梁欣雨 周曉鋼 何兵 楊世艷

中圖分類號 R917 文獻(xiàn)標(biāo)志碼 A 文章編號 1001-0408（2020）10-1179-06

DOI 10.6039/j.issn.1001-0408.2020.10.05

摘 要 目的：建立同時測定小兒金翹顆粒中7種成分含量的方法。方法：采用一測多評法（QAMS）。色譜柱為Lubex Kromasil C18，流動相為乙腈-0.1%磷酸水溶液（梯度洗脫），檢測波長為326 nm，流速為1.0 mL/min，柱溫為40 ℃，進樣量為10 ?L。以綠原酸為內(nèi)參物，計算新綠原酸、隱綠原酸、連翹酯苷A、異綠原酸B、異綠原酸A、異綠原酸C的相對校正因子;考察不同色譜系統(tǒng)、色譜柱、流動相比例、流速、柱溫等對相對校正因子的影響，并采用兩點校正法結(jié)合相對保留時間校正法對各成分進行色譜峰定位。分別按QAMS法和標(biāo)準(zhǔn)曲線法檢測7種成分的含量，并進行比較。結(jié)果：新綠原酸、綠原酸、隱綠原酸、連翹酯苷A、異綠原酸B、異綠原酸A、異綠原酸C檢測質(zhì)量濃度的線性范圍分別為9.27～92.70、37.36～373.60、13.02～130.20、7.15～71.50、4.56～45.60、6.32～63.20、14.69～146.90 ?g/mL（r≥0.999 7）;定量限分別為1.38、1.41、1.40、1.99、1.10、1.17、1.10 ng，檢測限分別為0.41、0.42、0.42、0.60、0.33、0.35、0.33 ng;精密度、重復(fù)性、穩(wěn)定性試驗的RSD均小于2%，平均加樣回收率為98.28%～99.15%（RSD<2%，n=9）。新綠原酸、隱綠原酸、連翹酯苷A、異綠原酸B、異綠原酸A、異綠原酸C相對于綠原酸的相對校正因子分別為0.995、1.007、0.580、1.243、1.252、1.247;不同色譜條件下其相對校正因子的RSD均小于3%。采用兩點校正法結(jié)合相對保留時間校正法預(yù)測的各待測成分的保留時間與實測值的相對誤差絕對值均小于2%。QAMS法測得的含量分別為2.790～3.416、14.526～17.907、3.763～4.531、1.625～1.982、1.087～1.523、1.434～2.219、3.631～5.078 mg/g，標(biāo)準(zhǔn)曲線法測得的含量分別為2.811～3.438、14.512～17.893、3.739～4.508、1.656～2.012、1.108～1.544、1.460～2.245、3.597～5.045 mg/g;兩種方法測得含量的相對誤差均在±2%以內(nèi)。結(jié)論：兩點校正法結(jié)合相對保留時間校正法能準(zhǔn)確定位各成分色譜峰;所建QAMS簡便、快捷、準(zhǔn)確、可靠，可用于同時測定小兒金翹顆粒中7種成分的含量。

關(guān)鍵詞 一測多評法;小兒金翹顆粒;含量測定;色譜峰定位;兩點校正法;相對保留時間校正法

Simultaneous Determination of 7 Constituents in Xiaoer Jinqiao Granules by QAMS

LIANG Xinyu1，ZHOU Xiaogang2，HE Bing2，YANG Shiyan3（1. The First Clinical College of Chongqing Medical University， Chongqing 400016， China; 2. School of Pharmaceutical Sciences， Southwest Medical University， Sichuan Luzhou 646000， China; 3. Dept. of Ultrasonic Imaging， the Affiliated Traditional Chinese Medicine Hospital of Southwest Medical University， Sichuan Luzhou 646000， China）

