王松迪

(赤峰學(xué)院附屬醫(yī)院麻醉科，內(nèi)蒙古 赤峰 024000)

在急性心肌梗死的溶栓治療及心臟復(fù)蘇、心臟移植等臨床手術(shù)過程中，極易發(fā)生心肌缺血再灌注損傷，使心肌梗死面積增加，心肌細(xì)胞凋亡，引發(fā)心肌炎、心律失常等并發(fā)癥，嚴(yán)重?fù)p傷心功能，嚴(yán)重時(shí)患者可因心力衰竭而死亡，嚴(yán)重?fù)p害居民身心健康及生活質(zhì)量，因此，尋找有效的治療方法減輕心肌缺血再灌注損傷具有重大的臨床意義[1]。細(xì)胞自噬是降解并循環(huán)利用自身各種物質(zhì)的生理過程，在心肌缺血再灌注損傷中具有重要的調(diào)控作用，在心肌再灌注階段，細(xì)胞的過度自噬可導(dǎo)致心肌細(xì)胞凋亡，是造成心肌損傷的主要原因[2]。抑制心肌細(xì)胞的過度自噬，可減輕心肌梗死，保護(hù)心肌組織免于損傷[3]。研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，麻醉藥右美托咪定可抑制海馬神經(jīng)元自噬，進(jìn)而減輕創(chuàng)傷性腦損傷大鼠的腦損傷，恢復(fù)其神經(jīng)功能[4]； 另外，以右美托咪定預(yù)處理缺血再灌注肺損傷大鼠，可降低肺細(xì)胞自噬作用，抑制其凋亡，對(duì)肺組織起到保護(hù)作用[5]。因此，預(yù)測右美托咪定可能通過抑制心肌細(xì)胞自噬而減輕心肌缺血再灌注損傷。PI3K/Akt是機(jī)體調(diào)控細(xì)胞自噬過程的主要信號(hào)通路，使其磷酸化激活可上調(diào)下游信號(hào)分子mTOR表達(dá)，進(jìn)而抑制細(xì)胞自噬[6]。PI3K/Akt信號(hào)亦可調(diào)控心肌缺血再灌注損傷，七氟醚即可通過激活該通路對(duì)大鼠心肌組織起到保護(hù)作用[7]。但右美托咪定是否可通過調(diào)控PI3K/Akt通路影響心肌再灌注大鼠心肌自噬，目前尚不清楚，本研究通過建立大鼠心肌缺血再灌注模型，對(duì)此進(jìn)行探討，現(xiàn)報(bào)告如下。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物：SD大鼠(汕頭大學(xué)醫(yī)學(xué)院)，許可證號(hào)為SCXK(粵)2017-0017，動(dòng)物質(zhì)量合格證號(hào)為11400135053540，雄性，SPF級(jí)，體重200～240 g，1個(gè)半月齡。所有大鼠在赤峰學(xué)院附屬醫(yī)院動(dòng)物房飼養(yǎng)，保持環(huán)境清潔安靜、通風(fēng)良好。本研究對(duì)動(dòng)物的操作和處置均遵循科學(xué)技術(shù)部頒布的《關(guān)于善待實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的指導(dǎo)性意見》進(jìn)行，適性飼養(yǎng)1周后用于實(shí)驗(yàn)。

