(青島大學(xué)附屬醫(yī)院婦科，山東 青島 266003)

卵巢癌因早期癥狀不明顯，且無(wú)有效的篩查手段，大多數(shù)患者發(fā)現(xiàn)時(shí)已屬晚期，雖經(jīng)手術(shù)及化療5年生存率仍較低[1-2]。白細(xì)胞介素-33(IL-33)是致癌抑制因子2(ST2)受體的配體，具有胞內(nèi)轉(zhuǎn)錄因子和胞外細(xì)胞因子雙重功能[3]。研究發(fā)現(xiàn)，IL-33在包括胃癌、乳腺癌、腎細(xì)胞癌、顱咽管瘤、卵巢癌在內(nèi)的多種腫瘤中表達(dá)均升高[4-8]。KIM等[9]研究發(fā)現(xiàn)，IL-33/ST2途徑可通過(guò)級(jí)聯(lián)誘導(dǎo)下游信號(hào)通路參與腫瘤的發(fā)生發(fā)展，阻斷IL-33/ST2途徑可以抑制腫瘤生長(zhǎng)，提示IL-33/ST2信號(hào)通路可能是腫瘤治療的新靶點(diǎn)。本研究通過(guò)免疫組織化學(xué)方法檢測(cè)卵巢癌組織、交界性腫瘤組織、良性腫瘤組織及正常卵巢組織中IL-33及ST2蛋白的表達(dá)情況并分析其臨床意義，為尋找卵巢癌新的檢測(cè)標(biāo)志物及治療靶點(diǎn)提供思路。

1 材料與方法

1.1 材料來(lái)源

收集我院婦科2010年1月—2013年12月手術(shù)切除卵巢患者的病理標(biāo)本110例，其中卵巢癌患者60例，年齡45～68歲，<50歲16例，≥50歲44例；交界性腫瘤患者28例，年齡47～70歲；良性腫瘤患者22例，年齡48～69歲。所有患者均為首發(fā)，且患者病歷資料完整，術(shù)前均未接受過(guò)化學(xué)藥物、放射或免疫抑制劑治療，術(shù)后均經(jīng)病理學(xué)檢查確診。根據(jù)國(guó)際婦產(chǎn)科協(xié)會(huì)(FIGO)2009年卵巢癌臨床病理分期標(biāo)準(zhǔn)，其中Ⅰ～Ⅱ期23例，Ⅲ～Ⅳ期37例；組織分化程度：高分化(G1)17例、中分化(G2)12例，低分化(G3)31例；發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移15例，無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移45例；漿液性卵巢癌43例，其他類(lèi)型卵巢癌17例。收集同期因子宮疾病而行卵巢切除術(shù)的20例正常卵巢組織作為對(duì)照組。正常對(duì)照組患者年齡45～68歲，平均52.4歲。本研究經(jīng)本院倫理學(xué)委員會(huì)批準(zhǔn)且所有患者均知情同意。

1.2 研究方法

1.2.1免疫組織化學(xué)法檢測(cè)IL-33、ST2蛋白表達(dá)采用石蠟切片機(jī)對(duì)所有石蠟包埋后的病理組織行4 μm厚連續(xù)切片，每個(gè)樣本切取5片，二甲苯脫蠟、檸檬酸行組織修復(fù)后，加入一抗后室溫孵育1～2 h，磷酸鹽緩沖液沖洗3次，加入二抗室溫孵育約20 min，洗滌后加入200 μL DAB顯色，終止顯色后使用蘇木精復(fù)染30 s，脫水后中性樹(shù)膠封片。

1.2.2免疫組化結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn) 所有結(jié)果均由兩名經(jīng)驗(yàn)豐富的病理科醫(yī)師采用雙盲法在光鏡下進(jìn)行觀(guān)察判定。細(xì)胞質(zhì)出現(xiàn)淡黃色至棕黃色或棕褐為細(xì)胞染色陽(yáng)性。對(duì)綜合陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)及染色強(qiáng)度進(jìn)行判斷，0～4分為IL-33或者ST2染色陰性，5～12分為IL-33或ST2染色陽(yáng)性。每張切片在200倍高倍鏡下隨機(jī)選取5個(gè)視野進(jìn)行陽(yáng)性細(xì)胞計(jì)數(shù)。

