1”，末次給藥前8 h禁食不禁水，末次給藥30 min后，各組小鼠分別腹腔注射催眠劑量戊巴比妥鈉(使100% 小鼠入睡最小劑量，預(yù)實(shí)驗(yàn)測(cè)定最小劑量為48 mg·kg-1)。以小鼠從腹腔注射戊巴比妥鈉到翻正反射消失的這段時(shí)間作為睡眠潛伏期，而翻正反射消失至恢復(fù)的時(shí)間作為小鼠的睡眠時(shí)間[20]，觀察并記錄小鼠睡眠潛伏期和睡眠持續(xù)時(shí)間。

1.3.4 測(cè)定亞催眠劑量ASF-WE和ASF-AE與5-HTP協(xié)同誘導(dǎo)小鼠睡眠實(shí)驗(yàn)中小鼠睡眠潛伏期和睡眠時(shí)間 ASF-WE和ASF-AE的亞催眠劑量為 8 mg·kg-1，由“1.3.1～1.3.3”實(shí)驗(yàn)確定。雄性ICR小鼠40只，適應(yīng)性飼養(yǎng)1周后隨機(jī)分為4組，每組10只，分別為空白對(duì)照組、5-HTP組、ASF-WE(8 mg·kg-1)+5-HTP組和ASF-AE(8 mg· kg-1)+5-HTP組。各組小鼠每日灌胃給予相應(yīng)劑量的藥物，給藥量為0.1 mL·10 g-1，空白對(duì)照組和5-HTP組小鼠給予等體積蒸餾水，每天1次，連續(xù)給藥5 d。末次給藥前8 h禁食不禁水，末次給藥30 min后，除空白對(duì)照組外各組小鼠分別給予5-HTP(2.5 mg·kg-1，腹腔注射)，間隔15 min后，再給予各組小鼠催眠劑量的戊巴比妥鈉(48 mg·kg-1，腹腔注射)，觀察并記錄各組小鼠睡眠潛伏期和睡眠持續(xù)時(shí)間[21]。

1.3.5 測(cè)定催眠劑量ASF-WE和ASF-AE改善pCPA誘導(dǎo)的失眠小鼠睡眠實(shí)驗(yàn)中小鼠睡眠潛伏期和睡眠時(shí)間 由“1.3.1～1.3.3”實(shí)驗(yàn)確定ASF-WE和ASF-AE的催眠劑量為32 mg· kg-1。雄性ICR小鼠40只，適應(yīng)性飼養(yǎng)1周后，隨機(jī)分為4組，每組10只，分別為空白對(duì)照組、pCPA組、ASF-WE(32 mg· kg-1)+pCPA組和ASF-AE(32 mg· kg-1)+pCPA組。ASF-WE+pCPA組和ASF-AE+pCPA組小鼠每日上午灌胃給予相應(yīng)劑量藥物，每天1次，連續(xù)給藥5 d；下午腹腔注射pCPA(100 mg·kg-1)，每天1次，連續(xù)給藥4 d。pCPA組小鼠每日腹腔注射pCPA(100 mg·kg-1)，每天1次，連續(xù)給藥4 d；空白對(duì)照組小鼠給予等量蒸餾水，每天1次，連續(xù)給藥5 d；各組小鼠給藥量均為0.1 mL·10 g-1。末次給藥前8 h禁食不禁水，末次給藥30 min后，各組小鼠給予催眠劑量的戊巴比妥鈉(48 mg·kg-1，腹腔注射)，觀察并記錄各組小鼠睡眠潛伏期和睡眠持續(xù)時(shí)間[22]。

1.3.6 測(cè)定催眠劑量ASF-WE和ASF-AE改善FLU誘導(dǎo)的失眠小鼠睡眠實(shí)驗(yàn)中小鼠睡眠潛伏期和睡眠時(shí)間 雄性ICR小鼠80只，適應(yīng)性飼養(yǎng)1周后，隨機(jī)分成8組，每組10只，分別為空白對(duì)照組、FLU組、DZP組、ASF-WE(32 mg·kg-1)組、ASF-AE(32 mg·kg-1)組、 DZP+FLU組、ASF-WE(32 mg·kg-1)+FLU組和ASF-AE(32 mg·kg-1)+FLU組。各給藥組小鼠每日灌胃給予相應(yīng)劑量的藥物；空白對(duì)照組和FLU組小鼠給予等體積蒸餾水，每天1次，連續(xù)給藥5 d；DZP組小鼠灌胃給予等體積生理鹽水，連續(xù)給予4 d，第5天一次性灌胃給予DZP(3 mg·kg-1)；各組小鼠給藥量均為0.1 mL·10 g-1。末次給藥前8 h禁食不禁水，末次給藥30 min后，F(xiàn)LU組和各聯(lián)合給藥組小鼠分別腹腔注射FLU(8 mg·kg-1)，間隔15 min后，各組小鼠給予催眠劑量的戊巴比妥鈉(48 mg·kg-1，腹腔注射)，觀察并記錄各組小鼠睡眠潛伏期和睡眠持續(xù)時(shí)間。

