田曠怡?林志玲?許稷豪?于濤?陳其奎?黎潔瑤

【摘要】目的 探討糖尿病（DM）對(duì)小鼠化學(xué)誘導(dǎo)結(jié)直腸癌發(fā)生的影響。方法 采用氧化偶氮甲烷/葡聚糖硫酸鈉誘導(dǎo)db/db小鼠和野生型（WT）小鼠產(chǎn)生結(jié)直腸癌，通過(guò)Illumina高通量測(cè)序技術(shù)篩選DM組與非DM組小鼠結(jié)腸腫瘤癌旁組織之間的差異表達(dá)基因，并對(duì)差異表達(dá)基因進(jìn)行基因本體（GO）、京都基因與基因組百科全書(shū)（KEGG）功能注釋與富集分析。結(jié)果 與WT小鼠相比，DM小鼠結(jié)直腸的平均腫瘤體積增加（P < 0.05）。DM小鼠與WT小鼠共有1656個(gè)差異表達(dá)基因（q < 0.05），其中有70個(gè)mRNA在整個(gè)實(shí)驗(yàn)過(guò)程中均差異表達(dá)，主要組織相容性復(fù)合體（MHC） Ⅱ類基因包括H2-Ea-ps、H2-Q1、H2-DMb2、H2-Q4均在DM小鼠中表達(dá)上調(diào)（q < 0.05）。GO富集分析發(fā)現(xiàn)免疫反應(yīng)的調(diào)控和激活途徑、抗原加工與提呈途徑、抗原結(jié)合是顯著富集的類型（q < 0.05）。KEGG富集分析發(fā)現(xiàn)與免疫反應(yīng)相關(guān)的抗原加工與呈遞是顯著富集的類型（q < 0.05）。結(jié)論 DM狀態(tài)下，小鼠免疫反應(yīng)激活，MHC Ⅱ類基因表達(dá)存在顯著差異，可能參與促進(jìn)結(jié)直腸癌的發(fā)生發(fā)展。

【關(guān)鍵詞】糖尿病;結(jié)直腸癌;小鼠模型;高通量測(cè)序

Transcriptomic high-throughput sequencing of AOM/DSS-induced colorectal carcinogenesis in mouse models with diabetes mellitus Tian Kuangyi， Lin Zhiling， Xu Jihao， Yu Tao， Chen Qikui， Li Jieyao. Department of Gastroenterology， Sun Yat-sen Memorial Hospital， Sun Yat-sen University， Guangzhou 510120， China

Corresponding author， Li Jieyao， E-mail： lijieyaoxh@ qq. com

【Abstract】Objective To investigate the effect of diabetes mellitus （DM） on the chemically-induced colorectal carcinogenesis in mouse modsels.? Methods Both db/db （DM） and wild-type （WT） mice were treated with AOM/DSS to induce colorectal carcinogenesis. The differentially expressed genes between the DM-CRC group and the WT-CRC group were identified using Illumina Hiseq sequencing systems. The functional enrichment analysis was mapped in gene ontology （GO） and Kyoto encyclopedia of genes and genomes （KEGG） pathway databases. Results Compared with the WT mice， DM mice presented with significantly enhanced average tumor volume （P < 0.05）. A total of 1656 mRNAs were differentially expressed （all q < 0.05） between DM and WT mice， and 70 mRNAs were differentially expressed throughout the whole experiment. Major histocompatibility complex （MHC） classⅡ genes including H2-Ea-ps， H2-Q1， H2-DMb2 and H2-Q4 were all significantly up-regulated in DM mice （all q < 0.05）. GO enrichment analysis demonstrated that? regulation and activation of immune response， antigen processing and presentation， and antigen binding were significantly enriched （all q < 0.05）. The KEGG pathway enrichment analysis revealed that the DEGs were significantly associated with antigen processing and presentation （q < 0.05）. Conclusion Immune response can be activated in DM mice.? The MHC classⅡ genes are significantly differentially expressed， which probably promotes the incidence and progression of colorectal cancer? under DM state.

