王志勇，劉升，黃慧艷

（1.南昌大學(xué)第一臨床醫(yī)學(xué)院，南昌 330000；2.江西省于都縣人民醫(yī)院，于都 342300）

食管癌是世界范圍內(nèi)最致命的惡性腫瘤之一，鱗狀細(xì)胞癌是其主要的病理組織學(xué)類型，由于早期癥狀不明顯，很多患者錯(cuò)過了最佳治療的機(jī)會(huì)，以致食管癌的死亡率居高不下[1]。為了提高患者的早診率及預(yù)后生存率，以食管癌的發(fā)生、發(fā)展有關(guān)的相關(guān)基因?yàn)榘悬c(diǎn)的分子靶點(diǎn)治療是目前醫(yī)學(xué)領(lǐng)域的研究方向[2,3]。SOX-2 是SOX 基因家族中的一員，是維持胚胎干細(xì)胞及間充質(zhì)細(xì)胞的穩(wěn)定性的關(guān)鍵基因之一。EGFR 是人類表皮生長因子受體（HER）家族中的一員，又稱為HER1，能夠調(diào)控細(xì)胞對(duì)外界刺激的反應(yīng)并影響腫瘤干細(xì)胞的增殖。目前EGFR 和SOX-2 在很多腫瘤中被發(fā)現(xiàn)，并用于其診斷、治療和預(yù)后轉(zhuǎn)歸的評(píng)估。本次研究探討了EGFR 和SOX-2 在食管鱗狀細(xì)胞癌組織中的表達(dá)情況及其相關(guān)性。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 隨機(jī)選取 2017 年 10 月-2019 年10 月于我院收治并行食管鱗癌組織切除術(shù)和淋巴結(jié)清掃術(shù)的患者80 例。其中男 51 例，女 29 例，年齡 35-75 歲，中位年齡為 65.5 歲。按照 WHO 診斷分類進(jìn)行分組：高、中、低分化組分別為13、41、26例。所有患者術(shù)前均未行放射及化學(xué)等治療，無其他原發(fā)腫瘤。術(shù)后組織標(biāo)本在室溫下放置于10%中性福爾馬林溶液（pH 值為7.2）中固定24-48h，然后制作成蠟塊備用。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法 采用免疫組化二步SP 法檢測Sox2 和 EGFR 蛋白在取取標(biāo)本中表達(dá)：脫蠟至水；蒸餾水沖洗，PBS 溶液沖洗 5min； 抗原修復(fù)；H2O2室溫孵育 10min，3 次 PBS 洗滌； 滴加一抗，4℃冰箱過夜； 滴加二抗后室溫孵育30min，3 次 PBS 洗滌；DAB 顯色，蘇木素復(fù)染后封片顯微鏡下觀察。

1.3 結(jié)果判定 SOX-2 以胞核中出現(xiàn)清晰的棕色顆粒為陽性染色，EGFR 以細(xì)胞膜及細(xì)胞質(zhì)染色呈棕色為陽性染色。染色強(qiáng)度評(píng)分：⑴0 分：細(xì)胞無染色；⑵1 分：呈弱陽性、淺棕表達(dá)；⑶2 分：細(xì)胞深棕色和淺棕色為背景、細(xì)胞染色為棕色背景、細(xì)胞染色為棕色且無背景著色；⑷3 分：細(xì)胞深棕色、無背景著色。細(xì)胞數(shù)評(píng)分：利用400 倍數(shù)高倍鏡下隨機(jī)挑選 5 個(gè)視野，200 細(xì)胞/視野，共計(jì) 1000 個(gè)，取 5個(gè)視野平均數(shù)計(jì)算陽性細(xì)胞占比。⑴0 分：無陽性細(xì)胞。⑵1 分：陽性細(xì)胞數(shù)≤25%。⑶2 分：陽性細(xì)胞數(shù)＞25%且＜50%。⑷3 分：陽性細(xì)胞數(shù)≥50%。綜合以上兩項(xiàng)評(píng)分相乘，0-1 分為 （-），2-3 分為（+），4-6 分為（++），7-9 分為（+++）

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 應(yīng)用SPSS 20.0 軟件對(duì)多組間數(shù)據(jù)進(jìn)行各組間單因素方差分析。組間比較用χ2檢驗(yàn)。Spearman 等級(jí)相關(guān)分析 EGFR、SOX2 兩者的相關(guān)性。

2 結(jié)果

2.1 各組 EGFR、SOX-2 的表達(dá)情況 EGFR、SOX-2 在食管鱗癌標(biāo)本中有表達(dá)，且陽性表達(dá)率及陽性表達(dá)程度隨著分化程度的降低而升高（見表1）。

