安曉穎 李曉霞 陳寧 邸紅芹 朱桂云 張彥坤

肺腺癌（Lung adenocarcinoma，LAC）是一種非小細(xì)胞肺癌，多起源于支氣管粘膜上皮，多發(fā)于老年群體，且發(fā)病率隨著人口老齡化增加逐漸升高[1]。LAC的早期診斷對(duì)患者預(yù)后改善具有重要意義，但患者發(fā)病早期缺乏典型癥狀，其診斷及治療仍缺乏較為準(zhǔn)確的評(píng)估標(biāo)準(zhǔn)[2]。近年來(lái)研究發(fā)現(xiàn)，Ki67是一種細(xì)胞增殖狀態(tài)的重要標(biāo)記物，在多種惡性腫瘤患者體內(nèi)呈異常高表達(dá)，有助于惡性腫瘤的早期診斷和病情評(píng)估[3-4]。此外，乳腺癌1號(hào)基因相關(guān)蛋白1（Breast cancer gene 1-associated protein-1，BAP1）屬于直接與遺傳性乳腺癌有關(guān)的抑制基因。研究指出，BAP1基因的突變有數(shù)百種之多，與人體其他多種癌癥都有密切關(guān)系[5-6]。但關(guān)于兩者在肺腺癌診斷中的價(jià)值鮮有報(bào)道?；诖?，本研究嘗試分析BAP1、Ki-67表達(dá)與老年LAC患者腫瘤侵襲及預(yù)后的關(guān)系，旨在為臨床診斷LAC 提供參考。報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取本院2018年1月至2019年2月296例老年LAC患者作為研究組，其中男114例，女182例；年齡60～82歲，平均（67.45±3.72）歲；體質(zhì)量46～80 kg，平均（63.57±8.21）kg；居住地：187例城市，109例農(nóng)村。另選取同期292例良性肺部腫瘤患者作為對(duì)照組，其中男105例，女187例；年齡60～80歲，平均（66.63±3.31）歲；體質(zhì)量48～83 kg，平均（64.85±8.42）kg；居住地：179例城市，113例農(nóng)村。對(duì)比兩組年齡、性別、體質(zhì)量、居住地，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），具可比性。

納入標(biāo)準(zhǔn)：①符合LAC 診斷標(biāo)準(zhǔn)[7]，并經(jīng)術(shù)后病理診斷確診；②年齡≥60歲；③檢測(cè)前未接受相關(guān)治療；④無(wú)溝通交流障礙；⑤均行手術(shù)治療；⑥患者及家屬知曉本研究，已簽署同意書(shū)。排除標(biāo)準(zhǔn)：①合并其他惡性腫瘤者；②血液系統(tǒng)疾病患者；③嚴(yán)重感染性疾病患者；④心腦肝腎功能?chē)?yán)重障礙者；⑤傳染性疾病患者；⑥精神疾病患者。

1.2 方法

取所有研究對(duì)象術(shù)后肺組織標(biāo)本，由專(zhuān)業(yè)檢測(cè)師采用免疫組織化學(xué)法測(cè)定BAP1、Ki-67陽(yáng)性表達(dá)率，具體操作：常規(guī)行固定、脫水、石蠟包埋處理，4～6 μm 連續(xù)切片后脫蠟、脫水、抗原修復(fù)，羊血清封閉10 min 后滴入一抗，于4℃下保存、過(guò)夜，采用聚丁二酸丁二醇酯緩沖液代替一抗作為陰性對(duì)照，PBS 緩沖液洗滌3次后加入二抗，常溫下靜置10 min，再次以PBS 緩沖液洗滌3次，加入二氨基聯(lián)苯胺顯色液顯色，采用蘇木素復(fù)染后封片。高倍顯微鏡下觀察，每張切片隨機(jī)選取5～10個(gè)高倍視野，每個(gè)視野計(jì)數(shù)100個(gè)瘤細(xì)胞，計(jì)數(shù)陽(yáng)性細(xì)胞百分比。按著色細(xì)胞百分比分級(jí)，＜10%為陰性（-），≥10%為陽(yáng)（+）。

