程蘭芳

肝癌是臨床常見肝臟腫瘤疾病，病程進(jìn)展迅速，惡性程度高，發(fā)病率與病死率均較高，臨床治療應(yīng)以切除為主[1]。但早期癥狀不明顯，盡早診斷肝癌是治療關(guān)鍵所在，尋找早期診斷標(biāo)志物具有重要意義[2]。微小RNA(miR)屬于內(nèi)源性非編碼RNA，表達(dá)異常會反映肝癌發(fā)生發(fā)展過程，能調(diào)控下游靶基因，發(fā)揮生物學(xué)功能，其中miR-483-5p血清表達(dá)水平能對肝癌診斷具有指導(dǎo)作用[3]。本研究選取我院肝癌患者98 例， 旨在探討miR-483-5p表達(dá)水平與其相關(guān)病理學(xué)參數(shù)的相關(guān)性?，F(xiàn)報(bào)告如下。

1 資料和方法

1.1 一般資料 選取2018年9月至2019年9月我院肝癌患者98例，其中男52例，女46例；年齡39～65歲，平均年齡(52.69±5.98)歲；腫瘤直徑1.4～6.8 cm，平均直徑(4.78±0.89)cm；淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移：有42例，無56例；分化程度：低31例，中26例，高41例；TNM分期：Ⅰ期20例，Ⅱ期23例，Ⅲ期26例，Ⅳ期29例。所有患者均經(jīng)病理學(xué)組織活檢確診為肝癌，均為原發(fā)病灶，均簽署知情同意書；排除接受過化療或放療、合并其他腫瘤者。

1.2 方法 ①取患者腫瘤組織、距癌組織邊緣＞5 cm癌旁組織，保存于液氮中待測；取肝癌組織200 mg，剪成小塊進(jìn)行研磨，期間不斷加入液氮，在癌組織中加入1 mL RNAiso混勻及200 μL三氯甲烷，混勻后于4 ℃下進(jìn)行離心分離取上清液350 μL，加入異丙醇500 μL，混勻并靜置10 min，離心后加入無水乙醇750 μL，渦旋混勻，離心倒掉上清，靜置后進(jìn)行風(fēng)干，加入DEPC 20～30 μL將RNA沉淀進(jìn)行溶解，采用Nanodrop及電泳檢測RNA 純度及質(zhì)量，并利用反轉(zhuǎn)錄試劑盒(日本TaKaRa公司)得到cDNA。②miR-483-5p表達(dá)水平檢測，采用熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)(FQ-PCR法)檢測，反 應(yīng) 體 系：10 μLSYBR premix ex taq Ⅱ＋0.8 μL 10 μmol/L上下游引物＋6 μL Rnase-Free H2O ＋2 μL cDNA ＋0.4 μL ROX Reference DyeⅡ，充分混勻；采用SYBER Green法，反應(yīng)條件：預(yù)變形30 s 95 ℃、變性5 s 95 ℃、延伸30 s 72 ℃，共循環(huán)40次，最終進(jìn)行延伸7 min 72 ℃；共設(shè)置3個(gè)復(fù)孔，取平均值，內(nèi)參為甘油醛-3-磷酸脫氫酶(GAPDH)基因，采用ΔΔCt法計(jì)算miR-483-5p表達(dá)水平，ΔΔCt＝ΔCtmiR－483－5p－ΔCtGAPDH。③根據(jù)肝癌組織中miR-483-5p表達(dá)水平的中位數(shù)，將98例肝癌患者分為高表達(dá)、低表達(dá)，各49例；并收集肝癌患者年齡、性別、腫瘤直徑、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、分化程度、TNM分期等相關(guān)病理學(xué)參數(shù)，分析其相關(guān)性。