【Key words】Diabetes mellitus;Colorectal cancer;Mouse model;High-throughput sequencing

中國(guó)約有1.164億人口患有糖尿?。―M），居世界首位[1]。近年來(lái)，大量研究認(rèn)為DM與結(jié)直腸癌（CRC）之間有著密切的聯(lián)系，DM患者尤其是2型DM（T2DM）患者較非DM人群的CRC發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)大幅升高[2-3]。癌旁組織常被用作腫瘤研究中的正常對(duì)照，也有研究表明，毗鄰腫瘤的癌旁組織在轉(zhuǎn)錄組和表觀遺傳學(xué)等方面亦有畸變，可被用于研究腫瘤發(fā)生發(fā)展及機(jī)制變化[4-5]。本課題組前期實(shí)驗(yàn)對(duì)致癌劑氧化偶氮甲烷（AOM）合并促炎劑葡聚糖硫酸鈉（DSS）在小鼠模型上誘導(dǎo)CRC形成進(jìn)行探索，并發(fā)現(xiàn)2循環(huán)的DSS飲水可得到成本/效益較佳的實(shí)驗(yàn)結(jié)果;此外，我們發(fā)現(xiàn)與人類相似，T2DM小鼠的CRC成瘤效率高于非DM小鼠[6]。然而，DM與CRC之間的協(xié)同機(jī)制尚不完全清楚，深入探索DM并發(fā)CRC的機(jī)制有助于早期防治，改善患者預(yù)后，減輕社會(huì)負(fù)擔(dān)。本研究擬通過(guò)Illumina高通量測(cè)序技術(shù)檢測(cè)DM組及正常組小鼠的結(jié)腸癌旁組織中轉(zhuǎn)錄組的表達(dá)，篩選差異表達(dá)基因并進(jìn)行差異表達(dá)基因的基因本體（GO）、京都基因與基因組百科全書(shū)（KEGG）功能注釋與富集分析，以期為DM狀態(tài)下AOM/DSS誘導(dǎo)的小鼠CRC發(fā)生發(fā)展的機(jī)制或潛在藥物治療靶點(diǎn)提供科學(xué)研究基礎(chǔ)。

材料與方法

一、主要試劑和動(dòng)物

AOM（Sigma，美國(guó)），DSS（MP Biomedicals，美國(guó)）。C57BLKS/J-Leprem2Cd479/Nju（db/db）小鼠及其野生型對(duì)照C57BLKS/JNju（wild type，WT）小鼠，雄性，7周齡，各36只。小鼠均由南京集萃藥康生物科技公司（南京，中國(guó)）提供，常規(guī)飼養(yǎng)于中山大學(xué)東校園實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心，實(shí)驗(yàn)室環(huán)境溫度為（23±3）℃，相對(duì)濕度為（55±15）%，晝夜明暗交替。所有有關(guān)動(dòng)物的實(shí)驗(yàn)過(guò)程均在中山大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物倫理委員會(huì)的監(jiān)督指導(dǎo)下完成，符合實(shí)驗(yàn)動(dòng)物倫理學(xué)要求。

二、DM小鼠CRC模型的建立及處理

1.建模及分組

db/db小鼠隨機(jī)分為DM-CRC組及DM-Con組，WT小鼠隨機(jī)分為WT-CRC組及WT-Con組，每組各18只小鼠。所有小鼠經(jīng)適應(yīng)性飼養(yǎng)1周后開(kāi)始實(shí)驗(yàn)。CRC組均于第1周（W1）皮下注射10

mg/kg AOM，W2予2% DSS溶液自由飲用7 d，隨后予正常飲用水2周。每1周DSS與2周正常飲用水為1個(gè)循環(huán)周期，共循環(huán)2次。Con組均于W1皮下注射0.1 ml/10 g生理鹽水。各組分別于W7、W9、W11隨機(jī)處死6只小鼠。

2.標(biāo)本采集及腫瘤計(jì)數(shù)

小鼠經(jīng)頸椎脫臼法處死，沿腹中線打開(kāi)腹腔，剪取自回盲部至直腸的腸段，使用預(yù)冷的磷酸鹽緩沖液（PBS）清洗腸道，沿長(zhǎng)軸打開(kāi)腸腔，仔細(xì)觀察并觸摸腸腔表面有無(wú)腫瘤形成。若發(fā)現(xiàn)腫瘤形成，觀察記錄腫瘤的數(shù)量、大小、位置，測(cè)量并記錄每個(gè)腫瘤的最長(zhǎng)徑和垂直短徑。留取毗鄰腫瘤的癌旁組織保存于液氮中，以便后續(xù)實(shí)驗(yàn)使用。