ABSTRACT? ?OBJECTIVE： To establish a method for simultaneous determination of 7 constituents in Xiaoer jinqiao granules. METHODS： QAMS method was adopted. The determination was performed on Lubex Kromasil C18 column with mobile phase consisted of acetonitrile-0.1% phosphoric acid solution （gradient elution）. The detection wavelength was set at 326 nm， the flow rate was 1.0 mL/min. The column temperature was 40 ℃， and sample size was 10 ?L. Using chlorogenic acid as the internal reference， the relative correction factors （RCF） of neochlorogenic acid， cryptochlorogenic acid， forsythiaside A， isochlorogenic acid B， isochlorogenic acid A and isochlorogenic acid C were calculated. The effects of different chromatogram system， chromatogram column， the ratio of mobile phase， flow rate and column temperature on RCF were investigaten. According to the two-point correction method combined with the relative retention time correction of the components to be tested， the peak location was carried out. The contents of 7 components were determined by QAMS and SCM respectively and then compared. RESULTS： The linear range of neochlorogenic acid， chlorogenic acid， cryptochlorogenic acid， forsythoside A， isochlorogenic acid B， isochlorogenic acid A， isochlorogenic acid C were 9.27-92.70， 37.36-373.60， 13.02-130.20， 7.15-71.50， 4.56-45.60， 6.32-63.20， 14.69-146.90 ?g/mL （r≥0.999 7）. The limits of quantification were 1.38， 1.41， 1.40， 1.99， 1.10， 1.17， 1.10 ng， respectively; and the limits of detection were 0.41， 0.42， 0.42， 0.60， 0.33， 0.35， 0.33 ng， respectively. RSDs of precision， repeatability and stability tests were all less than 2%; average recoveries were 98.28%-99.15% （RSD<2.0%， n=9）. RCFs of neochlorogenic acid， cryptochlorogenic acid， forsythiaside A， isochlorogenic acid B， isochlorogenic acid A and isochlorogenic acid C relative to chlorogenic acid were 0.995， 1.007， 0.580， 1.243， 1.252 and 1.247， respectively. RSDs of RCFs were all lower than 3% under different chromatogram conditions. Absolute value of relative error between the relative retention time of components to be tested predicted by two-point correction combined with relative retention time correction and measured value was less than 2%. The contents measured by QAMS were 2.790-3.416， 14.526-17.907， 3.763-4.531， 1.625-1.982， 1.087-1.523， 1.434-2.219， 3.631-5.078 mg/g; the contents measured by SCM method were 2.811-3.438， 14.512-17.893， 3.739-4.508， 1.656-2.012， 1.108-1.544， 1.460-2.245， 3.597-5.045 mg/g; relative errors of the two methods were within±2%. CONCLUSIONS： Two-point correction method combined with relative retention time correction can accurately locate the peaks of each constituent; established QAMS method is simple， rapid， accurate and reliable， it can be used for simultaneous determination of 7 constituents in Xiaoer jinqiao granules.

KEYWORDS? ?QAMS; Xiaoer jinqiao granules; Content determination; Peak location; Two-point correction method; Relative retention time correction