1.3 觀察指標(biāo) 癌組織、癌旁組織中miR-483-5p表達(dá)水平。miR-483-5p表達(dá)與病理學(xué)參數(shù)關(guān)聯(lián)性。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS 22.0對數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，計(jì)數(shù)資料以率表示，行χ2檢驗(yàn)，計(jì)量資料以(±s)表示，行t檢驗(yàn)，P＜0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 miR-483-5p 表達(dá)水平 肝癌組織中miR-483-5p表達(dá)水平(15.01±3.14)log10 copies/mL高于癌旁組織(2.92±1.02)log10 copies/mL，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。

2.2 miR-483-5p表達(dá)與病理學(xué)參數(shù)關(guān)聯(lián)性(表1)肝癌組織中miR-483-5p表達(dá)水平與性別、年齡、腫瘤直徑無相關(guān)性(P＞0.05)，與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、分化程度、TNM分期有相關(guān)性(P＜0.05)。

表1 miR-483-5p表達(dá)與病理學(xué)參數(shù)關(guān)聯(lián)性[n(%),n＝49]

3 討論

肝癌是在臨床患病率、病死率在我國分別占第3、4位，嚴(yán)重威脅患者生命安全，但由于其起病不明顯，確診時(shí)多為晚期，易錯(cuò)過最佳治療時(shí)機(jī)，導(dǎo)致患者預(yù)后效果不佳，1年內(nèi)生存率極低[4]。

目前臨床常采用超聲、CT、血清甲胎蛋白(AFP)、肝臟特異性蛋白檢查，但診斷敏感度、準(zhǔn)確度均有不足之處，臨床上仍需要尋找肝癌早期準(zhǔn)確診斷標(biāo)志物[5]。miRNA是腫瘤領(lǐng)域新型研究熱點(diǎn)，其在血清中變化異常情況與腫瘤發(fā)生、發(fā)展、預(yù)后、復(fù)發(fā)等多過程具有密切聯(lián)系，在腫瘤早期診斷應(yīng)用過程中具有良好發(fā)展前景[6]。李茶香等[7]學(xué)者研究表明，miR-483-5p在肝癌組織的表達(dá)與腫瘤分化程度、預(yù)后等密切相關(guān)。本研究結(jié)果顯示，肝癌組織中miR-483-5p表達(dá)水平高于癌旁組織(P＜0.05)，說明miR-483-5p表達(dá)水平在肝癌組織中明顯升高。miR-483-5p最早發(fā)現(xiàn)于人胚胎肝臟中，參與膠質(zhì)母細(xì)胞瘤、膀胱癌等多種腫瘤細(xì)胞發(fā)生發(fā)展，能發(fā)揮抑癌基因功能，在肝癌患者中表達(dá)量亦有升高，與癌旁正常組織相比，肝癌組織中miR-483-5p表達(dá)水平更高[8]。本研究結(jié)果還顯示，肝癌組織中miR-483-5p表達(dá)水平與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、分化程度、TNM分期有相關(guān)性(P＜0.05)，說明miR-483-5p表達(dá)水平與肝癌患者病理學(xué)參數(shù)具有相關(guān)性。隨著肝癌病情發(fā)展，分化程度增強(qiáng)、TNM分期升高、淋巴結(jié)發(fā)生轉(zhuǎn)移，體內(nèi)抑癌基因表達(dá)增加，miR-483-5p表達(dá)水平隨之升高，能準(zhǔn)確反映病情發(fā)展程度[9-10]。因此，在肝癌早期進(jìn)行miR-483-5p水平檢測，通過其表達(dá)水平高低判斷肝癌病理學(xué)發(fā)展進(jìn)程，于早期進(jìn)行準(zhǔn)確診斷，并采取積極治療，從而有效避免肝癌發(fā)展至晚期，能挽救更多患者生命，具有重要意義。

綜上所述，miR-483-5p表達(dá)水平在肝癌組織中較高，且與病理學(xué)參數(shù)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、分化程度、TNM分期有關(guān)，有助于肝癌的臨床診斷與治療。