張洪，劉永虎，趙學(xué)偉，王常安，陸紹霞，劉紅柏，徐奇友

（1.中國(guó)水產(chǎn)科學(xué)研究院黑龍江水產(chǎn)研究所，黑龍江 哈爾濱 150070；2.大連市現(xiàn)代海洋牧場(chǎng)研究院，遼寧 大連 116087；3.湖州師范學(xué)院，浙江 湖州 313000）

近年來(lái)，免疫增強(qiáng)劑在水產(chǎn)養(yǎng)殖上的應(yīng)用越來(lái)越廣泛[1]。其中，中草藥免疫增強(qiáng)劑比疫苗和抗生素等藥物更具有潛在的優(yōu)勢(shì)。中草藥價(jià)格低廉，分布廣泛，容易獲取。相比較而言，疫苗價(jià)格較高，適用受限，操作繁瑣，并不適用于各種疾病[2]。抗菌藥物和消毒劑的濫用會(huì)明顯產(chǎn)生抗菌菌株[3]。因此，中草藥免疫增強(qiáng)劑能增強(qiáng)機(jī)體的非特異性免疫防御機(jī)制，成為有效的控制魚類疾病的替代方法。

蘆薈的藥理活性和生物活性組分較多，主要有蒽醌類物質(zhì)、多肽、多糖、有機(jī)酸、氨基酸、維生素、礦物質(zhì)、生物活性酶等[4]，其主要功效成分是蒽醌類化合物和多糖（約占總固體質(zhì)量的60%以上）[5]。已有研究表明，蘆薈具有抗菌、抗病毒、抗衰老、健胃緩瀉等作用[6]。蘆薈在魚類中的應(yīng)用研究主要集中在生長(zhǎng)和免疫方面[7-15]，但是，不同種類間的研究結(jié)果差異較大。哲羅鮭Hucho taimen 為我國(guó)土著鮭科魚類代表種，其規(guī)?；B(yǎng)殖已獲成功，但有關(guān)其免疫增強(qiáng)劑的資料缺乏。本試驗(yàn)通過(guò)研究蘆薈粉對(duì)哲羅鮭生長(zhǎng)、免疫和抗氧化力的影響，以期豐富鮭鱒魚類的中草藥免疫增強(qiáng)劑的研究資料，并為研制哲羅鮭免疫增強(qiáng)劑提供參考。

1 材料與方法

1.1 材料

試驗(yàn)飼料用魚粉和豆粕為蛋白源，魚油和磷脂為脂肪源。飼料的配方及營(yíng)養(yǎng)水平見表1[15]。原料均過(guò)80 目篩后用鼓型混合機(jī)混合，制粒（直徑為1.5 mm），然后置于-20℃冰箱中保存待用。

試驗(yàn)用哲羅鮭初始體質(zhì)量為（16.24±0.10）g。選取健康、規(guī)格一致的魚體放入室內(nèi)流水系統(tǒng)中。用基礎(chǔ)飼料馴養(yǎng)14 d 后開始養(yǎng)殖試驗(yàn)。庫(kù)拉索蘆薈Aloe barbadensis 全葉凍干粉（規(guī)格100∶1）購(gòu)自云南元江萬(wàn)綠生物有限公司[16]。

1.2 方法

本試驗(yàn)采用單因子梯度試驗(yàn)設(shè)計(jì)。試驗(yàn)分為G1～G5 處理組，蘆薈凍干粉的添加量分別為0%（對(duì)照組）、0.125%、0.25%、0.5%和1.0%。每個(gè)處理設(shè)3個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)50 尾魚。試驗(yàn)魚飼養(yǎng)在室內(nèi)200L流水水族箱中，分別投喂G1～G5 飼料，養(yǎng)殖56d。水源為地下涌泉水，水溫8.3～17.2℃，溶氧＞6.0mg/L。日飽食投喂2 次（9:00 和16:00）。投喂1h 后回收所殘餌并烘干稱重。將定量飼料投入水中1h 后回收、烘干，稱重計(jì)算殘餌回收率，并據(jù)此校正飼料攝入量。養(yǎng)殖試驗(yàn)結(jié)束時(shí)，魚體饑餓24h，用苯氧乙醇（0.5mL/L）麻醉，稱重，測(cè)量體長(zhǎng)，采集樣品。