1.1.2 試劑與儀器：右美托咪定(江蘇恩華藥業(yè)股份有限公司，批準(zhǔn)文號(hào)為國藥準(zhǔn)字H20110085)；三苯基氯化四氮唑(2,3,5-TriPhenyte-trazoliumchloride，TTC，貨號(hào)為17779，美國Sigma公司)，PI3K抑制劑(貨號(hào)分別為17779、L9908，美國Sigma公司)；肌酸激酶同工酶(CK-MB)及肌鈣蛋白 Ⅰ(cTnⅠ)酶聯(lián)免疫吸附試劑盒、兔源Anti-LC3、Anti-Beclin1、Anti-P62、Anti-PI3K、Anti-Akt、Anti-P-Akt及Anti-GAPDH一抗、羊抗兔二抗(貨號(hào)分別為ab187396、ab246529、ab48394、ab62557、ab109012、ab151549、ab179463、ab38449、ab181602及ab150077，英國Abcam公司)；RNAiso Plus、逆轉(zhuǎn)錄試劑盒及熒光定量PCR試劑盒(貨號(hào)分別為9108、RR037Q/A/B、639519，日本Takara公司)；一步法TUNEL細(xì)胞凋亡檢測試劑盒、DAPI染色液、BCA試劑盒及蛋白裂解液(上海碧云天公司，貨號(hào)分別為C1088、C1006、P0011及P0013B)。BL-420F生物信號(hào)采集與分析系統(tǒng)購自成都泰盟軟件有限公司；DHX-300型動(dòng)物呼吸機(jī)購自成都儀器廠；RM2035型輪轉(zhuǎn)切片機(jī)、EG1160型包埋機(jī)及HI1220型烤片機(jī)購自德國Leica 公司；SMZ745型光學(xué)顯微鏡購自日本尼康公司；Elx800型酶標(biāo)儀、1659001型蛋白電泳儀及Trans-Blot SD型半干轉(zhuǎn)膜儀購自美國Bio-Rad公司；Centrifuge 5424R型低溫高速離心機(jī)購自德國 EPPendorf 股份公司等。

1.2 方法

1.2.1 大鼠模型制備及分組給藥：參照文獻(xiàn)，腹腔注射劑量為45 mg/kg的2.5%戊巴比妥鈉對(duì)SD大鼠進(jìn)行麻醉，接著將其仰臥固定在鼠板上，做氣管插管連接呼吸機(jī)，監(jiān)測大鼠心電圖[8]。找到大鼠左側(cè)第3、4 肋骨，于兩根肋骨之間左側(cè)約0.5 cm處切開大鼠胸腔，暴露心臟，分離左冠狀動(dòng)脈前降支，采用6-0無菌線結(jié)扎其根部，觀察大鼠心電圖，ST波抬高時(shí)，表示缺血成功，維持缺血30 min，恢復(fù)血流，繼續(xù)觀察大鼠心電圖，當(dāng)出現(xiàn)病理性Q波且ST波降至正常水平時(shí)，表明再灌注成功[9]，最后關(guān)閉胸腔，迅速縫合切口后消毒。共建模53只，成功48只，隨機(jī)分為模型組、右美托咪定組、LY294002(PI3K抑制劑)組和右美托咪定+LY294002組，每組12只，另取12只設(shè)為假手術(shù)組，僅打開胸腔暴露心臟，不進(jìn)行結(jié)扎。參照文獻(xiàn)，以0.9%氯化鈉溶液溶解右美托咪定及LY294002，右美托咪定以30 μg/kg的劑量腹腔注射[10]，LY294002以0.3 mg/kg的劑量尾靜脈注射[11]，模型組和對(duì)照組以等劑量的0.9%氯化鈉溶液腹腔及尾靜脈注射，1日1次，持續(xù)3 d。

1.2.2 標(biāo)本采集及TTC染色：給藥結(jié)束24 h后，各組大鼠麻醉后處死，抽取腹主動(dòng)脈血2 ml，靜置后以離心機(jī)離心，收集上清液得到血清，儲(chǔ)存在-80 ℃冰箱中備用，各組大鼠隨機(jī)選取6只，解剖得到心臟，沿冠狀切面將其切為厚度大致相同的5片，以2%的TTC染液，于室溫(25 ℃)避光孵育30 min，接著置于4%多聚甲醛中固定，使用相機(jī)拍照，以Image Pro軟件對(duì)圖片進(jìn)行分析得出大鼠心肌梗死面積。計(jì)算公式為，心肌梗死面積=全心臟梗死面積/全心臟切片面積×100%。將各組剩余的6只大鼠剪取約1 g心肌組織剪碎后，加入蛋白裂解液，以勻漿機(jī)制備為勻漿液，以離心機(jī)離心后收集上清液，得到總蛋白樣品液置于-80 ℃冰箱中儲(chǔ)存?zhèn)溆?，剩余心肌組織使用0.9%氯化鈉溶液漂洗干凈，經(jīng)4%多聚甲醛固定、低濃度到高濃度酒精脫水、二甲苯透明及石蠟包埋后，使用切片機(jī)做常規(guī)病理切片備用。