2 結(jié) 果

2.1 IL-33、ST2蛋白在不同組織中的表達(dá)情況

IL-33、ST2蛋白表達(dá)于細(xì)胞質(zhì)內(nèi)且所有卵巢組織中均有表達(dá)(圖1A～H)。卵巢癌、交界性腫瘤、良性腫瘤以及正常卵巢組織中IL-33蛋白陽(yáng)性表達(dá)分別為45、17、7和4例，卵巢癌組織及交界性腫瘤組織中IL-33陽(yáng)性表達(dá)率明顯高于正常卵巢組織和良性腫瘤組織，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=7.859～19.118，P<0.05)；良性腫瘤組織與正常卵巢組織相比，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；卵巢癌、交界性腫瘤、良性腫瘤以及正常卵巢組織中ST2蛋白陽(yáng)性表達(dá)分別為43、15、10和3例，卵巢癌組織、交界性腫瘤組織以及良性腫瘤組織中ST2陽(yáng)性表達(dá)率明顯高于正常卵巢組織，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=4.546～19.710，P<0.05)。

2.2 卵巢癌組織中IL-33及ST2蛋白表達(dá)與臨床病理特征的相關(guān)性

IL-33及ST2蛋白陽(yáng)性表達(dá)率與卵巢癌組織分化及臨床分期有關(guān)(χ2=3.972～5.319，P<0.05)；而與患者年齡、卵巢癌病理類(lèi)型及是否發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移無(wú)關(guān)(P>0.05)。見(jiàn)表1。

2.3 IL-33與ST2表達(dá)的相關(guān)性分析

Spearman相關(guān)性分析結(jié)果顯示，IL-33與ST2蛋白在卵巢癌組織中的表達(dá)呈顯著正相關(guān)性(r=0.577，P<0.05)。見(jiàn)表2。

表1 IL-33、ST2蛋白表達(dá)與臨床病理特征的關(guān)系(例)

表2 IL-33蛋白與ST2蛋白表達(dá)之間的相關(guān)性(例)

3 討 論

IL-33是IL-1家族的新成員，廣泛存在于上皮細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞等構(gòu)成機(jī)體防御系統(tǒng)的細(xì)胞中[10-11]。IL-33與腫瘤相關(guān)的炎癥有關(guān)。已有研究證實(shí)，乳腺癌、卵巢癌患者腫瘤組織中的IL-33蛋白水平高表達(dá)[5，8]。IL-33以自分泌和旁分泌的方式激活腫瘤基質(zhì)細(xì)胞癌癥相關(guān)成纖維細(xì)胞和替代性活化的巨噬細(xì)胞，同時(shí)，IL-33也被證明可與癌基因直接作用，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的增殖、轉(zhuǎn)化和轉(zhuǎn)移[12-13]。ST2是IL-33的受體，屬于Toll樣受體家族的成員之一。有報(bào)道指出，IL-33及其受體ST2可通過(guò)激活細(xì)胞外信號(hào)調(diào)節(jié)激酶(ERK)1/2信號(hào)通路，促進(jìn)癌細(xì)胞的侵襲與轉(zhuǎn)移[14-16]。此外，IL-33/ST2信號(hào)通路還能夠通過(guò)腫瘤壞死因子受體相關(guān)分子6介導(dǎo)的內(nèi)皮型一氧化氮合酶途徑，誘導(dǎo)一氧化氮產(chǎn)生，促進(jìn)腫瘤血管生成[17]。IL-33/ST2的主動(dòng)信號(hào)傳導(dǎo)導(dǎo)致免疫效應(yīng)細(xì)胞的激活，從而導(dǎo)致致癌原細(xì)胞或者抗腫瘤細(xì)胞募集到腫瘤微環(huán)境中[18-19]。在上皮細(xì)胞中，IL-33/ST2的激活能夠特異性促進(jìn)趨化因子的產(chǎn)生。此外，IL-33/ST2信號(hào)通路的激活還可以觸發(fā)依賴(lài)于Th2的M2巨噬細(xì)胞極化，促進(jìn)腫瘤的發(fā)展[20-22]?，F(xiàn)有研究發(fā)現(xiàn)，上皮性卵巢癌中IL-33表達(dá)的上調(diào)會(huì)導(dǎo)致腫瘤的發(fā)生發(fā)展[23]。此外，IL-33/ST2軸與上皮性卵巢癌患者預(yù)后不良密切相關(guān)，可以通過(guò)調(diào)節(jié)ERK和JNK信號(hào)促進(jìn)卵巢癌的生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移[24]。WANG等[25]研究發(fā)現(xiàn)，激活I(lǐng)L-33通路能夠促進(jìn)卵巢癌細(xì)胞的增殖、轉(zhuǎn)移以及侵襲能力，提示IL-33/ST2信號(hào)通路與卵巢癌的發(fā)生發(fā)展可能有關(guān)系。