每水族箱隨機(jī)取4 尾魚，尾柄部采血，4℃靜置30min，3000r/min 離心15min，取上清液，裝入1.5mL離心管中，放入-80℃超低溫冰箱中保存待測(cè)。超氧化物歧化酶（Superoxidedismutase，SOD）和酸性磷酸酶（Acidphosphatase,ACP）的活性及丙二醛（Malondialdehyde，MDA）含量采用南京建成生物工程有限公司試劑盒測(cè)定，其中SOD 用黃嘌呤氧化酶法、MDA 以硫代巴比妥酸法、ACP 采用比色法測(cè)定。谷丙轉(zhuǎn)氨酶（Alaninetransaminase，ALT）、谷草轉(zhuǎn)氨酶（Aspartate aminotransferase，AST）、堿性磷酸酶（Alkaline phosphatase，ALP）、血糖（Blood glucose，GLU）、總蛋白（Total protein，TP）、白蛋白（Albumin，ALB）、高密度脂蛋白（High density lipoprotein，HDL）、低密度脂蛋白（Low density lipoprotein，LDL）、膽固醇（Cholesterol CHOL）和補(bǔ)體C3 和C4 含量利用全自動(dòng)生化分析儀（貝克曼ProCX4，美國(guó)）測(cè)定。ALT、AST 和ALP 活性采用速率法測(cè)定；TP 和ALB 含量采用化學(xué)法測(cè)定；HDL 和LDL 含量為直接法測(cè)定；GLU 和CHOL 含量用酶法測(cè)定；補(bǔ)體C3 和C4 用免疫比色法測(cè)定；球蛋白（Globulin,GLB）、A∶G 和AST∶ALT 為計(jì)算值。

表1 基礎(chǔ)飼料配方及營(yíng)養(yǎng)水平（風(fēng)干基礎(chǔ)）Tab.1 Ingredients and approximate composition of the test diets（air-dry basis）

1.3 統(tǒng)計(jì)分析

生物學(xué)指標(biāo)計(jì)算方法如下：

增重率（Weight gain rate,WGR）（%）=100×（Wt-W0）/W0；

成活率（Survival rate）（%）=100×Nf/Ni×100；

肥滿度（Condition factor）=100×Wt/Lt3；

飼料系數(shù)（Feed conversion ratio,FCR）=Wf/（Wt-W0）；

其中：Wt為魚終末體質(zhì)量（g）；W0為魚初始體質(zhì)量（g）；Nf為終末尾數(shù)；Ni為初始尾數(shù)；Lt試驗(yàn)魚終末體長(zhǎng)（cm）；Wf為飼料攝入量（g）。

數(shù)據(jù)以平均值±標(biāo)準(zhǔn)差（Mean±SD）表示。用軟件SPSS for Windows 23.0 進(jìn)行單因素方差分析和Duncan’s 多重比較，顯著性水平P=0.05。

2 結(jié)果與分析

2.1 飼料中添加蘆薈粉對(duì)哲羅鮭生產(chǎn)性能的影響

由表2 可知：試驗(yàn)結(jié)束時(shí)，各處理組哲羅鮭幼魚的增重率、特定生長(zhǎng)率、成活率、肥滿度和飼料系數(shù)均差異不顯著（P＞0.05）?？梢姡暳现刑砑犹J薈粉對(duì)哲羅鮭幼魚生產(chǎn)性能無(wú)明顯的影響（P＞0.05）。

2.2 飼料中添加蘆薈粉對(duì)哲羅鮭抗氧化力指標(biāo)的影響

由表3 可知：隨著飼料中蘆薈粉水平的增加，哲羅鮭血清超氧化物岐化酶（SOD）活力明顯升高（P＜0.05）。飼料中高比例添加蘆薈粉（1.0%）時(shí)，血清SOD 活性與對(duì)照組差異不顯著（P＞0.05）。蘆薈粉添加量為0.25%時(shí)血清丙二醛含量最小，而添加量為0.5%和1.0%時(shí)，丙二醛含量與對(duì)照組差異不明顯（P＞0.05）。