1.2.3 TUNEL染色：選取“1.2.2”項(xiàng)中完整的切片，經(jīng)脫蠟、高濃度到低濃度酒精處理后，采用TUNEL染色試劑盒參照說明書的操作步驟進(jìn)行染色，然后置于DAPI染色液中孵育30 min，以PBS漂洗3次后，在顯微鏡下觀察心肌細(xì)胞凋亡情況，DAPI著色細(xì)胞核，呈藍(lán)色，凋亡細(xì)胞呈棕色，任選5個(gè)視野拍照，計(jì)數(shù)心肌細(xì)胞總數(shù)及凋亡數(shù)，計(jì)算凋亡心肌細(xì)胞比例。計(jì)算公式為，凋亡心肌細(xì)胞比例=心肌細(xì)胞凋亡數(shù)/心肌細(xì)胞總數(shù)×100%。

1.2.4 大鼠血清中CK-MB、cTnⅠ含量測定：取“1.2.2”項(xiàng)中血清于4 ℃冰箱中解凍，取96孔板經(jīng)包被后，依次加入各組血清和酶標(biāo)抗體，37 ℃孵育30 min，洗滌后加底物液37 ℃孵育10 min顯色，最后加入0.05 ml硫酸(2 mol/L)終止反應(yīng)，以酶標(biāo)儀檢測450 nm下吸光度，參照酶聯(lián)免疫吸附試劑盒說明書計(jì)算血清CK-MB、cTnⅠ含量。

1.2.5 心肌組織中自噬相關(guān)蛋白及PI3K/Akt通路相關(guān)蛋白表達(dá)的檢測：取“1.2.2”項(xiàng)中蛋白樣品液于4 ℃冰箱中解凍，參照說明書的步驟使用BCA試劑盒測定其濃度，煮沸5 min使其變性，然后各組分別取含相同質(zhì)量總蛋白的樣品液進(jìn)行SDS-PAGE電泳，分離蛋白后轉(zhuǎn)移至PVDF膜上，接著將其置于5%的脫脂奶粉中，室溫封閉2 h，加入兔源Beclin-1、LC3-Ⅰ、LC3-Ⅱ、P62、PI3K、P-PI3K、Akt及P-Akt一抗置于4 ℃冰箱中孵育過夜，經(jīng)TBST漂洗后，加入羊抗兔二抗，放置在搖床上室溫孵育2 h，經(jīng)TBST再次漂洗后，以增強(qiáng)化學(xué)發(fā)光法顯色，使用凝膠成像儀拍攝圖像，并以Image-J軟件分析條帶進(jìn)而得出各組蛋白相對(duì)表達(dá)量。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

2 結(jié)果

2.1 右美托咪定處理對(duì)大鼠心肌梗死面積的影響

與假手術(shù)組相比，模型組大鼠心肌梗死面積明顯增加(P<0.000 1)；與模型組相比，右美托咪定組大鼠心肌梗死面積縮小(P<0.000 1)，LY294002組大鼠心肌梗死面積增加(P=0.000 6)；與右美托咪定組相比，右美托咪定+LY294002組大鼠心肌梗死面積增加(P<0.000 1)；與LY294002組相比，右美托咪定+LY294002組大鼠心肌梗死面積縮小(P=0.000 3)，上述差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，見圖1。

A.假手術(shù)組；B.模型組；C.右美托咪定組；D.LY294002組；E.右美托咪定+LY294002組；與假手術(shù)組比較，aP<0.05；與模型組比較，bP<0.05；與右美托咪定組比較，cP<0.05；與LY294002組比較，dP<0.05A. sham-operation group; B. model group; C. dexmedetomidine group; D. LY294002 group; E. dexmedetomidine+LY294002 group；vs. sham-operation group, aP<0.05; vs. model group, bP<0.05; vs. dexmedetomidine group, cP<0.05; vs. LY294002 group, dP<0.05圖1 TTC染色法檢測五組大鼠心肌梗死情況Fig 1 Detection of myocardial infarction in five groups of rats by TTC staining

