黃麗麗，黃海靜，吳 飛，曹 威，陸仁飛

（南通大學附屬南通第三醫(yī)院檢驗科，江蘇226006）

新型冠狀病毒肺炎（Corona Virus Disease 2019，COVID-19）[1]于 2019 年 12 月在湖北省武漢市被發(fā)現(xiàn)[2-3]，該病由 2019 新型冠狀病毒（2019-nCoV）感染導致的一種新型肺炎?；颊咧饕憩F(xiàn)為發(fā)熱、干咳和乏力等癥狀，少數(shù)患者可伴有流涕、咽痛和腹瀉，部分患者可出現(xiàn)呼吸困難，嚴重者可快速進展為急性呼吸窘迫綜合征（ARDS）、凝血功能障礙和膿毒癥休克等癥狀[4-5]。2019-nCoV 傳染性強，主要通過呼吸道飛沫和接觸等方式傳播[6-8]，主要引起肺部炎癥病變，還可以引起胃腸道、肝和神經(jīng)系統(tǒng)損害。本研究選擇我院2020 年1 月—2 月收治的南通地區(qū)新型冠狀病毒肺炎患者24 例，觀察患者T 淋巴細胞亞群的變化及其與臨床治療和預后的關(guān)系。

1 資料與方法

1.1 一般資料 新型冠狀病毒肺炎患者24 例均符合《新型冠狀病毒感染的肺炎診療方案（試行第5 版修正版）》診斷標準[9]，所有患者取咽拭子樣本，經(jīng)南通市疾病預防控制中心新型冠狀病毒核酸檢測陽性。其中男性 13 例，女性 11 例，年齡 26～68 歲，平均50.2±13.7 歲。另取同期健康體檢者24 例為正常對照組，其中男性 12 例，女性 12 例，年齡 19～65 歲，平均44.3±13.2 歲。所有受試者簽署知情同意書，本研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會批準。

1.2 檢測方法 兩組研究對象于入院時采集靜脈血2 mL，采用希森美康XN-2000 檢測血常規(guī)。COVID-19 組患者于急性期（入院時）及恢復期（入院后1 周）抽取靜脈血2 mL 置于EDTA 抗凝管中，送流式細胞儀檢測T 細胞亞群，具體操作:吸取CD3/CD8/CD45/CD4/CD19/CD16+56 檢測試劑（深圳邁瑞生物醫(yī)療電子股份有限公司）20 μL 加入試管，再加入50 μL EDTA 抗凝靜脈血，在渦旋混勻器混勻，室溫避光孵育15 min。然后加入450 μL 稀釋后的流式溶血劑，在渦旋混勻器混勻，室溫避光孵育15 min，采用邁瑞B(yǎng)ricyteE6 流式細胞儀檢測外周血CD3+、CD4+、CD8+淋巴細胞。

1.3 統(tǒng)計學處理 應用SPSS21.0 統(tǒng)計學軟件進行數(shù)據(jù)分析。計量資料以表示，組間差異性比較采用獨立t 檢驗或配對t 檢驗；計數(shù)資料以頻數(shù)和率表示。P＜0.05 為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié) 果

2.1 兩組入院時外周血白細胞計數(shù)及分類比較 與對照組比較，COVID-19 組患者中性粒細胞比例顯著增高，淋巴細胞比例和絕對數(shù)下降，差異均有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）；而 WBC 總數(shù)和中性粒細胞絕對數(shù)與對照組比較，差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。見表1。

表1 兩組入院時外周血WBC 計數(shù)及分類比較

2.2 COVID-19 患者急性期 T 細胞亞群絕對數(shù) COVID-19 患者急性期CD3+細胞減少14 例（58.33%），CD4+細胞減少 13 例（54.17%），CD8+細胞減少 11 例（45.83%）。

2.3 COVID-19 患者急性期與恢復期T 細胞亞群比較 COVID-19 患者恢復期外周血 CD3+、CD4+、CD8+細胞絕對數(shù)高于急性期，差異均有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）?；謴推?CD3+、CD4+、CD8+細胞比例及 CD4+/CD8+比值與急性期比較，差異均無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。見表2～3。

表2 COVID-19 患者急性期與恢復期T 細胞絕對數(shù)比較

表3 COVID-19 患者T 細胞亞群比例及CD4+/CD8+比值比較

3 討 論

2019-nCoV 是一種新型β 屬冠狀病毒，屬于單鏈RNA 病毒，其基因特征與SARS-CoV 和MERSCoV 有明顯區(qū)別，是已知可感染人類的第7 種冠狀病毒[10]。T 淋巴細胞亞群是反映機體免疫系統(tǒng)功能的重要細胞，主要由CD4+和CD8+兩類細胞組成。CD4+細胞可以促進T 細胞轉(zhuǎn)化為效應細胞，通過分泌多種細胞因子發(fā)揮作用，還具有轉(zhuǎn)化B 細胞和活化巨噬細胞的作用。CD8+細胞可以抑制B 淋巴細胞抗體的產(chǎn)生和T 細胞的活化，具有細胞毒性，可以直接殺傷靶細胞。正常情況下兩者維持相對平衡和穩(wěn)定，抵抗外界病原體的入侵。因此，T 淋巴細胞在機體抗病毒感染中起關(guān)鍵作用。

本研究結(jié)果顯示，與正常人群比較，COVID-19患者中性粒細胞比例顯著增高，淋巴細胞比例和絕對數(shù)顯著下降，提示2019-nCoV 可能主要作用于T淋巴細胞，侵襲患者淋巴結(jié)等免疫器官。外周血淋巴細胞的變化可以作為COVID-19 早期診斷依據(jù)。本研究發(fā)現(xiàn)58.33%COVID-19 急性期患者CD3+細胞絕對數(shù)下降，54.17%患者CD4+細胞絕對數(shù)下降，45.83%患者CD8+細胞絕對數(shù)下降，淋巴細胞減少的原因可能是:（1）病毒感染使得免疫細胞活化參與抗病毒，導致細胞損傷和凋亡；（2）免疫細胞黏附分子的表達致使血液循環(huán)池細胞向組織內(nèi)移動，引起外周血淋巴細胞減少。當然2019-nCoV 感染患者淋巴細胞減少的深層次機制還有待進一步研究。少數(shù)重癥患者淋巴細胞較少十分顯著，可能與患者機體免疫力低下，細胞殺傷毒性作用下降有關(guān)?；颊呋謴推贑D3+，CD4+，CD8+細胞明顯升高，說明 2019-nCoV 對T 淋巴細胞的損傷是可逆的。觀察治療前后T 淋巴細胞亞群的變化對估計COVID-19 患者的病情和預后有重要作用。

綜上所述，COVID-19 患者T 淋巴細胞存在異常，檢測T 淋巴細胞亞群有助于了解患者的免疫狀況，對指導治療和判斷預后有重要意義。