2.3 飼料中添加蘆薈粉對(duì)哲羅鮭非特異性免疫指標(biāo)的影響

由表4 可知：各組間哲羅鮭的血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶、谷草轉(zhuǎn)氨酶活性、谷草和谷丙轉(zhuǎn)氨酶比、酸性磷酸酶和堿性磷酸酶活性、補(bǔ)體C3、補(bǔ)體C4 含量均無(wú)明顯變化（P＞0.05）。

2.4 飼料中添加蘆薈粉對(duì)哲羅鮭血清代謝物的影響

表2 飼料中添加蘆薈粉對(duì)哲羅鮭生產(chǎn)性能的影響Tab.2 Effects of dietary aloe powder on growth performance in taimen Hucho taimen in various groups during the experiment（n=3,±SD）

表2 飼料中添加蘆薈粉對(duì)哲羅鮭生產(chǎn)性能的影響Tab.2 Effects of dietary aloe powder on growth performance in taimen Hucho taimen in various groups during the experiment（n=3,±SD）

注：同列中上標(biāo)未標(biāo)有字母表示組間差異不顯著（P＞0.05）

表3 飼料中添加蘆薈粉對(duì)哲羅鮭血清抗氧化力的影響Tab.3 Effects of dietary aloe powder on serum antioxidant capacity in taimen Hucho taimen in various groups（n=3,±SD）

表3 飼料中添加蘆薈粉對(duì)哲羅鮭血清抗氧化力的影響Tab.3 Effects of dietary aloe powder on serum antioxidant capacity in taimen Hucho taimen in various groups（n=3,±SD）

注：同行中標(biāo)有不同字母的平均值間差異顯著（P＜0.05）；標(biāo)有相同字母者或未標(biāo)有字母者表示組間差異不顯著（P＞0.05）,下同

表4 飼料中添加蘆薈粉對(duì)哲羅鮭非特異性免疫指標(biāo)的影響Tab.4 Effects of dietary aloe powder on serum non-specific immunity in taimen Hucho taimen in various groups（n=3,±SD）

表4 飼料中添加蘆薈粉對(duì)哲羅鮭非特異性免疫指標(biāo)的影響Tab.4 Effects of dietary aloe powder on serum non-specific immunity in taimen Hucho taimen in various groups（n=3,±SD）

表5 飼料中添加蘆薈粉對(duì)哲羅鮭血清代謝物的影響Tab.5 Effects of dietary aloe powder on serum indices in taimen Hucho taimen in various groups（n=3,±SD）

表5 飼料中添加蘆薈粉對(duì)哲羅鮭血清代謝物的影響Tab.5 Effects of dietary aloe powder on serum indices in taimen Hucho taimen in various groups（n=3,±SD）