2.2 右美托咪定對(duì)大鼠心肌細(xì)胞凋亡的影響

與假手術(shù)組相比，模型組大鼠心肌細(xì)胞凋亡率明顯升高(P=0.000 2)；與模型組相比，右美托咪定組大鼠心肌細(xì)胞凋亡率降低(P=0.000 7)，LY294002組大鼠心肌細(xì)胞凋亡率升高(P=0.000 4)；與右美托咪定組相比，右美托咪定+LY294002組大鼠心肌細(xì)胞凋亡率升高(P=0.000 3)；與LY294002組相比，右美托咪定+LY294002組大鼠心肌細(xì)胞凋亡率降低(P=0.001 1)，上述差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，見圖2。

A.假手術(shù)組；B.模型組；C.右美托咪定組；D.LY294002組；E.右美托咪定+LY294002組;與假手術(shù)組比較，aP<0.05；與模型組比較，bP<0.05；與右美托咪定組比較，cP<0.05；與LY294002組比較，dP<0.05A. sham-operation group; B. model group; C. dexmedetomidine group; D. LY294002 group; E. dexmedetomidine+LY294002 group; vs. sham-operation group, aP<0.05; vs. model group, bP<0.05; vs. dexmedetomidine group, cP<0.05; vs. LY294002 group, dP<0.05圖2 TUNEL染色法檢測五組大鼠心肌凋亡情況(×200)Fig 2 Detection of myocardial apoptosis in five groups of rats by TUNEL staining(×200)

2.3 右美托咪定對(duì)大鼠血清中CK-MB、cTnⅠ含量的影響

與假手術(shù)組相比，模型組大鼠血清中CK-MB、cTnⅠ含量明顯升高(P均<0.000 1)；與模型組相比，右美托咪定組大鼠血清中CK-MB、cTnⅠ含量降低(P<0.000 1，P=0.000 9)，LY294002組大鼠血清CK-MB、cTnⅠ含量升高(P<0.000 1，P=0.001 1)；與右美托咪定組相比，右美托咪定+LY294002組大鼠血清CK-MB、cTnⅠ含量升高(P<0.000 1，P=0.000 6)；與LY294002組相比，右美托咪定+LY294002組大鼠血清CK-MB、cTnⅠ含量降低(P<0.000 1，P=0.001 7)，上述差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，見圖3。

A.假手術(shù)組；B.模型組；C.右美托咪定組；D.LY294002組；E.右美托咪定+LY294002組; 與假手術(shù)組比較，aP<0.05；與模型組比較，bP<0.05；與右美托咪定組比較，cP<0.05；與LY294002組比較，dP<0.05A. sham-operation group; B. model group; C. dexmedetomidine group; D. LY294002 group; E. dexmedetomidine+LY294002 group; vs. sham-operation group, aP<0.05; vs. model group, bP<0.05; vs. dexmedetomidine group, cP<0.05; vs. LY294002 group, dP<0.05圖3 五組大鼠血清CK-MB、cTnⅠ含量比較Fig 3 Comparison of contents of serum CK-MB and cTnⅠ among five groups of rats

2.4 右美托咪定對(duì)大鼠心肌組織中Beclin-1、LC3-Ⅰ、LC3-Ⅱ、P62蛋白水平的影響

與假手術(shù)組相比，模型組大鼠心肌組織中Beclin-1、LC3-Ⅱ及P62蛋白水平明顯升高，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.000 1，P=0.000 1，P<0.000 1)，LC3-Ⅰ蛋白水平的差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.999 6)。與模型組相比，右美托咪定組大鼠心肌組織中Beclin-1、LC3-Ⅱ及P62蛋白水平明顯降低，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.000 1，P=0.000 2，P<0.000 1)，LC3-Ⅰ蛋白水平的差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.999 6)；LY294002組大鼠心肌組織中Beclin-1、LC3-Ⅱ及P62蛋白水平明顯升高(P=0.000 4，P=0.001 7，P=0.012 4)，LC3-Ⅰ蛋白水平的差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.999 6)。與右美托咪定組相比，右美托咪定+LY294002組大鼠心肌組織中Beclin-1、LC3-Ⅱ及P62蛋白水平明顯升高(P<0.000 1，P=0.000 1，P<0.000 1)，LC3-Ⅰ蛋白水平的差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.999 6)。與LY294002組相比，右美托咪定+LY294002組大鼠心肌組織中Beclin-1、LC3-Ⅱ及P62蛋白水平明顯降低，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.000 8，P=0.002 6，P=0.015 3)，LC3-Ⅰ蛋白水平的差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.971 2)，見圖4。