按下述公式計(jì)算腫瘤體積、腫瘤發(fā)生率、平均成瘤數(shù)量和荷瘤小鼠平均成瘤數(shù)量：腫瘤體積 =（最長(zhǎng)徑×垂直短徑2） / 2;成瘤小鼠占比= 荷瘤小鼠數(shù)量/實(shí)驗(yàn)小鼠數(shù)量;平均成瘤數(shù)量 = 腫瘤數(shù)量/實(shí)驗(yàn)小鼠數(shù)量;荷瘤小鼠平均成瘤數(shù)量 = 腫瘤數(shù)量/荷瘤小鼠數(shù)量。

三、Illumina高通量測(cè)序

DM-CRC組及WT-CRC組分別于W7、W9、W11各隨機(jī)抽取3只小鼠。取小鼠結(jié)腸癌旁組織提取得到RNA，進(jìn)行RNA質(zhì)檢、完整性等分析合格后，進(jìn)行文庫(kù)構(gòu)建。去除rRNA、進(jìn)行mRNA純化后將RNA片段化;一鏈、二鏈cDNA合成;3末端腺苷酸化、連接測(cè)序接頭;PCR擴(kuò)增;Agilent 2100生物分析儀（Agilent Technogies，美國(guó)）定量cDNA文庫(kù);DNA成簇?cái)U(kuò)增;于HiSeq2500測(cè)序儀（Illumina， 美國(guó)）進(jìn)行高通量測(cè)序。

四、測(cè)序數(shù)據(jù)分析

測(cè)序得到的原始圖像文件經(jīng)堿基識(shí)別、誤差過(guò)濾、除接頭序列、低質(zhì)量片段等過(guò)濾方法，得到可用于數(shù)據(jù)分析的clean reads。應(yīng)用Hisat2（version：2.0.4）的spliced mapping算法對(duì)clean reads進(jìn)行轉(zhuǎn)錄組測(cè)序數(shù)據(jù)的基因組比對(duì)，估計(jì)基因表達(dá)的水平[7]。但由于reads數(shù)除與基因表達(dá)水平成正比外，還與基因本身的長(zhǎng)度、測(cè)序的數(shù)據(jù)量有關(guān)。為了使不同基因、不同樣本間的基因表達(dá)水平具有可比性，應(yīng)用Stringtie（version：1.3.0）對(duì)Hisat2比對(duì)后每個(gè)基因的片段數(shù)進(jìn)行計(jì)數(shù)，再使用M值的加權(quán)截尾均值（TMM）法進(jìn)行數(shù)據(jù)的歸一化，最后利用perl腳本計(jì)算出每個(gè)基因的每千個(gè)堿基的轉(zhuǎn)錄每百萬(wàn)映射讀取的片段（FPKM）值，進(jìn)行基因表達(dá)量的標(biāo)準(zhǔn)化[8-11]。

使用FPKM計(jì)算轉(zhuǎn)錄本表達(dá)量，并計(jì)算不同基因在不同組間的差異表達(dá)倍數(shù)。應(yīng)用edgeR進(jìn)行樣本間的差異基因分析，對(duì)P值進(jìn)行多重假設(shè)檢驗(yàn)校正，通過(guò)控制錯(cuò)誤發(fā)現(xiàn)率以決定P值的閾值，得到校正后的P值，亦即q值[12-14]。根據(jù)q < 0.05篩選出不同組之間的差異表達(dá)基因。得到差異表達(dá)基因后，采用R語(yǔ)言、cluster、Cytoscape、David等軟件進(jìn)行聚類分析，得到聚類分析熱圖、火山圖。