小兒金翹顆粒是由金銀花、連翹、葛根、大青葉、山豆根、柴胡、甘草等中藥組成的復(fù)方制劑，具有疏風(fēng)清熱、解毒利咽、消腫止痛之功效[1]，臨床上主要用于治療小兒急性上呼吸道感染、流行性感冒、急性扁桃體炎、小兒手足口病等[2-5]。該制劑中金銀花為君藥，含有綠原酸、新綠原酸、隱綠原酸和異綠原酸A、B、C等多種酚酸類成分，具有較強的抗菌、抗炎、抗氧化等生物活性[6]。連翹酯苷A是臣藥連翹的主要活性成分，具有抗菌、抗病毒、抗氧化等藥理活性[7]?！秶宜幤窐?biāo)準(zhǔn)：新藥轉(zhuǎn)正標(biāo)準(zhǔn)（第66冊）》[1]中記載，小兒金翹顆粒以綠原酸為質(zhì)量控制指標(biāo)，采用高效液相色譜法（HPLC）檢測。雖然也有文獻(xiàn)報道了小兒金翹顆粒的質(zhì)量控制，但均以綠原酸或連翹苷含量為指標(biāo)[8-9]。由于綠原酸類成分性質(zhì)不穩(wěn)定，在儲存過程中可與其異構(gòu)體發(fā)生相互轉(zhuǎn)化[10]，因此以綠原酸單一成分作為評價指標(biāo)具有一定的片面性，無法準(zhǔn)確反映制劑的質(zhì)量。連翹的有效成分連翹苷含量較低，且在本研究前期試驗中發(fā)現(xiàn)，其在小兒金翹顆粒中難以檢測，故連翹苷不宜作為評價指標(biāo)，而宜選擇含量更高且更穩(wěn)定的活性成分連翹酯苷A作為指標(biāo)成分。

在中藥多指標(biāo)定量分析中，由于部分對照品緊缺、昂貴，導(dǎo)致傳統(tǒng)多指標(biāo)定量檢測成本較高。而一測多評法（QAMS）能以一種便宜、易得的對照品為內(nèi)參物，通過相對校正因子測定其他成分的含量[11]。QAMS法的關(guān)鍵是如何準(zhǔn)確定位各成分的色譜峰，但由于儀器、色譜柱不同，待測成分的保留時間會發(fā)生明顯飄移，從而影響其準(zhǔn)確定位。目前，常用的色譜峰定位方法包括相對保留時間校正法和兩點校正法，其中相對保留時間校正法僅適用于保留時間靠前的色譜峰，隨著保留時間的增加，其定位誤差越大[11];兩點校正法適用于相對保留時間靠后的色譜峰，但唯一不足的是保留時間靠前的（特別是第1個）色譜峰定位不準(zhǔn)[11]。基于此，本研究采用QAMS法同時測定小兒金翹顆粒中綠原酸、新綠原酸、隱綠原酸、異綠原酸A、異綠原酸B、異綠原酸C、連翹酯苷A的含量;通過兩點校正法結(jié)合相對保留時間校正法對待測成分進行色譜峰定位，旨在為進一步完善和提高該藥的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)提供參考。

1材料

1.1 儀器

P680-PDA型HPLC儀，包括四元梯度泵、二極管陣列檢測器、柱溫箱和色譜工作站（美國Dionex公司）;LC2030型HPLC儀，包括四元梯度泵、紫外檢測器、自動進樣器、柱溫箱和色譜工作站（日本Shimadzu公司）;MS105DU型十萬分之一電子天平（瑞士Mettler-Toledo公司）;AS7240A型超聲波清洗器（天津奧特賽恩斯儀器有限公司）;Direct-Q3型超純水系統(tǒng)（美國Millipore公司）。

1.2 藥品與試劑

小兒金翹顆粒（四川凱京制藥有限公司，批號：20180912、20181106、20181228，規(guī)格：5 g/袋）;小兒金翹陰性對照顆粒（由本課題組按該制劑的處方工藝分別制得的缺金銀花、連翹的陰性樣品）;新綠原酸對照品（批號：A0023-19031001，純度：99.67%）、綠原酸對照品（批號：A0022-19030620，純度：99.39%）、隱綠原酸對照品（批號：A0024-19032403，純度：99.07%）、異綠原酸B對照品（批號：A0026-19031602，純度：99.05%）、異綠原酸A對照品（批號：A0025-19032601，純度：98.82%）、異綠原酸C對照品（批號：A0027-19031603，純度：99.84%）、連翹酯苷A對照品（批號：A0590-18061301，純度：99.15%）均購自成都曼斯特生物科技有限公司;乙腈、甲醇為色譜純，其余試劑均為分析純，水為超純水。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱：Lubex Kromasil C18（250 mm×4.6 mm，5 ?m）;流動相：乙腈（A）-0.1%磷酸水溶液（B），梯度洗脫（0～5 min，10%A→15%A;5～15 min，15%A→30%A;15～16 min，30%A→10%A;16～20 min，10%A）;檢測波長：326 nm;流速：1.0 mL/min;柱溫：40 ℃;進樣量：10 ?L。

