齊樂(lè)輝，龍丹丹，孟 鑫，田 園，許樹(shù)軍

（黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)，黑龍江 哈爾濱150040）

廣藿香，為唇形科植物廣藿香（Pogostemon cablin（Blanco）Benth）的干燥地上部分，其拉丁名為Pogostemonis Herba[1]。廣藿香是中醫(yī)臨床治療過(guò)程中經(jīng)常使用的中藥，常用于鼻淵頭痛、腹痛吐瀉等癥狀的防治。有關(guān)于廣藿香的研究文獻(xiàn)表明，揮發(fā)油成分和水溶性成分是廣藿香發(fā)揮藥理作用的主要成分[2,3]?！吨袊?guó)藥典》（2015年版）中選用了廣藿香的揮發(fā)性成分百秋李醇作為標(biāo)準(zhǔn)品對(duì)廣藿香進(jìn)行了鑒定。

中醫(yī)臨床上經(jīng)常使用廣藿香和陳皮兩種藥材，陳皮和廣藿香都可用于治療惡心嘔吐，并且中醫(yī)臨床中二者的配伍應(yīng)用廣泛，《醫(yī)學(xué)從眾錄》中記載“陳皮藿香湯”，陳皮和廣藿香各用5錢(qián)，主治霍亂吐瀉。因此，對(duì)于加入陳皮后對(duì)廣藿香中某種化學(xué)成分的提取效率的影響的研究是有證可循的。中藥藥對(duì)中兩味藥物的配伍比例不同，使用時(shí)其有效的化學(xué)成分往往會(huì)發(fā)生變化，或是有新的成分產(chǎn)生，或是化學(xué)成分的含量發(fā)生變化[4-6]。藥物的藥理效應(yīng)基礎(chǔ)在于其化學(xué)成分，尤其是有效活性成分[7,8]?？梢越Y(jié)合運(yùn)用“藥對(duì)”的相關(guān)知識(shí)，探討陳皮對(duì)廣藿香中某些成分的提取效率是否有積極的影響，可對(duì)將來(lái)增強(qiáng)廣藿香的有效藥理活性或者降低廣藿香的某些不良反應(yīng)的相關(guān)研究提供切實(shí)可行的研究方法。

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 材料及儀器

LT502型電子天平；KQ-500DB型數(shù)控超聲波清洗器；HR-20 1000g大功率粉碎機(jī)；Ultimate 3000超快速液相色譜儀；SHB-III循環(huán)水式多用真空泵；98-I-B型電子調(diào)溫電熱套。

廣藿香藥材產(chǎn)于廣東肇慶；陳皮購(gòu)買(mǎi)于北京本草方源藥業(yè)公司；香草酸和原兒茶酸對(duì)照品購(gòu)買(mǎi)于上海源葉生物科技有限公司；甲醇（色譜純）購(gòu)買(mǎi)于天津星馬克科技發(fā)展有限公司；乙腈（色譜純）購(gòu)買(mǎi)于成都市科隆化學(xué)品有限公司、磷酸（色譜純）購(gòu)買(mǎi)于天津科密歐化學(xué)試劑有限公司；純凈水為娃哈哈集團(tuán)生產(chǎn)。

1.2 供試品溶液的制備

稱(chēng)取粉碎后的廣藿香藥材粉末2.5g兩份，分別加入到250mL圓底燒瓶中。每個(gè)圓底燒瓶中都加50mL蒸餾水，搭好回流裝置，開(kāi)始加熱。使用500mL抽濾瓶和真空泵進(jìn)行減壓抽濾，保留濾渣，用藥匙將其小心的舀回圓底燒瓶中。重復(fù)上述步驟3次，合并濾液于蒸發(fā)皿中，100℃水浴蒸干，用色譜純甲醇溶解殘?jiān)?，定容?0mL容量瓶中，并用。

1.3 對(duì)照品溶液的制備

精密稱(chēng)取香草酸標(biāo)準(zhǔn)品0.0039g、原兒茶酸標(biāo)準(zhǔn)品0.0036g，分別置于10mL容量瓶中，用色譜純甲醇溶解，定容至刻度，作為標(biāo)準(zhǔn)品儲(chǔ)備液。

1.4 色譜條件

表1 HPLC色譜條件Tab.1 HPLC chromatographic conditions

1.5 線性關(guān)系的考察

1.5.1 線性及相關(guān)系數(shù) 精密吸取混合標(biāo)準(zhǔn)品溶液0.5、3、5、7、9、11、13μL 共 7 份，進(jìn)高效液相色譜儀，分別記錄原兒茶酸所出峰和香草酸所出峰的峰面積，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

1.5.2 重復(fù)性考察 取同一批廣藿香單味藥材粉末、廣藿香-陳皮混合藥材粉末，按照“1.4”項(xiàng)下的實(shí)驗(yàn)步驟平行進(jìn)行6次提取，取適量供試品溶液，按照“1.4”項(xiàng)下的色譜條件進(jìn)行測(cè)定，使用中藥色譜指紋圖譜相似度評(píng)價(jià)系統(tǒng)進(jìn)行處理，得到色譜圖。分別記錄原兒茶酸、香草酸所對(duì)應(yīng)的色譜峰峰面積并計(jì)算求得RSD值。

