張國良，張富強，鐘展華，嚴(yán)鳳好

（廣東省惠州市中心血站，惠州 516003）

血液安全是輸血界面臨的主要難題，核酸檢測是目前公認能減低窗口期及低病毒載量血液感染的有效方法之一，2019版 《血站技術(shù)操作規(guī)程》已明確規(guī)定，采供血機構(gòu)可以采用一遍酶免一遍核酸的方法對獻血者血液進行檢測，但如何選擇合適的酶免試劑是各采供血機構(gòu)實驗室需謹慎考慮的問題。本研究通過對本站獻血者血清學(xué)和核酸檢測的結(jié)果進行回顧性分析，旨在為酶免及核酸試劑的合理選擇提供理論依據(jù)，現(xiàn)報道如下。

1 材料與方法

1．1材料 惠州市中心血站2016年3月-2018年12月無償獻血者標(biāo)本共193634份，年齡18-60歲，外采體檢合格，HBsAg初篩陰性，血紅蛋白（硫酸銅比重法）達標(biāo)。每位獻血這留取EDTA-K2抗凝管2管 （1管無分離膠用于血清血檢測，1管有分離膠用于核酸檢測），核酸標(biāo)本采集后4h內(nèi)離心（3000g15min）,并于72h內(nèi)完成各項檢測，不能完成的，置于-20℃保存不超過7d。試劑 ：ALT（邁瑞），HBsAg（新創(chuàng)，萬泰），抗-HCV（萬泰，Ortho），抗-HIV（萬泰，Sorin），抗-TP（萬泰，科華），HTLV（萬泰），核酸HBV/HCV/HIV1三聯(lián)檢測試劑及多項拆分試劑（華益美）。所有試劑均在有效期內(nèi)使用。儀器 ：BS420生化分析儀（邁瑞），STAR全自動加樣儀 （瑞士HAMILTON），F(xiàn)AME24/20全自動酶免分析儀（瑞士HAMILTON），340RT酶標(biāo)儀（瑞士ANTHON），Ampli STAR全自動核酸提取儀 （瑞士HAMILTON）,ABI7500熒光定量PCR擴增儀（美國ABI）。所有使用的儀器設(shè)備均按要求保養(yǎng)維護，在正常狀態(tài)下工作運轉(zhuǎn)。

1．2 方法 按要求對標(biāo)本進行離心處理后，分別用兩個不同廠家試劑、不同加樣器和酶免處理系統(tǒng)對HBsAg,抗-HCV,抗-HIV,抗-TP 4個項目進行初復(fù)檢酶免檢測，HTLV只做1遍，按試劑說明書和實驗室SOP進行操作。結(jié)果為反應(yīng)性的標(biāo)本剪血辮雙孔復(fù)查，復(fù)查任一孔有反應(yīng)性判陽性，雙孔陰性判判陰性。ALT用全自動生化分析儀檢測 （速率法），檢測值>50 U/L需復(fù)查，復(fù)查值仍超過50判為異常。核酸檢測：采用8人份混樣的檢測模式對酶免雙陰性和單試劑陽性的標(biāo)本進行HBV-DNA、HCV-RNA、HIV-1 RNA三聯(lián)核酸檢測，混檢無反應(yīng)性判核酸陰性，有反應(yīng)性的標(biāo)本需進行拆分鑒別，拆分有反應(yīng)性判該項陽性。

1．3 統(tǒng)計分析 采用SPSS19.0統(tǒng)計軟件進行分析，按檢驗水準(zhǔn)a=0.05進行卡方檢驗。

2 結(jié)果

2.1 血清學(xué)檢測情況 2016年3月-2018年12月共檢測無償獻血標(biāo)本193634份，血清學(xué)檢出不合格16055例，總體不合格率為8.29%，年度間不合格率有統(tǒng)計學(xué)意義。6項指標(biāo)各年度不合格檢出率差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05），見表1。

表1 2016年3月-2018年12月惠州市無償獻血者血清學(xué)檢測結(jié)果比較[例（%）]

2.2 核酸檢測情況 近3年時間共對188648份酶免陰性及單試劑反應(yīng)性標(biāo)本進行核酸8人份混樣檢測，拆分出324份陽性標(biāo)本，拆分陽性率為57.0%，總體陽性率為0.17%，且有逐年上升趨勢。見表2。