1.3.7 ELISA法檢測(cè)各組小鼠大腦海馬組織中5-羥色胺(5-hydroxytryptamine,5-HT)和γ-氨基丁酸(γ-amino butyric acid,GABA)水平 行為學(xué)實(shí)驗(yàn)后，立刻同一時(shí)間斷頸處死小鼠，在冰盤上解剖分離小鼠大腦海馬組織，用冰涼生理鹽水沖洗海馬組織，勻漿，4℃、12 000 r·min-1離心10 min，收集上清液，采用ELISA法并按照試劑盒說(shuō)明書操作，檢測(cè)小鼠海馬組織中5-HT和GABA水平，盡量在同一時(shí)間同一條件下檢測(cè)。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

2 結(jié) 果

2.1 各組小鼠自主活動(dòng)次數(shù)

與空白對(duì)照組比較，DZP組小鼠自主活動(dòng)次數(shù)明顯減少(P<0.01)，32、64 mg·kg-1ASF-WE組和16、32、64 mg·kg-1ASF-AE組小鼠自主活動(dòng)次數(shù)不同程度減少(P<0.05或P<0.01)，32 mg·kg-1ASF-WE組和32 mg·kg-1ASF-AE組小鼠自主活動(dòng)次數(shù)明顯減少(P<0.01)。見表1。

表1 各組小鼠自主活動(dòng)次數(shù)

2.2 戊巴比妥鈉誘導(dǎo)正常小鼠睡眠實(shí)驗(yàn)中各組小鼠入睡率、睡眠潛伏期和睡眠時(shí)間

給予各組小鼠亞催眠劑量戊巴比妥鈉后，與空白對(duì)照組比較， 16、32、64 mg·kg-1ASF-WE組和8、16、32、64 mg·kg-1ASF-AE組小鼠入睡率有不同程度增加，且呈一定的劑量依賴性。見表2。當(dāng)給予各組小鼠催眠劑量戊巴比妥鈉后，與空白對(duì)照組比較，16、32、64 mg·kg-1ASF-WE組和16、32、64 mg·kg-1ASF-AE組小鼠睡眠潛伏期縮短(P<0.05或P<0.01)，睡眠持續(xù)時(shí)間延長(zhǎng)(P<0.05或P<0.01)，且呈一定的劑量依賴性。32 mg·kg-1ASF-WE組和32 mg· kg-1ASF-AE組小鼠入睡潛伏期明顯縮短(P<0.01)，小鼠睡眠時(shí)間明顯延長(zhǎng)(P<0.01)，故確定該劑量為催眠劑量；而ASF-WE和ASF-AE在8 mg·kg-1劑量以下各組小鼠，無(wú)論是睡眠潛伏期還是睡眠時(shí)間均無(wú)明顯改變，故確定該劑量為亞催眠劑量。見表3。

表2 給予亞催眠劑量戊巴比妥鈉后各組小鼠入睡率

表3 催眠劑量戊巴比妥鈉誘導(dǎo)小鼠睡眠實(shí)驗(yàn)中各組小鼠睡眠潛伏期和睡眠時(shí)間

2.3 5-HTP誘導(dǎo)小鼠睡眠實(shí)驗(yàn)中各組小鼠睡眠潛伏期和睡眠時(shí)間

為了確定ASF-WE和ASF-AE的催眠作用是否與5-HT能神經(jīng)系統(tǒng)有關(guān)，分別采用亞催眠劑量(8 mg·kg-1)ASF-WE和ASF-AE與亞有效劑量5-HTP(2.5 mg· kg-1)進(jìn)行聯(lián)合給藥實(shí)驗(yàn)，結(jié)果顯示：與空白對(duì)照組和5-HTP組比較，ASF-WE+5-HTP組和ASF-AE+5-HTP組小鼠睡眠潛伏期明顯縮短(P<0.01)，睡眠時(shí)間明顯延長(zhǎng)(P<0.01)。見表4。