1.5.3 精密度實(shí)驗(yàn) 取混合標(biāo)準(zhǔn)品溶液適量，置于進(jìn)樣瓶中，按照“1.4”項(xiàng)下的色譜條件連續(xù)進(jìn)樣6次，記錄原兒茶酸所出峰、香草酸所出峰的峰面積，并計(jì)算其RSD值。

1.5.4 含量測(cè)定 供試品溶液過(guò)0.45μm微孔濾膜，進(jìn)行測(cè)定，記錄峰面積，從而測(cè)得廣藿香中兩種水溶性成分（香草酸，原兒茶酸）的含量。

2 結(jié)果與討論

2.1 混合標(biāo)準(zhǔn)品共有峰的確定

如圖1所示，將混合標(biāo)準(zhǔn)品溶液所出色譜圖分別與香草酸標(biāo)準(zhǔn)品溶液和原兒茶酸標(biāo)準(zhǔn)品溶液所出色譜峰進(jìn)行比較，確定混合標(biāo)準(zhǔn)品溶液色譜圖中第一個(gè)色譜峰為原兒茶酸的吸收峰，保留時(shí)間為2.072min；第二個(gè)色譜峰為香草酸的吸收峰，保留時(shí)間為2.742min。

圖1 混合標(biāo)準(zhǔn)品溶液、香草酸標(biāo)準(zhǔn)品溶液和原兒茶酸標(biāo)準(zhǔn)品溶液的HPLC色譜圖Fig.1 HPLC chromatogram of mixed standard solution,vanilla acid standard solution and raw acid standard solution

2.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備

如圖2、3所示，原兒茶酸的標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸方程為y=7.895x+4.5154，R2=0.9998；香草酸的標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸方程為y=7.6977x+1.7205，R2=0.9997。

圖2 原兒茶酸的標(biāo)準(zhǔn)曲線圖Fig.2 Standard chart of primary catechins

圖3 香草酸的標(biāo)準(zhǔn)曲線圖Fig.3 Standard chart of vanilla acid

2.3 精密度實(shí)驗(yàn)

表2 原兒茶酸、香草酸的峰面積及RSD值Tab.2 Peak area and RSD value of original catechin

由表2可知，原兒茶酸和香草酸對(duì)應(yīng)色譜峰的峰面積平均值分別為79.1426、76.2365，RSD值分別為1.35%、0.25%。二者的RSD值均在0%～2%之間，該結(jié)果顯示HPLC色譜系統(tǒng)具有良好的精密度，可以用于該實(shí)驗(yàn)的測(cè)定。

由表2可知，原兒茶酸和香草酸對(duì)應(yīng)色譜峰峰面積的RSD值均小于3%，說(shuō)明該測(cè)定方法的重復(fù)性較好。

2.4 含量測(cè)定

按上述方法進(jìn)行廣藿香加熱回流后的供試品測(cè)定，得色譜圖見(jiàn)圖4和峰面積見(jiàn)表3。

圖4 混合標(biāo)準(zhǔn)品溶液和廣藿香單味藥材提取藥液得到的HPLC色譜圖Fig.4 HPLC chromatogram obtained from the mixture of standard solution and patchouli herb extract

表3 廣藿香單味藥材提取液的含量測(cè)定Tab.3 Determination of extraction liquid of herbal medicine from patchouli

實(shí)驗(yàn)測(cè)得，原兒茶酸和香草酸的含量分別為0.001572mg·g-1，0.0004846mg·g-1。

加入配比量為1∶1的陳皮藥材粉末后得到的色譜圖見(jiàn)圖5和峰面積數(shù)據(jù)見(jiàn)表4。

圖5 混合標(biāo)準(zhǔn)品溶液和廣藿香-陳皮混合藥材提取液得到的HPLC色譜圖Fig.5 HPLC chromatogram obtained from mixture of standard solution and patchouli and parsley mixture

配伍后對(duì)廣藿香藥材水溶性成分中的原兒茶酸、香草酸的提取含量有積極的影響見(jiàn)表4。

表4 廣藿香-陳皮混合藥材提取液的含量測(cè)定Tab.4 Determination of extraction liquid of patchouli-chen pi mixture

原兒茶酸、香草酸的含量平均值分別為0.003355mg·g-1、0.003216mg·g-1。其中原兒茶酸含量提升了2.13倍，香草酸的含量提升了6.64倍。

3 結(jié)論

與廣藿香單味藥材提取含量測(cè)定結(jié)果進(jìn)行比較，廣藿香-陳皮混合藥材提取液中原兒茶酸及香草酸的含量均有所增長(zhǎng)。其中原兒茶酸的含量變化較香草酸含量變化明顯，其中原兒茶酸含量為廣藿香單味藥材提取所得的2.13倍，香草酸的含量為廣藿香單味藥材提取所得的6.64倍。加熱回流提取廣藿香中水溶性成分時(shí)，加入藥材配比量為1∶1的陳皮藥材，對(duì)廣藿香水溶性成分的溶出有促進(jìn)作用，其中對(duì)原兒茶酸的影響作用較小，對(duì)香草酸的影響作用較為顯著。