黃巧婷，陳舒婷，黃益海，劉小芬

(福建中醫(yī)藥大學藥學院，福建 福州 350122)

鹿角草(Glossocardia bidens)為菊科(Compositae)鹿角草屬(Glossocardia)多年生草本植物[1—3]。產(chǎn)我國廣東、廣西、海南島、福建沿海和臺灣，生于堅硬砂土、空曠沙地和海邊，在福建沿海主要生長于丘陵砂質(zhì)陽坡、花崗巖石縫等。中國大陸地區(qū)現(xiàn)代本草多有鹿角草藥用記載[4—17]，其全草入藥，稱為香茹、金鎖匙等，具清熱利濕、解毒消腫、活血止血、鎮(zhèn)咳化痰等功效。臺灣產(chǎn)鹿角草含有黃酮類如木犀草素(luteolin)、木犀草素-7-葡萄糖苷(luteolin-7-glucoside)，倍半萜類如去氫木香內(nèi)脂、二氫去氫木香內(nèi)脂，三萜類如齊墩果酸，苯內(nèi)素類如鹿角草素(glossogin)等有效活性成分；鹿角草乙醇提取物具抗炎、抗氧化、抗病毒、抑制腫瘤細胞增殖、保肝、免疫調(diào)節(jié)、抑制破骨細胞形成等藥理作用，主要活性成分為木犀草素和木犀草素-7-葡萄糖苷[18—27]。作者在第四次全國中藥資源普查過程中，收集福建省不同地區(qū)的野生鹿角草樣品，初步測定分析總黃酮與木犀草素含量，同時與市售品進行比較，以期為閩產(chǎn)野生鹿角草合理開發(fā)利用提供基礎(chǔ)數(shù)據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 野生鹿角草樣品來源

在福建省中藥資源普查過程中，收集東山縣、惠安縣、平潭島、泉港區(qū)等地野生鹿角草資源，共得樣品13 批，采集信息見表1。

表1 閩產(chǎn)野生鹿角草采集地信息Table 1 Information of wild Glossocardia bidens collected in Fujian

1.1.2 市售鹿角草藥材來源

項目組在全國包括安徽、浙江等21 省市33 個購買點(中藥材市場、藥店、草藥攤等)，購得不同產(chǎn)地鹿角草藥材6 批，由福建中醫(yī)藥大學藥學院劉小芬副教授鑒定，其中4 批為菊科鹿角草(Glossocardia bidens)來源，另2 批來源不確定。來源信息詳見表2。

表2 市售鹿角草樣品信息Table 2 Sample information of Glossocardia herba from markets

1.1.3 儀器與試劑

島津LC-20AT 高效液相色譜分析儀(日本島津公司)，PLATISIL ODS 高效液相色譜柱(4.6 mm ×250 mm，5 μm)(迪馬科技有限公司)，UV-9600 紫外分光光度計(常州國華電器有限公司)，蘆丁對照品(HPLC≥98%，CAS#153-18-4，批號Y01M7S10307，上海源葉生物科技有限公司)，木犀草素對照品(HPLC≥98%，CAS#491-70-3，批號Y01D6S6815，上海源葉生物科技有限公司)，色譜甲醇(默克股份有限公司)，無水乙醇(AR，西隴科學股份有限公司)。

1.2 方法

1.2.1 鹿角草供試品樣液制備

樣品陰干，粉碎，過4 號篩，備用。取樣品粉末2.00 g，加50 mL石油醚(60～90 ℃)。超聲20 min，過濾，棄除石油醚，藥渣揮干。藥渣加乙醇30 mL，超聲提取，溫度60 ℃、超聲波功率600 W，提取30 min，提取3 次，合并濾液，定容至100 mL。