2.2 溶液的制備

2.2.1 混合對照品溶液 分別精密稱取新綠原酸、綠原酸、隱綠原酸、連翹酯苷A、異綠原酸B、異綠原酸A、異綠原酸C對照品適量，加75%甲醇溶解，制成上述7種成分質(zhì)量濃度分別為0.927、3.736、1.302、0.715、0.456、0.632、1.469 mg/mL的單一對照品貯備液。取上述各單一對照品貯備液0.8 mL，置于10 mL量瓶中，加75%甲醇稀釋至刻度，搖勻，制成上述7種成分質(zhì)量濃度分別為的0.074、0.299、0.104、0.057、0.036、0.051、0.118 mg/mL混合對照品溶液，避光保存。

2.2.2 供試品溶液 取本品適量，研細(xì)，取約1.0 g，精密稱定，置于具塞錐形瓶中，精密加入75%甲醇50 mL，稱定質(zhì)量，超聲（功率：240 W，頻率：40 kHz）處理10 min，冷卻至室溫，再次稱定質(zhì)量，用75%甲醇補足減失的質(zhì)量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。

2.2.3 陰性對照溶液 取小兒金翹陰性對照顆粒，按“2.2.2”項下方法分別制備缺金銀花、連翹的陰性對照溶液。

2.3 系統(tǒng)適用性試驗

分別精密量取“2.2”項下混合對照品溶液、供試品溶液、陰性對照溶液適量，按“2.1”項下色譜條件進樣測定，記錄色譜圖，詳見圖1。結(jié)果，新綠原酸、綠原酸、隱綠原酸、連翹酯苷A、異綠原酸B、異綠原酸A、異綠原酸C與其相鄰色譜峰的分離度均大于2.22;拖尾因子分別為1.07、1.00、1.03、1.01、1.00、1.07、1.10，理論板數(shù)均不低于23 000;陰性對照在對應(yīng)位置處無吸收峰，對測定無干擾。

2.4線性關(guān)系與定量限、檢測限考察

分別精密量取“2.2.1”項下各單一對照品貯備液0.1、0.2、0.4、0.6、0.8、1 mL，置于10 mL量瓶中，加75%甲醇稀釋至刻度，制得系列線性工作溶液，按“2.1”項下色譜條件進樣測定，記錄峰面積。以待測成分質(zhì)量濃度（c，?g/mL）為橫坐標(biāo)、峰面積（A）為縱坐標(biāo)進行線性回歸，回歸方程與線性范圍見表1。另取“2.2.1” 項下混合對照品溶液適量，用75%甲醇逐級稀釋，分別以信噪比10 ∶ 1、3 ∶ 1計算定量限、檢測限，結(jié)果見表1。

2.5 精密度試驗

取“2.2.1”項下混合對照品溶液適量，按“2.1”項下色譜條件連續(xù)進樣測定6次，記錄峰面積。結(jié)果，新綠原酸、綠原酸、隱綠原酸、連翹酯苷A、異綠原酸B、異綠原酸A、異綠原酸C峰面積的RSD分別為0.29%、0.17%、0.32%、0.41%、0.36%、0.33%、0.25%（n=6），表明儀器精密度良好。