表4 5-HTP誘導(dǎo)小鼠睡眠實(shí)驗(yàn)中各組小鼠睡眠潛伏期和睡眠時(shí)間

2.4 pCPA誘導(dǎo)失眠小鼠睡眠實(shí)驗(yàn)中各組小鼠睡眠潛伏期和睡眠時(shí)間

與空白對(duì)照組比較， pCPA組小鼠睡眠潛伏期明顯延長(zhǎng)(P<0.01)，睡眠時(shí)間明顯縮短(P<0.01)，表明失眠模型成功建立。與pCPA組比較， ASF-WE+pCPA組和ASF-AE+pCPA組小鼠睡眠潛伏期明顯縮短(P<0.05)，睡眠時(shí)間明顯延長(zhǎng)(P<0.01)。見表5。

表5 pCPA誘導(dǎo)失眠小鼠睡眠實(shí)驗(yàn)中各組小鼠睡眠潛伏期和睡眠時(shí)間

2.5 FLU誘導(dǎo)失眠小鼠睡眠實(shí)驗(yàn)中各組小鼠睡眠潛伏期和睡眠時(shí)間

與空白對(duì)照組比較，F(xiàn)LU組小鼠睡眠潛伏期明顯延長(zhǎng)(P<0.01)，睡眠時(shí)間明顯縮短(P<0.05)；與FLU組比較，DZP+FLU組、ASF-WE+FLU組和ASF-AE+FLU組小鼠睡眠潛伏期明顯縮短(P<0.05或P<0.01)，睡眠潛伏期明顯延長(zhǎng)(P<0.01)；與DZP組比較，DZP+FLU組小鼠睡眠潛伏期明顯延長(zhǎng)(P<0.05)，睡眠時(shí)間明顯縮短(P<0.01)。與ASF-WE組比較，ASF-WE+FLU組小鼠睡眠潛伏期明顯延長(zhǎng)(P<0.05)，睡眠時(shí)間明顯縮短(P<0.01)。與ASF-AE組比較，ASF-AE+FLU組小鼠睡眠潛伏期雖有延長(zhǎng)，但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，而睡眠時(shí)間明顯縮短(P<0.01)。見表6。

表6 FLU誘導(dǎo)失眠小鼠睡眠實(shí)驗(yàn)中各組小鼠睡眠潛伏期和睡眠時(shí)間

2.6 各組小鼠海馬組織中5-HT和GABA水平

與空白對(duì)照組比較，5-HTP(2.5 mg·kg-1)組、ASF-WE(8 mg·kg-1)組和ASF-AE(8 mg·kg-1)組小鼠海馬組織中5-HT水平無(wú)明顯變化(P>0.05)；與5-HTP組比較，ASF-WE+5-HTP組和ASF-AE+5-HTP組小鼠海馬組織中5-HT水平明顯升高(P<0.05)。見圖1A。

與空白對(duì)照組比較，pCPA(100 mg·kg-1)組小鼠海馬組織中5-HT水平明顯降低(P<0.05)；與pCPA組比較，ASF-WE(32 mg·kg-1)+pCPA組和ASF-AE(32 mg·kg-1)+pCPA組小鼠海馬組織中5-HT水平明顯升高(P<0.05或P<0.01)。見圖1B。

與空白對(duì)照組比較，ASF-WE(32 mg·kg-1)組和ASF-AE(32 mg·kg-1)組小鼠海馬組織中GABA水平明顯升高(P<0.05)；與ASF-WE組和ASF-AE組比較，ASF-WE+FLU組和ASF-AE+FLU組小鼠海馬組織中GABA水平均明顯降低(P<0.05)。見圖1C。

A: 5-HT level (*P<0.05 vs blank control group; △P<0.05 vs 5-HTP group); B:5-HT level(*P<0.05, **P<0.01 vs blank control group; △P<0.05, △△P<0.01 vs pCPA group);C: GABA level(*P<0.05 vs blank control group; △P<0.05 vs ASF-WE group;#P<0.05 vs ASF-AE group).

3 討 論

本文作者通過(guò)小鼠自主活動(dòng)實(shí)驗(yàn)、激動(dòng)劑拮抗劑聯(lián)合給藥實(shí)驗(yàn)及對(duì)海馬區(qū)相關(guān)神經(jīng)遞質(zhì)影響實(shí)驗(yàn)，評(píng)價(jià)ASF-WE和ASF-AE的鎮(zhèn)靜催眠活性，并探討了其初步作用機(jī)制。