1.2.2 總黃酮含量測定

1.2.2.1 蘆丁標準曲線制備

精密稱量5.20 mg 干燥至恒重的蘆丁對照品，加乙醇定容至50.0 mL，得蘆丁對照品溶液，濃度為0.104 mg·mL-1。

吸取蘆丁對照品溶液0、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0 mL，各加乙醇至5.0 mL 后，加5% NaNO20.3 mL，搖勻，放置6 min；加10% Al(NO3)30.3 mL，搖勻，放置6 min；加1 mol·L-1NaOH 4 mL，加乙醇0.4 mL，搖勻，放置15 min。利用紫外分光光度法，于510 nm 處測吸光度(A)值，以空白為對照，得標準曲線回歸方程y=7.7198x+0.0036，R2=0.999，線性范圍0～0.052 mg·mL-1。

1.2.2.2 含量測定

取各供試品樣液1.0 mL，按蘆丁標準曲線方法測定，參照標準曲線，按公式1：X=BV1V2/M 計算總黃酮含量。式中，X 為含量(mg·g-1)，B 為測試液濃度(mg·mL-1)，V1為供試液定容體積100 mL，V2為測試液體積10 mL，M 為稱樣量2 g。

1.2.3 木犀草素含量測定

1.2.3.1 色譜條件

PLATISIL ODS 高效液相色譜柱(4.6 mm ×250 mm,5 μm)；流動相甲醇 :0.01%磷酸(40 :60)；流速1.0 mL·min-1，檢測波長365 nm，進樣量10.0 μL，柱溫30 ℃。木犀草素保留時間約為39 min(圖1)。

圖1 木犀草素HPLC 色譜Fig.1 HPLC chromatogram of luteolin

1.2.3.2 線性關(guān)系

取木犀草素對照品5.00 mg，色譜甲醇超聲溶解，定容至25.0 mL。分別吸取0.4、0.8、1.4、1.6、2.0、2.4 μL 木犀草素對照品溶液進樣，以含量為自變量(x)，峰面積為因變量(y)，得標準曲線回歸方程y=492990x–7223.1，R2=0.9999，線性范圍0.08～0.48 μg·mL-1。

1.2.3.3 方法學考察

(1)精密度試驗：取同一批藥材，按1.2.1 項方法制備樣品溶液，按1.2.3.1 項色譜條件連續(xù)進樣5 次，儀器精密度良好，RSD=1.7%。

(2)重復(fù)性試驗：取同一樣品液3 份，按上述色譜條件分別進樣，試驗重復(fù)性良好，RSD=1.3%。

(3)穩(wěn)定性試驗：取0.88 μg·mL-1對照品溶液，每隔1 h 進樣1 次，共進樣5 次，峰面積積分值的RSD=1.7%。

(4)加樣回收率試驗：取同批樣品5 份，分別加入對照品木犀草素，木犀草素平均回收率為97.94%。

1.2.3.4 含量測定

按照1.2.3.1 項下色譜條件測定樣品，并將所得峰面積代入標準曲線，根據(jù)公式2：X=BMV1/V2×10-3計算各樣品木犀草素含量(mg·g-1)。式中，X 為含量(mg·g-1)，B 為進樣木犀草素含量(μg·10μL-1)，V1為供試液定容體積25 mL，V2為進樣量10 μL，M 為稱樣量(g)。

2 結(jié)果與分析

2.1 總黃酮含量

17 批來源明確的樣品總黃酮含量平均為32.879 mg·g-1。其中自采樣品平均含量為33.900 mg·g-1，含量前三位的分別為采自惠安縣安固村(50.986 mg·g-1)、浮山村(42.242 mg·g-1)、后曾村(41.076 mg·g-1)樣品；含量最低的為采自惠安縣南山村樣品(18.096 mg·g-1)(圖3)。4 批來源確定的市售品總黃酮含量平均為29.567 mg·g-1，最高37.967 mg·g-1，最低20.493 mg·g-1。2 批非鹿角草來源藥材，其中購自安徽的樣品總黃酮含量為1.775 mg·g-1，含量甚微，為19 批樣品中最低者(圖2)。