GO是基因本體聯(lián)合會(huì)建立的數(shù)據(jù)庫(kù)（http：//geneontology.org），使用了規(guī)范化的術(shù)語(yǔ)描述基因和基因產(chǎn)物的特性。對(duì)細(xì)胞組分、分子功能和生物過(guò)程3個(gè)層次上對(duì)應(yīng)的差異基因數(shù)目進(jìn)行統(tǒng)計(jì)，并把所挑選的差異表達(dá)基因向GO數(shù)據(jù)庫(kù)的各個(gè)條目映射，計(jì)算每個(gè)條目的基因數(shù)目。應(yīng)用超幾何分布進(jìn)行假設(shè)檢驗(yàn)，得到富集結(jié)果的P值，P值越低則富集結(jié)果越顯著，進(jìn)而篩選出富集程度高的基因，從而對(duì)差異表達(dá)基因進(jìn)行GO功能分析。同理，使用整合分子互動(dòng)網(wǎng)絡(luò)的KEGG Pathway數(shù)據(jù)庫(kù)（https：//www.genome.jp/kegg/pathway.html）對(duì)各個(gè)信號(hào)通路上的差異表達(dá)基因數(shù)目和富集情況進(jìn)行KEGG Pathway分析。

五、統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

采用SPSS 20.0分析。正態(tài)分布的定量資料用表示，非正態(tài)分布的定量資料用中位數(shù)（四分位數(shù)間距）表示;成瘤小鼠占比的比較使用Fisher確切概率法。2組非正態(tài)分布的定量資料的比較用Mann-Whitney U檢驗(yàn)，多組非正態(tài)分布的定量資料的比較用Kruskal-Wallis法。α=0.05，兩兩比較用Bonferroni法，即P < 0.05 /比較次數(shù)為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

結(jié)果

一、DM狀態(tài)對(duì)小鼠CRC形成的影響

WT-CRC組小鼠的成瘤小鼠占比均隨暴露時(shí)間的增加而增加（P < 0.05/3，表1）;WT-Con組小鼠均未形成腫瘤。在W7和W11之間，DM-CRC

組小鼠的平均成瘤數(shù)量和荷瘤小鼠平均成瘤數(shù)量比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P < 0.05/3，表1）;WT-CRC組差異則未見(jiàn)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P > 0.05/3，表1）。WT-CRC組與DM-CRC組小鼠的平均腫瘤體積在W7和W11、W9和W11比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P < 0.05/3，表1）。此外，在W11，DM小鼠的平均腫瘤體積遠(yuǎn)遠(yuǎn)大于WT小鼠（P < 0.05，表1）。

二、測(cè)序數(shù)據(jù)質(zhì)控

各組小鼠結(jié)腸癌旁組織的RNA電泳條帶明亮清晰，泳道無(wú)彌散區(qū)，未見(jiàn)蛋白和DNA污染（圖1A）;RNA完整值（RIN）接近10，28S/18S≥1.5（表2）;檢測(cè)峰圖基線較平整（圖1B）。提示樣本質(zhì)量和純度較好，質(zhì)檢結(jié)果合格，進(jìn)行Illumina高通量測(cè)序。

三、差異表達(dá)基因篩選與聚類

根據(jù)q≤0.05篩選差異表達(dá)基因，進(jìn)行聚類分析，并繪制熱圖及火山圖。可見(jiàn)組內(nèi)表達(dá)相似的基因聚類后出現(xiàn)在同一簇中，DM-CRC組與WT-CRC組共有1656個(gè)差異基因（圖2）。DM-CRC組與WT-CRC組相比，在W7有210個(gè)mRNA差異表達(dá)，其中112個(gè)上調(diào)，98個(gè)下調(diào)（圖3A）;在W9有604個(gè)mRNA差異表達(dá)，其中136個(gè)上調(diào)，468個(gè)下調(diào)（圖3B）;在W11有1237個(gè)mRNA差異表達(dá)，其中522個(gè)上調(diào)，715個(gè)下調(diào)（圖3C）。綜合上述所有差異表達(dá)基因，共有70個(gè)mRNA在整個(gè)實(shí)驗(yàn)過(guò)程中差異表達(dá)（圖3D），其中43個(gè)上調(diào)，包括MHCⅡ類基因：H2-Ea-ps（qW7 = 2.50×10-59，

qW9 = 3.31×10-38，qW11 = 3.53×10-59）、H2-Q1（qW7 = 5.68×10-11，qW9 = 2.91×10-14，q W11 = 2.00×10-6）、H2-DMb2（qW7 = 1.01×10-2，qW9= 3.12×10-2，qW11 = 1.65×10-6）、 H2-Q4（qW7 =6.17×10-5，qW9 = 4.78× 10-3，qW11 = 3.26×10-5）;另有24個(gè)下調(diào);3個(gè)有波動(dòng)，在部分時(shí)間點(diǎn)上調(diào)，部分時(shí)間點(diǎn)下調(diào)。