表2 2016年3月-2018年12月惠州市無償獻血者核酸檢測結(jié)果比較

2.3 血清學(xué)陰性及單試劑反應(yīng)性標(biāo)本核酸檢測結(jié)果 在核酸拆分陽性的324份標(biāo)本中，有31份是血清學(xué)單試劑陽性，其中HCV-RNA 3份，HIVRNA 2份，HBV-DNA 26份；血清學(xué)陰性標(biāo)本中拆分出的293份均為HBV-DNA陽性，未檢出HCVRNA和HIV-RNA陽性標(biāo)本 。見表3。

表3 血清學(xué)陰性與單試劑反應(yīng)性標(biāo)本核酸檢測情況

3 討論

血液篩查是減少輸血相關(guān)病毒傳播的主要途徑，血清學(xué)方法在很長一段時間發(fā)揮重要作用，但由于病毒亞型、病毒變異、免疫沉默式感染等原因，血清學(xué)試劑窗口期引起的漏檢現(xiàn)象仍無法解決[1,2]。隨著檢測技術(shù)的不斷更新、發(fā)展，新的技術(shù)應(yīng)運而生，核酸檢測在縮短窗口期方面的作用也得到了肯定，國家衛(wèi)健委要求在2016起年全國開始實施核酸血篩，血清學(xué)與核酸聯(lián)合檢測被公認為目前最佳的血液篩查模式[3]。

從本中心血站2016年3月-2018年12月的檢測數(shù)據(jù)看來，這幾年的血清學(xué)總不合格率維持在一個相對穩(wěn)定的水平，ALT異常仍然是血液報廢的主要原因，異常率超過5%，為減少血液浪費，有必要在獻血前對獻血者進行ALT篩查。已有的研究表明，HTLV在其它國家沿海地區(qū)有較高的流行率[4]，為了得到我國人群的分布資料，廣東省被列為抽檢省份，對獻血者進行篩查。從本站的篩查結(jié)果來看，陽性率為6/萬，送廣州血液中心確診陽性率約為2/10萬，全省的流行率大致相同，是否有必要繼續(xù)篩查有待大數(shù)據(jù)的收集分析及進一步探討。HBsAg和抗-HCV的陽性率在2018年略有下降，究其原因，HBsAg在2017年底更換過一種試劑，新試劑假陽性率有所降低；抗-HCV試劑沒換，但廠家建議在加樣后進行震蕩混勻再放入酶免系統(tǒng)處理，假陽性率也得到了一定的改善?？?HIV的確診陽性數(shù)則有逐年增加的趨勢，可能與人群中的感染率上升有關(guān)。鑒于酶免試驗各環(huán)節(jié)容易受到干擾因素的影響，單試劑反應(yīng)性標(biāo)本中有相當(dāng)部分是假陽性，這一點已成為各實驗室的共識[5]，由此而造成合格獻血者的無辜被淘汰及對血源招募產(chǎn)生的不良影響也越來越受到重視，因此有必要出臺制定合理的獻血者風(fēng)險評估及重新歸隊策略，以減少獻血者流失。

核酸檢測的188648份標(biāo)本中，匯集反應(yīng)性568份，拆分出324份，拆分陽性率57.0%，高于田耘博報道的37%[6]，和程衛(wèi)芳報道的59%[7]接近，這可能與不同實驗室所選的試劑和核酸檢測系統(tǒng)不同有。有研究表明，經(jīng)超濃縮處理后，HCV、HBV病毒含量可提高至原來的4.7±1.43和5.92±1.98倍，對于核酸檢測的靈敏度和鑒別陽性率的提高有一定幫助[8]。本站核酸總體的陽性率為0.17%，高于南京[9]、重慶[6]等地區(qū)，與安徽[10]比較接近，但低于江西撫州[11,12]，主要是HBV陽性，廣東是乙肝高發(fā)地區(qū)，人群中的病毒攜帶者較高，且由于病毒變異和隱匿性乙肝感染（OBI），部分感染者的血清學(xué)標(biāo)志物濃度較低難以檢出，核酸檢測是很好的補充手段。雖然本站實施的是酶免單陽和陰性的標(biāo)本才做核酸的檢測策略，但是，我們在工作中也發(fā)現(xiàn)，有的酶免試劑雙陽性的標(biāo)本拿去做核酸單拆，結(jié)果卻是陰性的。無論是酶免檢測的假陽性還是核酸檢測的假陰性，這都提示了核酸檢測不能替代血清學(xué)檢測，兩者在降低輸血相關(guān)病毒感染風(fēng)險中的作用應(yīng)該不是簡單的互補[5]。在合理選擇篩查方法的基礎(chǔ)上，對獻血者進行必要的追蹤、采取進一步實驗室確診手段，制定適宜的屏蔽與歸隊策略都是保證血液安全的重要舉措。