A～D：IL-33蛋白；E～H：ST2蛋白；蘇木精染色，200倍

圖1 IL-33及ST2蛋白在不同卵巢組織中的表達(dá)情況

本研究檢測(cè)了卵巢癌中IL-33、ST2蛋白的表達(dá)情況，旨在探究IL-33、ST2在卵巢癌發(fā)病過(guò)程中的作用。研究結(jié)果表明，卵巢癌及交界性腫瘤組織中IL-33、ST2的表達(dá)明顯增高，且明顯高于正常卵巢組織，提示IL-33、ST2蛋白的高表達(dá)可能參與卵巢癌的發(fā)生發(fā)展，與已有的研究結(jié)果一致[24]。臨床病理分期、組織分化程度及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等臨床病理特征是評(píng)價(jià)疾病惡性程度的重要指標(biāo)，通常臨床分期越高、分化程度越低，腫瘤惡性程度越高，患者病情越嚴(yán)重[26-27]。CUI等[28]研究表明，IL-33與癌癥患者臨床病理分期及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移顯著相關(guān)，與侵襲深度無(wú)關(guān)。本研究結(jié)果顯示，臨床病理分期越晚、組織分化程度越低的卵巢癌患者，IL-33、ST2蛋白陽(yáng)性表達(dá)率越高，提示IL-33、ST2可能參與了卵巢癌的增殖、凋亡等過(guò)程。此外，Spearman相關(guān)性分析顯示IL-33與ST2的蛋白陽(yáng)性表達(dá)率呈正相關(guān)，提示IL-33與ST2可能共同參與了卵巢癌的發(fā)生發(fā)展過(guò)程。

目前，大量的組織學(xué)及分子學(xué)證據(jù)表明輸卵管上皮與高級(jí)別漿液性癌密切相關(guān)[29-30]。本研究未對(duì)輸卵管中IL-33及ST2蛋白表達(dá)進(jìn)行檢測(cè)，存在一定局限性，且本研究未進(jìn)行預(yù)后生存分析，同時(shí)存在樣本量少的局限，今后的研究中需進(jìn)一步收集病理數(shù)據(jù)，探究IL-33及ST2在卵巢癌起源中的意義及可能的作用機(jī)制。

綜上所述，IL-33、ST2蛋白在卵巢癌組織中高表達(dá)，且與卵巢癌的臨床病理分期及分化有關(guān)，推測(cè)IL-33、ST2可能參與了卵巢癌的發(fā)生發(fā)展，早期聯(lián)合檢測(cè)可作為輔助診斷卵巢癌病情嚴(yán)重程度的重要指標(biāo)。