四、GO功能顯著性富集分析

對(duì)1656個(gè)差異表達(dá)基因的GO功能進(jìn)行注釋、分類并統(tǒng)計(jì)（圖4）。結(jié)果顯示，在生物過(guò)程分組，免疫反應(yīng)的調(diào)控和激活途徑、肽或多糖通過(guò)MHC Ⅱ類分子的抗原加工與提呈途徑、包括多肽抗原在內(nèi)的抗原加工與提呈途徑是顯著富集的類型（q < 0.05）;在分子功能分組，MHC Ⅰ類蛋白復(fù)合物和血漿膜蛋白復(fù)合物是顯著富集的類型（q < 0.05）;在細(xì)胞組分分組，包括多肽在內(nèi)的抗原結(jié)合、絲氨酸類型的肽酶、內(nèi)肽酶及水解酶活性、酰胺類物質(zhì)的結(jié)合是顯著富集的類型（q < 0.05）。

五、KEGG Pathway顯著富集分析

結(jié)合1656個(gè)差異表達(dá)基因的KEGG功能注釋結(jié)果進(jìn)行KEGG Pathway顯著性富集分析，并選取富集度最高的前30個(gè)條目進(jìn)行分類統(tǒng)計(jì)。結(jié)果顯示與免疫反應(yīng)相關(guān)的抗原加工與呈遞、移植排斥反應(yīng)、移植物抗宿主病、自身免疫性甲狀腺疾病等方向顯著富集（q < 0.05，圖5）。

討論

在T2DM患者中，約有10%的患者合并CRC，且初次診斷時(shí)大多處于中晚期，患者預(yù)后不夠理想[15-16]。因此，我們需要更多的研究來(lái)尋找DM狀態(tài)下CRC發(fā)生發(fā)展前期的分子機(jī)制變化。AOM可通過(guò)誘導(dǎo)基因突變損傷，進(jìn)而促進(jìn)嚙齒類動(dòng)物CRC的形成;在其基礎(chǔ)上加用DSS，可誘導(dǎo)腸上皮的慢性炎癥狀態(tài)，加快建模效率[17]。db/db小鼠先天具有高血糖和高脂血癥，是一種常用的T2DM小鼠模型[18]。參考本課題組的前期實(shí)驗(yàn)，我們本次使用AOM聯(lián)合2循環(huán)DSS，誘導(dǎo)DM小鼠及WT小鼠形成CRC[6]。通過(guò)對(duì)小鼠成瘤情況的評(píng)估，發(fā)現(xiàn)在W11，DM小鼠的平均腫瘤體積遠(yuǎn)遠(yuǎn)大于WT小鼠，提示DM狀態(tài)可促進(jìn)小鼠CRC的發(fā)生，與人類的DM與CRC之間的協(xié)同機(jī)制相一致，對(duì)該模型進(jìn)一步的研究或可為DM合并CRC的機(jī)制及潛在的藥物治療靶點(diǎn)提供參考依據(jù)。

癌旁組織在臨床實(shí)驗(yàn)中常被用作腫瘤的正常對(duì)照，然而近年來(lái)已有多項(xiàng)研究發(fā)現(xiàn)，盡管毗鄰腫瘤的癌旁組織在大體上未見(jiàn)異常，病理觀察下可能已發(fā)生組織異常增生，并在分子水平較無(wú)腫瘤的正常組織發(fā)生改變，可用于研究腫瘤發(fā)生發(fā)展早期的分子變化[4-5， 19-21]。轉(zhuǎn)錄組測(cè)序是指利用以Illumina高通量測(cè)序?yàn)榇淼亩鷾y(cè)序技術(shù)，對(duì)組織或者細(xì)胞中所有mRNA反轉(zhuǎn)錄生成的cDNA序列進(jìn)行測(cè)序，全面快速獲得細(xì)胞或組織在特定時(shí)期內(nèi)的幾乎所有轉(zhuǎn)錄本序列信息，進(jìn)而篩選差異表達(dá)基因，并對(duì)基因進(jìn)行預(yù)測(cè)，為在分子水平尋找可能的生物標(biāo)志物提供了極大的便利[22]。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)獲取成瘤小鼠毗鄰腫瘤的癌旁組織，利用Illumina高通量測(cè)序分析，探討DM對(duì)小鼠CRC發(fā)生的潛在病理機(jī)制。