中樞神經(jīng)系統(tǒng)興奮性降低時(shí)，小鼠自主活動(dòng)將減弱，小鼠的自主活動(dòng)性通常作為評(píng)價(jià)試驗(yàn)藥物是否具有鎮(zhèn)靜作用的指標(biāo)[23]。戊巴比妥鈉誘導(dǎo)睡眠實(shí)驗(yàn)以小鼠入睡率、入睡潛伏期和睡眠持續(xù)時(shí)間作為評(píng)價(jià)試驗(yàn)藥物與戊巴比妥鈉的協(xié)同催眠作用效應(yīng)指標(biāo)[24]。本研究結(jié)果表明：ASF-WE和ASF-AE均能明顯減少小鼠自主活動(dòng)次數(shù)，提高催眠劑量戊巴比妥鈉誘導(dǎo)睡眠的小鼠入睡率，縮短小鼠入睡潛伏期，延長(zhǎng)睡眠持續(xù)時(shí)間，發(fā)揮鎮(zhèn)靜催眠作用，并且ASF-AE的鎮(zhèn)靜催眠作用一定程度上優(yōu)于ASF-WE。研究[25]顯示：刺五加中的異嗪皮啶可能是其發(fā)揮鎮(zhèn)靜催眠作用的主要有效成分，而異嗪皮啶作為香豆素類有機(jī)小分子，更易溶于乙醇而難溶于水，這可能是刺五加果在鎮(zhèn)靜催眠方面ASF-AE優(yōu)于ASF-WE的原因之一。

腦內(nèi)有多種中樞神經(jīng)遞質(zhì)參與個(gè)體的精神活動(dòng)，其中5-HT是調(diào)節(jié)機(jī)體睡眠的主要神經(jīng)遞質(zhì)之一，直接或間接地參與睡眠-覺醒系統(tǒng)的功能。5-HTP可以在5-羥色胺脫羧酶作用下產(chǎn)生5-HT，提高腦組織中5-HT水平，研究[26]證實(shí)：小鼠注射5-HTP后腦組織中5-HT水平明顯升高，可緩解失眠癥狀，提高睡眠質(zhì)量。而pCPA是色氨酸羥化酶的抑制劑，可阻斷5-HT的合成，降低5-HT水平，從而縮短小鼠的睡眠時(shí)間[27]。本研究結(jié)果顯示：亞催眠劑量的ASF-WE和ASF-AE均可與5-HT前體物質(zhì)5-HTP發(fā)揮協(xié)同作用，使小鼠海馬組織中5-HT水平升高，進(jìn)而促進(jìn)小鼠的睡眠；進(jìn)一步結(jié)合刺五加果提取物可改善由pCPA引起的小鼠失眠現(xiàn)象的實(shí)驗(yàn)結(jié)果推測(cè)：ASF-WE和ASF-AE的鎮(zhèn)靜催眠作用與5-HT能神經(jīng)系統(tǒng)有密切關(guān)聯(lián)，其機(jī)制尚待進(jìn)一步深入研究。

除5-HT外，GABA是與調(diào)節(jié)睡眠相關(guān)的另一種重要的神經(jīng)遞質(zhì)。作為中樞神經(jīng)系統(tǒng)內(nèi)最重要的抑制性神經(jīng)遞質(zhì)，GABA維持著腦內(nèi)興奮抑制的平衡，其水平低下時(shí)會(huì)導(dǎo)致其腦內(nèi)抑制功能不足，引起頭痛、焦慮、緊張不安和暴躁易怒等[28]。GABA可通過(guò)與GABA A型受體(GABAA)結(jié)合，導(dǎo)致大量Cl-內(nèi)流，引起細(xì)胞膜超極化使神經(jīng)元興奮性降低，發(fā)揮鎮(zhèn)靜催眠作用[29]。DZP作為一種具有代表性的鎮(zhèn)靜催眠藥，通過(guò)與GABAA-苯二氮卓類(BZD)受體結(jié)合釋放GABA，調(diào)節(jié)睡眠；相反，F(xiàn)LU作為一種特異性BZD拮抗劑，能有效誘導(dǎo)小鼠失眠[30]。本研究結(jié)果表明：FLU可抑制ASF-WE和ASF-AE的催眠作用，并可阻斷其對(duì)小鼠海馬組織中GABA水平的提升作用，說(shuō)明ASF-WE和ASF-AE的鎮(zhèn)靜睡眠作用與GABA能系統(tǒng)也有密切關(guān)聯(lián)。

綜上所述，ASF-WE和ASF-AE均有良好的鎮(zhèn)靜催眠效果，并初步推測(cè)其鎮(zhèn)靜催眠作用與5-HT能和GABA能中樞神經(jīng)系統(tǒng)有關(guān)。本研究為促進(jìn)刺五加果的開發(fā)，實(shí)現(xiàn)刺五加資源的綜合利用提供了科學(xué)依據(jù)。