2.6 重復(fù)性試驗

取小兒金翹顆粒樣品（批號：20180912），每份1.0 g，共6份，精密稱定，按“2.2.2”項下方法制備供試品溶液，再按“2.1”項下色譜條件進樣測定，記錄峰面積并按標(biāo)準(zhǔn)曲線法計算樣品中7種待測成分的含量。結(jié)果，新綠原酸、綠原酸、隱綠原酸、連翹酯苷A、異綠原酸B、異綠原酸A、異綠原酸C含量的RSD分別為1.19%、1.08%、1.26%、1.41%、1.32%、1.20%、1.13%（n=6），表明本方法重復(fù)性良好。

2.7 穩(wěn)定性試驗

取 “2.2.2”項下供試品溶液（批號：20180912）適量，在室溫密閉條件下放置0、4、8、12、24、36 h時，按“2.1”項下色譜條件進樣測定，記錄峰面積。結(jié)果，新綠原酸、綠原酸、隱綠原酸、連翹酯苷A、異綠原酸B、異綠原酸A、異綠原酸C峰面積的RSD分別為0.83%、0.66%、0.95%、0.90%、0.87%、0.78%、0.71%（n=6），表明供試品溶液在室溫密閉條件下放置36 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.8 加樣回收率試驗

取已知含量的小兒金翹顆粒（批號：20180912），每份0.5 g，共9份，精密稱定，分別加入一定量的單一對照品溶液（按“2.2.1”項下方法制備，含新綠原酸1.925 mg/mL、綠原酸10.219 mg/mL、隱綠原酸2.507 mg/mL、連翹酯苷A 1.094 mg/mL、異綠原酸B 1.016 mg/mL、異綠原酸A 1.312 mg/mL、異綠原酸C 2.968 mg/mL），按“2.2.2”項下方法制備供試品溶液，再按“2.1”項下色譜條件進樣測定，記錄峰面積并計算加樣回收率。結(jié)果，新綠原酸、綠原酸、隱綠原酸、連翹酯苷A、異綠原酸B、異綠原酸A、異綠原酸C的平均加樣回收率分別為98.63%（RSD=1.39%，n=9）、99.15%（RSD=1.10%，n=9）、98.78%（RSD=1.34%，n=9）、98.37%（RSD=1.53%，n=9）、98.28%（RSD=1.62%，n=9）、98.46%（RSD=1.50%，n=9）、98.85%（RSD=1.19%，n=9）。

2.9 相對校正因子的計算及驗證

2.9.1 相對校正因子的計算 本研究前期試驗發(fā)現(xiàn)，由于小兒金翹顆粒中綠原酸含量最高，其對照品價格便宜且易得，故以綠原酸為內(nèi)參物，計算新綠原酸、隱綠原酸、連翹酯苷A、異綠原酸B、異綠原酸A及異綠原酸C相對于綠原酸的相對校正因子（fi/s），相對校正因子（fi/s）=ai/as[12]。式中，ai為待測成分標(biāo)準(zhǔn)曲線斜率，as為內(nèi)參物標(biāo)準(zhǔn)曲線低利率。結(jié)果，新綠原酸、隱綠原酸、連翹酯苷A、異綠原酸B、異綠原酸A及異綠原酸C相對于綠原酸的相對校正因子分別為0.995、1.007、0.580、1.243、1.252、1.247。

2.9.2 相對校正因子耐用性考察 為考察相對校正因子在不同色譜條件下的耐用性，本研究適當(dāng)改變了流動相各梯度點的比例（±2%）、流速（±2%）、柱溫（±5 ℃）、水相pH（±0.2）、檢測波長（±5 nm），并平行操作3次。結(jié)果，各待測成分相對校正因子的RSD均小于3%（n=3），表明色譜條件在一定范圍內(nèi)的變化對各待測成分相對校正因子的影響較小。

2.9.3 相對校正因子重現(xiàn)性考察 本研究考察了不同品牌HPLC儀（Dionex、Shimadzu）以及不同色譜柱[Lubex Kromasil C18、AkzoNobel Kromasil C18、Dikma Silversil C18，均為（250 mm×4.6 mm，5 ?m）]對相對校正因子的影響，平行操作3次。結(jié)果，各待測成分相對校正因子的RSD均小于2%（n=3），表明相對校正因子在不同色譜條件下具有良好的重現(xiàn)性。