2.2 EGFR、sox-2 的表達(dá)與臨床病理特征的關(guān)系EGFR、SOX-2 在食管鱗癌標(biāo)本中的表達(dá)與TNM分期有統(tǒng)計(jì)學(xué)關(guān)系，與患者的年齡、大小及淋巴結(jié)是否有轉(zhuǎn)移無顯著關(guān)系（見表2、表3）。

表1 各組EGFR、SOX-2 的表達(dá)情況

表2 EGFR 表達(dá)與臨床病理特征的關(guān)系

2.3 EGFR、SOX-2 表達(dá)的相關(guān)性 EGFR 和 SOX-2 在食管鱗狀細(xì)胞癌標(biāo)本中的表達(dá)情況呈現(xiàn)出正相關(guān)性，兩者具有協(xié)同促進(jìn)作用（見表4）。

3 討論

腫瘤干細(xì)胞（Cancer stem cells,CSCs）被稱為腫瘤始動(dòng)細(xì)胞（initiating cells ，TICs)，在腫瘤微環(huán)境（TME）的特定區(qū)域下，具有高增殖率、自我更新和極端抗藥性。這種小而單一的細(xì)胞亞群被認(rèn)為控制著人類癌癥的起源、發(fā)展、耐藥性、復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移，在幾乎所有類型的人類癌癥中都有它的身影[4-6]。SOX-2 及 EGFR 作為維持 CSCs 穩(wěn)定性的相關(guān)基因也被認(rèn)為在腫瘤的發(fā)生發(fā)展過程中起著重要的作用。

表3 SOX-2 表達(dá)與臨床病理特征的關(guān)系

表4 EGFR、SOX-2 表達(dá)的相關(guān)性

SOX-2 是與Y 染色體相關(guān)的一種轉(zhuǎn)錄因子，以其在保持干細(xì)胞特性方面的功能而聞名。SOX-2 所介導(dǎo)的CSCs 特性被認(rèn)為在腫瘤的起源中起著原癌基因的作用[7,8]。在卵巢癌中能夠檢測到高表達(dá)的SOX-2，抑制其表達(dá)，能夠降低腫瘤的增殖性及惡性侵襲性[9]。表皮生長因子受體（EGFR）頻繁的過度表達(dá)和過度激活被認(rèn)為與腫瘤細(xì)胞的存活、生長、增殖和分化有關(guān)。在非小細(xì)胞肺癌中，EGFR 是有僅起著原癌基因的作用，同時(shí)更是其預(yù)后的一個(gè)危險(xiǎn)因素，但隨著近年來爭對(duì)EGFR 基因的靶向藥物治療的應(yīng)用使得肺癌的生存率大大提高[10,11]。

EGFR 和SOX-2 兩者在惡性膠質(zhì)瘤中普遍高表達(dá)，而通常在正常組織中普遍低表達(dá)，SOX-2 可以在體外結(jié)合EGFR 的啟動(dòng)子，變相激活EGFR的轉(zhuǎn)錄活性，通過和EGFR 的協(xié)同作用，進(jìn)一步表達(dá)SOX-2 的病毒轉(zhuǎn)染神經(jīng)干細(xì)胞，還能反向促進(jìn)EGFR 的表達(dá)，刺激胚胎神經(jīng)干細(xì)胞的增殖和體外成球率[12]。有研究發(fā)現(xiàn)，EGFR 能夠正向調(diào)節(jié) SOX-2 在前列腺癌中的表達(dá),同時(shí)，小分子EGFR 抑制劑能夠阻斷EGFR 的激活，同時(shí)也降低了SOX2 的表達(dá)[13]。EGFR 和SOX-2 在食管癌中的表達(dá)及作用也在不斷的研究發(fā)現(xiàn)中。

本次研究探討了EGFR 和SOX-2 在食管鱗狀細(xì)胞癌組織中的表達(dá)情況及其相關(guān)性。此次研究發(fā)現(xiàn)，EGFR、SOX-2 在食管鱗癌組織中具有較高的陽性表達(dá)率，分別為76.25%和62.5%。EGFR 和SOX-2 在不同分化程度鱗癌中的表達(dá)具有差異性，高分化鱗癌組53.85%/46.15%； 中分化組75.61%/65.85%；低分化組88.46%/80.77%，經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，鱗癌的分化程度越低，惡性程度越高，EGFR及SOX-2 的陽性表達(dá)率陽性表達(dá)程度越高。本次研究還證實(shí)了兩者的表達(dá)具有一定程度的正相關(guān)性。

綜上所述，EGFR、SOX-2 可能通過某種通路共同參于了食管鱗癌的發(fā)生發(fā)展，且能夠一定程度的影響患者的預(yù)后，但其作用的具體通路和作用機(jī)制還不明確，進(jìn)一步研究EGFR-SOX-2 協(xié)同作用機(jī)制有望開創(chuàng)食管鱗癌分子治療的新格局。