由表5 可知：各組間哲羅鮭的血清總蛋白、球蛋白、白蛋白、白球比、血糖、高密度脂蛋白、低密度脂蛋白和膽固醇含量均差異不顯著（P＞0.05）。

3 討論

3.1 飼料中添加蘆薈粉對(duì)魚類生長(zhǎng)性能的影響

一般認(rèn)為，蘆薈粉作為一種飼料添加劑可改善魚類的生長(zhǎng)性能。飼料中添加1%～2.5%蘆薈粉后，鯉Cyprinus carpio 攝食量增加，增重率明顯提高[8]。蘆薈粉促進(jìn)魚類生長(zhǎng)的原因可能是：抑制腸道內(nèi)有害微生物的繁殖和生長(zhǎng)；提高機(jī)體的免疫力；含有促生長(zhǎng)的化學(xué)成分[17-19]。然而，蘆薈粉促生長(zhǎng)的作用因魚的種類而有所不同。對(duì)西伯利亞鱘Acipenser baerii[15]、虹鱒Oncorhynchus mykiss[20]等魚類的研究表明，飼料中添加蘆薈粉并不能提高其生長(zhǎng)性能。本研究也表明，飼料中添加蘆薈粉對(duì)哲羅鮭的增重率、飼料系數(shù)、成活率和肥滿度無(wú)顯著影響（P＞0.05）。同時(shí)，哲羅鮭血清中的總蛋白、白蛋白、膽固醇、高密度脂蛋白、低密度脂蛋白和血糖均未發(fā)生明顯改變。相比而言，羅非魚Oreochromis niloticus[13]、鯽Carassius auratus[21]等飼喂蘆薈粉后血清中膽固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白水平較低，高密度脂蛋白含量升高，進(jìn)而促進(jìn)脂類等營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的吸收。因此，蘆薈粉不具有促生長(zhǎng)效應(yīng)的原因可能與魚的種類差異有關(guān)。飼料中高比例、長(zhǎng)期地添加蘆薈粉，蘆薈中的蘆薈素和蒽醌類化合物也會(huì)對(duì)機(jī)體產(chǎn)生不良影響。長(zhǎng)期用蘆薈粉飼喂大鼠Rattus norvegicus 時(shí)生長(zhǎng)減緩，腎濾過(guò)通透性增強(qiáng)，出現(xiàn)腎炎、腎功能障礙等癥狀[22]。

3.2 飼料中添加蘆薈粉對(duì)魚類免疫力和抗氧化力的影響

蘆薈中的多糖和蒽醌類化合物具有增強(qiáng)魚體免疫力的作用。飼料中添加0.1%～0.5%蘆薈粉后，許氏平鲉Sebastes schlegeli 幼魚頭腎吞噬細(xì)胞化學(xué)發(fā)光反應(yīng)顯著下降，成活率顯著升高，有效控制了溶藻弧菌Vibrio alginolyticus 感染[3]。飼料中添加1%～2.5%蘆薈粉也可改善鯉的抗應(yīng)激能力[8]。Zodape[23]發(fā)現(xiàn)，飼料中添加蘆薈粉顯著降低肌肉和肝臟的谷丙轉(zhuǎn)氨酶、谷草轉(zhuǎn)氨酶、酸性磷酸酶和堿性磷酸酶活性，有效保護(hù)了肝和肌肉組織。但是，對(duì)虹鱒的研究表明，飼料中添加0.5%蘆薈粉后，魚體的免疫并沒有改善，表現(xiàn)為白細(xì)胞呼吸爆發(fā)，血清溶菌酶、補(bǔ)體水平和免疫相關(guān)基因等表達(dá)量均無(wú)明顯變化[10]。類似的是，添加蘆薈粉對(duì)哲羅鮭血清球蛋白、補(bǔ)體C3 和補(bǔ)體C4 含量、谷丙轉(zhuǎn)氨酶、谷草轉(zhuǎn)氨酶、酸性磷酸酶和堿性磷酸酶活性亦無(wú)顯著影響（P＞0.05）?？梢姡曃?.125%～1.0%蘆薈粉可能對(duì)哲羅鮭的非特異性免疫改善程度有限。然而，飼料中添加蘆薈粉后，哲羅鮭的抗氧化力增強(qiáng)，血清的超氧化物岐化酶活性顯著升高和丙二醛含量顯著降低（P＜0.05），這與羅非魚[13]、西伯利亞鱘[15]等的研究結(jié)果一致，這可能是蘆薈粉抑制魚體脂類過(guò)氧化的結(jié)果。也有研究者認(rèn)為，蘆薈粉提高抗氧化力是提高了維生素C 和維生素E 生物利用率的結(jié)果[24]。

總之，飼料中添加蘆薈粉（0.125%～1.0%）對(duì)哲羅鮭幼魚的促生長(zhǎng)效應(yīng)不明顯；對(duì)血清的非特異性免疫力和營(yíng)養(yǎng)代謝物亦無(wú)顯著影響。然而，飼料中添加0.25%和0.5%蘆薈粉顯著提高了血清抗氧化能力，因此這種調(diào)節(jié)機(jī)制需要進(jìn)一步研究。