2.10 待測成分色譜峰的定位

QAMS法通常采用相對保留時間定位色譜峰，即通過對比不同條件下的相對保留時間，若相對保留時間基本一致則認(rèn)定為同一色譜峰[13]。當(dāng)色譜峰眾多且密集時，由于未測量的其余色譜峰均需計算相對保留時間，因此其操作非常繁瑣。假設(shè)其余條件下的相對保留時間與標(biāo)準(zhǔn)相對保留時間一致，再計算其相對應(yīng)的理論保留時間，則可簡化過程，即各色譜峰的預(yù)測保留時間（y）=其余條件下內(nèi)參物綠原酸的保留時間×Lubex Kromasil C18對應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)相對保留時間（x），結(jié)果見表2[以第1根色譜柱為標(biāo)準(zhǔn)，相對誤差（RE）=（預(yù)測保留時間-實測保留時間）/實測保留時間×100%]。

由表2可知，采用相對保留時間校正法定位色譜峰時，保留時間越靠前的色譜峰，其實測和預(yù)測保留時間的RE絕對值越小，定位越準(zhǔn)確，這部分色譜峰可采用相對保留時間校正法定位;但隨著保留時間的增加，保留時間靠后的色譜峰的實測和預(yù)測保留時間的RE絕對值越大，保留時間甚至相差2 min以上，難以準(zhǔn)確定位。

有研究發(fā)現(xiàn)，在相同的色譜條件下即使采用不同的儀器和色譜柱，各成分的保留時間也存在簡單的線性關(guān)系[14]。根據(jù)此原理，本研究以待測成分在Lubex Kromasil C18的保留時間為橫坐標(biāo)（x），以其余色譜柱的保留時間為縱坐標(biāo)（y），繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，Lubex Kromasil C18與其余色譜柱保留時間的相關(guān)系數(shù)分別為0.999 7、0.999 4、0.999 7、0.999 0、0.997 8。由于本研究的目的僅為定位色譜峰，且在實際操作中，因其他色譜峰未知，故無法采用多個數(shù)據(jù)點計算保留時間的標(biāo)準(zhǔn)曲線，但若在色譜圖中前后各取一點，以內(nèi)參物綠原酸和最易辨認(rèn)的色譜峰（如最后一個色譜峰異綠原酸C）進行兩點校正[15]，同法繪制校正曲線。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，兩點校正與7個點繪制的標(biāo)準(zhǔn)曲線基本重合，提示兩點校正法可用于預(yù)測各成分的出峰時間，隨后將Lubex Kromasil C18的標(biāo)準(zhǔn)保留時間帶入校正方程，計算各成分的預(yù)測保留時間，結(jié)果見表3。

由表3可知，即使采用不同的儀器和色譜柱，隨著保留時間的增加，采用兩點校正法的預(yù)測保留時間和實測保留時間的RE絕對值較低，且非常接近。但若選擇的點不包含第1個色譜峰，則第1個色譜峰的定位不準(zhǔn)。因此對于第1個色譜峰新綠原酸，可采用相對保留時間校正法預(yù)測定位，其余成分的色譜峰可采用兩點校正法預(yù)測定位，這可使每個色譜峰均能獲得準(zhǔn)確的預(yù)測保留時間（RE<2%）。若色譜峰臨近處還有其他色譜峰，則可根據(jù)各成分的紫外吸收光譜（圖2）、整體峰形或峰面積百分比進一步確認(rèn)[15]。