A.假手術(shù)組；B.模型組；C.右美托咪定組；D.LY294002組；E.右美托咪定+LY294002組；與假手術(shù)組比較，aP<0.05；與模型組比較，bP<0.05；與右美托咪定組比較，cP<0.05；與LY294002組比較，dP<0.05A. sham-operation group; B. model group; C. dexmedetomidine group; D. LY294002 group; E. dexmedetomidine+LY294002 group； vs. sham-operation group, aP<0.05; vs. model group, bP<0.05; vs. dexmedetomidine group, cP<0.05; vs. LY294002 group, dP<0.05圖4 免疫印跡法檢測五組大鼠心肌組織中Beclin-1、LC3-Ⅰ、LC3-Ⅱ及P62蛋白表達(dá)水平Fig 4 Detection of expression levels of Beclin-1, LC3-Ⅰ, LC3-Ⅱ and P62 protein in myocardial tissue in five groups of rats by Western blotting

2.5 右美托咪定對(duì)大鼠心肌組織中PI3K/Akt通路蛋白(P-PI3K/PI3K、P-Akt/Akt)表達(dá)的影響

與假手術(shù)組相比，模型組大鼠心肌組織中P-PI3K/PI3K、P-Akt/Akt蛋白表達(dá)明顯降低(P均<0.000 1)；與模型組相比，右美托咪定組大鼠心肌組織中P-PI3K/PI3K、P-Akt/Akt蛋白表達(dá)明顯升高(P均<0.000 1)，LY294002組大鼠心肌組織中P-PI3K/PI3K、P-Akt/Akt蛋白表達(dá)明顯降低(P=0.023 7，P=0.041 8)；與右美托咪定組相比，右美托咪定+LY294002組大鼠心肌組織中P-PI3K/PI3K、P-Akt/Akt蛋白表達(dá)明顯降低(P均<0.000 1)；與LY294002組相比，右美托咪定+LY294002組大鼠心肌組織中P-PI3K/PI3K、P-Akt/Akt蛋白表達(dá)明顯升高(P=0.011 8，P=0.041 8)，上述差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，見圖5。

A.假手術(shù)組；B.模型組；C.右美托咪定組；D.LY294002組；E.右美托咪定+LY294002組; 與假手術(shù)組比較，aP<0.05；與模型組比較，bP<0.05；與右美托咪定組比較，cP<0.05；與LY294002組比較，dP<0.05A. sham-operation group; B. model group; C. dexmedetomidine group; D. LY294002 group; E. dexmedetomidine+LY294002 group; vs. sham-operation group, aP<0.05; vs. model group, bP<0.05; vs. dexmedetomidine group, cP<0.05; vs. LY294002 group, dP<0.05圖5 免疫印跡法檢測五組大鼠心肌組織中PI3K/Akt通路蛋白表達(dá)水平Fig 5 Detection of expression level of PI3K/Akt pathway protein in myocardial tissue in five groups of rats by Western blotting

3 討論

缺血再灌注損傷的病理機(jī)制復(fù)雜，其中缺血組織再灌注時(shí)，大量活性氧及自由基產(chǎn)生，并引發(fā)嚴(yán)重的炎癥及氧化應(yīng)激反應(yīng)，造成細(xì)胞凋亡，進(jìn)而嚴(yán)重?fù)p傷組織器官；而心臟為有極為豐富血液供應(yīng)的器官，缺血再灌注時(shí)極易損傷心肌組織，是臨床中導(dǎo)致心肌梗死、心力衰竭等心血管疾病患者死亡的主要原因[12]。本研究以結(jié)扎左冠狀動(dòng)脈前降支法制備大鼠心肌缺血再灌注模型，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，建模大鼠心肌梗死面積明顯增加，表明結(jié)扎左冠狀動(dòng)脈前降支可加重心肌梗死癥狀。CK-MB、cTnⅠ是臨床及基礎(chǔ)研究中廣泛用于反映心肌損傷程度的標(biāo)記物[13]。兩者在建模大鼠血清中含量明顯升高，表明結(jié)扎左冠狀動(dòng)脈前降支可造成大鼠心肌損傷，提示模型建立成功。