2.2 木犀草素含量

17 批來源明確的樣品木犀草素平均含量3.695 mg·g-1。其中自采樣品平均含量為3.026 mg·g-1，含量前三位的分別為采自東山縣澳角村(9.720 mg·g-1)、惠安縣安固村(9.071 mg·g-1)、東山縣冬古村(5.198 mg·g-1)的樣品；含量最低為采自惠安縣南山村樣品(0.839 mg·g-1)；樣品最高含量為最低含量的11 倍(圖3)。4 批來源確定的市售品平均含量為5.868 mg·g-1，最高12.500 mg·g-1，最低0.473 mg·g-1(圖2)。2 批非鹿角草來源藥材，其中購自浙江的樣品木犀草素含量0.548 mg·g-1，安徽樣品則未檢測到木犀草素。

3 討論

3.1 鹿角草資源與藥材現(xiàn)狀

圖2 閩產(chǎn)鹿角草中總黃酮與木犀草素含量Fig.2 Total flavonoids and luteolin contents of Glossocardia bidens in Fujian

實驗中17 批來源明確的鹿角草樣品，13 份為自采福建野生樣品，4 份為東山縣市售野生藥材。在東山縣外的31 個購買批次中只購得2 批，且均非鹿角草來源；特別是購自安徽樣品，其總黃酮與木犀草素含量甚微或無，其來源與用法均似與鹿角草無關(guān)，有待進一步回購研究。從現(xiàn)有分布與藥材現(xiàn)狀來看，鹿角草目前主要為區(qū)域性草藥，特別為海峽兩岸閩南地區(qū)與臺灣地區(qū)的常用草藥，其在我國兩廣地區(qū)、閩臺地區(qū)的野生種質(zhì)資源分布、資源豐富度與民間藥用等方面有待進一步調(diào)查。

3.2 不同產(chǎn)地鹿角草總黃酮與木犀草素含量比較

鹿角草全草中最高含有總黃酮約5.10%，木犀草素含量最高1.25%，具有較高的藥用價值。本次實驗中共17 批來源明確的樣品，其中東山產(chǎn)樣品6批，總黃酮與木犀草素平均含量分別為2.75%、0.064%；惠安產(chǎn)樣品9 批，總黃酮與木犀草素平均含量分別為3.63%、0.022%；泉港與平潭產(chǎn)2 批樣品總黃酮含量居中，木犀草素含量較東山與惠安產(chǎn)的低。同時，單一樣品中總黃酮與木犀草素含量無明顯相關(guān)性。在17 批來源明確的樣品中，僅樣品3(惠安縣安固村)的總黃酮含量(5.10%)與木犀草素含量(0.091%)均較高，可在資源保護的基礎(chǔ)上，進一步合理開發(fā)利用。

3.3 鹿角草中木犀草素HPLC 色譜條件

本實驗測定鹿角草木犀草素含量的HPLC 色譜條件，確定洗脫劑為甲醇 :0.01%磷酸=40 :60，流速1.0 mL·min-1，檢測波長365 nm，柱溫30 ℃，洗脫時間60 min。此色譜條件下樣品中木犀草素分離度1 以上，理論塔板數(shù)為50000 以上。方法重現(xiàn)性高，操作性強，適合鹿角草木犀草素測定分析。

3.4 閩產(chǎn)鹿角草獨特藥用與研究建議

鹿角草在閩臺地區(qū)的傳統(tǒng)藥用記載基本一致，主要用于清熱解毒。但在閩南東山島，民間以鹿角草燉紅蟳治小兒食欲不振的用法頗為獨特。在當?shù)芈菇遣荽擞梅ㄒ延袛?shù)十年歷史，具有明確的食療功效，是當?shù)刂男菏朝焼畏?，但此民間用法的物質(zhì)基礎(chǔ)研究尚屬空白。因此，在跟蹤、求證這一民間臨床用藥的基礎(chǔ)上，明確其藥效基礎(chǔ)，具有進一步探討的意義。