2.11 含量測定結(jié)果比較

分別采用QAMS法和標(biāo)準(zhǔn)曲線法測定樣品中各成分的含量，平行操作3次，結(jié)果見表4。結(jié)果顯示，2種方法測得含量的RE絕對值均小于2%，表明兩者測定結(jié)果基本一致，QAMS法可用于小兒金翹顆粒中多指標(biāo)成分的測定[RE=（QAMS法測得值-標(biāo)準(zhǔn)曲線法測得值）/標(biāo)準(zhǔn)曲線法測得值×100%]。

3 討論

3.1 相對校正因子計算

本研究采用斜率校正法計算相對校正因子，即以各待測成分與內(nèi)參物標(biāo)準(zhǔn)曲線斜率之比作為校正因子，該方法相對于多點校正更加簡便、快捷[12]。采用斜率校正法的結(jié)果與標(biāo)準(zhǔn)曲線法結(jié)果之間的差異主要由斜率截距造成，故當(dāng)標(biāo)準(zhǔn)曲線線性關(guān)系較好，斜率截距之比>100時，二者之間的差異才能足夠小，以斜率校正法計算校正因子才具有較好的可行性和準(zhǔn)確性[16]。

3.2 色譜峰的定位

有研究認(rèn)為，在色譜峰定位時，以各條件下相對保留時間的RSD<5%作為色譜峰準(zhǔn)確定位的依據(jù)[11]。但本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，即使?jié)M足該條件，保留時間靠后的色譜峰，其預(yù)測保留時間和實測保留時間仍相差較大（RE絕對值>10%），且部分色譜峰實測與預(yù)測保留時間相差超過2 min。這提示在色譜峰較多、密集且色譜峰紫外吸收相似時，特別是在批間整體峰形不規(guī)則的中草藥中采用相對保留時間校正法很難準(zhǔn)確定位各色譜峰。本研究采用兩點校正獲得校正方程，通過方程預(yù)測各條件下的理論出峰時間，從而快速定位色譜峰。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，除第1個色譜峰外，其余色譜峰均可準(zhǔn)確定位。因此，本研究以相對保留時間校正法定位新綠原酸峰，以兩點校正法定位其他色譜峰。結(jié)果顯示，所有色譜峰預(yù)測和實測保留時間的RE絕對值均小于2%，預(yù)測與實測保留時間相差小于0.3 min，提示所有色譜峰均可實現(xiàn)準(zhǔn)確定位。

3.3 準(zhǔn)確性評價

目前，評價QAMS法準(zhǔn)確性的方法較多，如t檢驗、方差分析、相關(guān)系數(shù)、夾角余弦等[17]。為驗證上述方法的可靠性，本研究前期模擬了因校正因子不準(zhǔn)確所致的較大測量誤差，即將QAMS法測得的任意一個測定值或者所有值同時縮放10倍后再與標(biāo)準(zhǔn)曲線法進行t檢驗和方差分析。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，其P值仍大于0.05，無顯著性差異;隨后，將任意一個測定值縮放10%或所有測定值同時縮放10倍后發(fā)現(xiàn)，相關(guān)系數(shù)或夾角余弦依然>0.999，仍然具有極高的相似性。因此，本研究在參考相關(guān)文獻(xiàn)[18]，采用RE評價QAMS法的準(zhǔn)確性，即任一測定值超過標(biāo)準(zhǔn)曲線法測定值的±2%時，其RE絕對值>2%，提示采用相對誤差評價其準(zhǔn)確性更加科學(xué)合理。

3.4 含量測定結(jié)果分析

本研究結(jié)果顯示，2種方法測得含量的RE絕對值均小于2%，提示2種方法的測定結(jié)果基本一致。QAMS法可用于同時測定小兒金翹顆粒中7種成分的含量。

4 結(jié)語

本研究所建兩點校正法結(jié)合相對保留時間校正法能準(zhǔn)確定位各成分色譜峰;QAMS法簡便、快捷且準(zhǔn)確、可靠，可用于同時測定小兒金翹顆粒中7種成分的含量。

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（收稿日期：2020-01-09 修回日期：2020-04-07）

（編輯：陳 宏）