我們通過(guò)實(shí)驗(yàn)得到差異表達(dá)mRNA共1656條，并發(fā)現(xiàn)70個(gè)mRNA在整個(gè)實(shí)驗(yàn)過(guò)程中均差異表達(dá)，其中MHC Ⅱ類基因包括H2-Ea-ps、H2-Q1、H2-DMb2、H2-Q4均在DM小鼠中表達(dá)顯著上調(diào)。在GO生物過(guò)程分組上，免疫反應(yīng)的調(diào)控和激活途徑、肽或多糖通過(guò)MHC Ⅱ類分子的抗原加工與提呈途徑、包括多肽抗原在內(nèi)的抗原加工與提呈途徑是顯著富集的類型;在分子功能分組上，MHC Ⅰ類蛋白復(fù)合物是顯著富集的類型;在細(xì)胞組分分組上，包括多肽在內(nèi)的抗原結(jié)合是顯著富集的類型。在KEGG Pathway顯著性富集分析中，與免疫反應(yīng)相關(guān)的抗原加工與呈遞顯著富集。

MHC Ⅱ類分子是免疫反應(yīng)的關(guān)鍵介質(zhì)之一，起著向CD4+ T淋巴細(xì)胞提呈經(jīng)過(guò)加工的外源性抗原和誘發(fā)免疫反應(yīng)的作用[23]。這些基因均具有高度的多態(tài)性，可影響功能性氨基酸的變化，并導(dǎo)致個(gè)體對(duì)抗原反應(yīng)的差異[24]。結(jié)直腸由于持續(xù)暴露于外源性抗原，如食物、化學(xué)物質(zhì)、細(xì)菌等，導(dǎo)致該處相對(duì)恒定的炎癥狀態(tài)，與其它器官相比，在MHC Ⅱ類基因表達(dá)方面具有顯著差異[25]。此外，有學(xué)者發(fā)現(xiàn)，MHC Ⅱ類等位基因的高表達(dá)可提示結(jié)腸炎患者患CRC的風(fēng)險(xiǎn)增高[26]。

在對(duì)DM易感的個(gè)體，其先天性免疫系統(tǒng)被激活，炎癥因子分泌增加，進(jìn)而引起胰島素抵抗、胰島素分泌功能障礙和代謝綜合征的發(fā)生[27]。而DM患者在持續(xù)高血糖的狀態(tài)下，可損傷線粒體功能，增加活性氧產(chǎn)生，激活炎癥介質(zhì)與機(jī)體的免疫反應(yīng)[28]。上述研究提示免疫炎癥反應(yīng)在DM和CRC的發(fā)病中均起著重要的作用。綜合本次實(shí)驗(yàn)結(jié)果，我們認(rèn)為，DM狀態(tài)下CRC的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)增高，可能與生物體以MHC Ⅱ類基因?yàn)橹鞯拿庖叻磻?yīng)激活有關(guān);H2-Ea-ps、H2-Q1、H2-DMb2、H2-Q4這4個(gè)基因有望成為DM患者CRC診治的靶點(diǎn)。

綜上所述，我們探討了AOM/DSS誘導(dǎo)小鼠產(chǎn)生CRC，發(fā)現(xiàn)DM可促進(jìn)CRC的形成，顯著增加小鼠的平均腫瘤體積;比較DM與WT狀態(tài)下癌旁組織的差異表達(dá)基因，并對(duì)結(jié)果進(jìn)行GO和KEGG分析，發(fā)現(xiàn)4個(gè)高表達(dá)的MHC Ⅱ類基因：H2-Ea-ps、H2-Q1、H2-DMb2、H2-Q4，為DM合并CRC的發(fā)病機(jī)制提供可靠的生物學(xué)標(biāo)志物，并對(duì)其早期診治提供可能的新靶點(diǎn)。

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（收稿日期：2019-10-18）

（本文編輯：楊江瑜）