1.3 觀察指標(biāo)

①兩組BAP1、Ki-67表達(dá)情況。②探究BAP1、Ki-67與老年LAC發(fā)生的關(guān)系。③探究BAP1、Ki-67與老年LAC患者腫瘤侵襲的關(guān)系。④隨訪1年，統(tǒng)計(jì)研究組預(yù)后情況，對(duì)比不同預(yù)后患者BAP1、Ki-67表達(dá)情況。⑤采用卡普蘭-邁耶曲線(xiàn)分析不同BAP1、Ki-67表達(dá)情況老年LAC患者的生存情況。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

數(shù)據(jù)處理采用SPSS 22.0軟件，計(jì)數(shù)資料以n（%）表示、采用χ2檢驗(yàn)，采用KM 曲線(xiàn)分析生存情況，P＜0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組BAP1、Ki-67表達(dá)情況

研究組BAP1陽(yáng)性表達(dá)率低于對(duì)照組，Ki-67陽(yáng)性表達(dá)率高于對(duì)照組（P＜0.05），見(jiàn)表1。

表1 兩組BAP1、Ki-67表達(dá)情況比較[n（%）]Table1 Comparison of BAP1、Ki-67 expression between the two groups[n（%）]

2.2 BAP1、Ki-67與老年LAC發(fā)生的關(guān)系

Logistic回歸分析發(fā)現(xiàn)，BAP1、Ki-67與老年LAC發(fā)生顯著相關(guān)（P＜0.05），見(jiàn)表2。

2.3 BAP1 與腫瘤侵襲相關(guān)性

BAP1、Ki-67與老年LAC患者年齡、性別、腫瘤直徑、大體類(lèi)型、分化程度無(wú)明顯相關(guān)性（P>0.05）；BAP1與老年LAC患者TNM 分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、胸膜侵犯顯著相關(guān)（P＜0.05），見(jiàn)表3。

2.4 研究組不同預(yù)后患者BAP1、Ki-67陽(yáng)性表達(dá)率

隨訪1年，失訪8例（其中BAP1陽(yáng)性表達(dá)者3例，Ki-67陽(yáng)性表達(dá)者2例）。根據(jù)預(yù)后情況分為生存者、死亡者。死亡者BAP1陽(yáng)性表達(dá)率較生存者低，死亡者Ki-67陽(yáng)性表達(dá)率高于生存者（P＜0.05），見(jiàn)表5。

表2 BAP1、Ki-67與老年LAC發(fā)生的關(guān)系Table2 Relationship between BAP1、Ki-67 and LAC in old age

表3 BAP1、Ki-67與腫瘤侵襲相關(guān)性[n（%）]Table3 Correlation between BAP1 and tumor invasion[n（%）]

表5 研究組不同預(yù)后患者BAP1、Ki-67陽(yáng)性表達(dá)率比較[n（%）]Table5 Comparison of positive expression BAP1、Ki-67 patients with different prognosis in the study group[n（%）]

2.5 生存分析

KM 曲線(xiàn)分析，BAP1陽(yáng)性表達(dá)者1年生存率較陰性表達(dá)者高，Ki-67陽(yáng)性表達(dá)1年生存率較陰性表達(dá)者低（χ21=21.580，P1＜0.001；χ22=134.200，P2＜0.001），見(jiàn)圖1。

3 討論

肺癌為臨床最常見(jiàn)惡性腫瘤之一，5年生存率極低，2018年的統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)為18%，是癌癥患者致死的主要病因[8]。LAC 的發(fā)生率約占肺原發(fā)腫瘤的40%，早期隱匿性更強(qiáng)，具有高度浸潤(rùn)和破壞性生長(zhǎng)特征，且易侵犯血管和淋巴管壁，多數(shù)患者確診時(shí)已出現(xiàn)血行及淋巴轉(zhuǎn)移，預(yù)后極差[9]。因此，越來(lái)越多的研究致力于探求LAC 的早期診斷指標(biāo)。