細(xì)胞自噬是溶酶體降解細(xì)胞自身損壞的細(xì)胞器、大分子蛋白，進(jìn)而對(duì)物質(zhì)進(jìn)行循環(huán)利用的重要生理過程，在維持機(jī)體細(xì)胞物質(zhì)和能量平衡中發(fā)揮著重要作用；LC3是自噬體標(biāo)記物，與Beclin-1、P62蛋白一起可作為檢測自噬的標(biāo)志蛋白，LC3廣泛表達(dá)在自噬體膜上，含有LC3-Ⅰ、LC3-Ⅱ 2種亞基，在自噬過程中，LC3-Ⅱ表達(dá)升高，Beclin-1、P62可促使自噬小體形成，是調(diào)控自噬作用的關(guān)鍵蛋白[14-15]。在心肌缺血再灌注損傷過程中，細(xì)胞自噬發(fā)揮了重要的調(diào)控作用，在心肌組織缺血再灌注時(shí)，嚴(yán)重的炎癥及氧化應(yīng)激反應(yīng)會(huì)引起自噬過度激活，進(jìn)而促使心肌細(xì)胞凋亡，造成心肌組織損傷，抑制自噬作用是潛在的防治缺血再灌注損傷的方法[16]。乙醛脫氫酶2即可通過抑制心肌細(xì)胞自噬而減輕阿霉素誘導(dǎo)的心肌損傷，改善心功能[17]。右美托咪定是一種高選擇性α腎上腺素能受體激動(dòng)劑，可抑制老年大鼠海馬神經(jīng)元自噬功能，改善其認(rèn)知功能障礙，因此，右美托咪定可能抑制心肌細(xì)胞自噬，進(jìn)而減輕心肌缺血再灌注損傷[18]。本研究結(jié)果顯示，在大鼠心肌缺血再灌注損傷過程中，其心肌細(xì)胞自噬作用增強(qiáng)，以右美托咪定處理后，大鼠心肌梗死面積、CK-MB及cTnⅠ含量、Beclin-1、LC3-Ⅱ及P62蛋白表達(dá)水平降低，表明右美托咪定可下調(diào)心肌缺血再灌注大鼠心肌細(xì)胞中自噬蛋白表達(dá)，抑制自噬活性，進(jìn)而減輕心肌梗死癥狀及心肌損傷。

PI3K/Akt通路是機(jī)體經(jīng)典的細(xì)胞存活信號(hào)通路，與細(xì)胞增殖、代謝、存活及炎癥密切相關(guān)，還可參與調(diào)控細(xì)胞自噬，升高通路蛋白PI3K、Akt的磷酸化水平可上調(diào)下游mTOR蛋白表達(dá)，抑制細(xì)胞的自噬作用，減輕阿霉素誘導(dǎo)的心肌細(xì)胞損傷[19-20]。因此，右美托咪定可能通過抑制PI3K/Akt通路激活而抑制心肌自噬，進(jìn)而減輕心肌損傷。本研究結(jié)果顯示，模型大鼠心肌組織中PI3K/Akt通路處于抑制狀態(tài)，模型大鼠以右美托咪定處理可激活心肌組織中PI3K/Akt通路，減輕心肌損傷；以右美托咪定及PI3K/Akt通路抑制劑LY294002聯(lián)合處理，LY294002可減弱右美托咪定縮小大鼠心肌梗死面積，降低CK-MB及cTnⅠ含量、Beclin-1、LC3-Ⅱ及P62蛋白表達(dá)的作用，表明LY294002可減弱右美托咪定抑制心肌自噬、緩解心肌損傷的作用，揭示激活PI3K/Akt通路是右美托咪定抑制心肌自噬，進(jìn)而減輕心肌缺血再灌注損傷損傷的作用機(jī)制之一。

綜上所述，右美托咪定可激活PI3K/Akt通路，下調(diào)心肌缺血再灌注損傷大鼠心肌細(xì)胞自噬蛋白表達(dá)，降低其自噬活性，保護(hù)心肌組織免于缺血再灌注損傷，上調(diào)PI3K/Akt通路蛋白磷酸化水平是其作用機(jī)制之一。但本研究未使用PI3K/Akt通路激動(dòng)劑做對(duì)照研究，還存在不足，要完全闡明其分子機(jī)制還需要后續(xù)深入研究。