近期研究指出，BAP1可影響腫瘤細(xì)胞周期與增殖能力，其基因突變和缺失被認(rèn)為參與腫瘤的發(fā)生發(fā)展[10]。BAP1屬于泛素羧基末端水解酶家族成員，具有去泛素化酶活性，定位于細(xì)胞核內(nèi)，可與乳腺癌1號(hào)基因相互作用，發(fā)揮抑制腫瘤細(xì)胞增殖、侵襲及遷移能力的作用[11]。馬晶晶等[12]通過(guò)對(duì)41例成年慢性粒-單核細(xì)胞白血病患者的研究發(fā)現(xiàn)，其BAP1陽(yáng)性表達(dá)率僅為31.70%。Kim SH 等[13]針對(duì)局限性腎細(xì)胞癌的研究也發(fā)現(xiàn)BAP1陽(yáng)性表達(dá)率顯著降低。此次針對(duì)老年LAC患者的研究得出了與上述文獻(xiàn)報(bào)道相近的結(jié)果，且發(fā)現(xiàn)BAP1與老年LAC患者TNM 分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、胸膜侵犯顯著相關(guān)，提示BAP1在多種惡性腫瘤及老年LAC 體內(nèi)呈異常低表達(dá)狀態(tài)，且參與腫瘤的增殖、侵襲及遷移。BAP1能夠去除底物蛋白質(zhì)的泛素化修飾，使底物逃逸“泛素-蛋白酶體”降解途徑，增強(qiáng)其穩(wěn)定性，或影響底物的功能活性，從而調(diào)控相關(guān)信號(hào)傳導(dǎo)；同時(shí)能調(diào)控細(xì)胞轉(zhuǎn)錄、表觀遺傳、DNA 損傷修復(fù)等；而B(niǎo)AP1表達(dá)缺失則使上述作用減弱，最終引起腫瘤發(fā)生、進(jìn)展[14]。此外，有學(xué)者認(rèn)為，細(xì)胞核相關(guān)抗原Ki-67 的檢測(cè)可指導(dǎo)非小細(xì)胞肺癌患者術(shù)后是否需要進(jìn)一步開(kāi)展輔助治療[15]。Ki-67是一種與增殖細(xì)胞相關(guān)的核蛋白質(zhì)，由MKI-67基因編碼，與核糖體RNA 轉(zhuǎn)錄有關(guān)。Ki-67 失活可導(dǎo)致核糖體RNA 合成受限，其可以作為反映細(xì)胞增殖的標(biāo)記物，同時(shí)可用于判斷腫瘤惡性程度及侵襲力[16]。Yuan X 等[17]研究指出，Ki-67 存在于細(xì)胞周期G0期以外的所有階段（細(xì)胞增殖的G1、S、G2和M 期），具有半衰期短的特性，脫離細(xì)胞周期后會(huì)被迅速降解，在反映腫瘤細(xì)胞增值率方面的可靠性較高。已有大量研究證實(shí)Ki-67與多種惡性腫瘤的發(fā)生發(fā)展、腫瘤惡性生物學(xué)行為及預(yù)后有關(guān)[18]。本研究進(jìn)一步通過(guò)隨訪研究發(fā)現(xiàn)通過(guò)檢測(cè)BAP1及Ki-67 的陽(yáng)性表達(dá)情況，可能用于老年LAC患者預(yù)后評(píng)估，有可能成為老年LAC患者治療的新靶點(diǎn)。

綜上可知，BAP1陽(yáng)性表達(dá)率降低及Ki-67陽(yáng)性表達(dá)率升高均參與老年LAC 的發(fā)生發(fā)展，且與LAC 腫瘤侵襲存在密切相關(guān)性，早期檢測(cè)有助于老年LAC 的診斷和預(yù)后評(píng)估；它們作為腫瘤的潛在標(biāo)志物，將會(huì)成為推動(dòng)老年LAC 研究進(jìn)展的新動(dòng)力。