彭張明 蒲桂川

摘要：為探究凡納濱對蝦（Litopenaeus vannamei）室內工廠化培育生態(tài)式無特定病原苗種的育苗方法，在室內育苗池開展不同工廠化育苗模式，對育苗過程水質、細菌和蝦苗進行跟蹤與檢驗，結果顯示：傳統(tǒng)方形池和U型池的三種育苗充氣模式（氣管+氣石+鉛粒的吊管模式、納米管模式和PVC底管模式）的水質和細菌均未出現(xiàn)超標，PL5階段蝦苗抗應激成活率達95%以上，PL10階段蝦苗抗應激成活率達85%以上;U型池平均育苗成活率77.03%，相比方形池的63.96%差異顯著（P<0.05）;U型池蝦苗體長日增長率0.06 cm/d，較方形池的0.05 cm/d差異不顯著（P>0.05）;方形池納米管模式PL10階段蝦苗體長變異系數(shù)達到15.8，相比其余組差異顯著（P<0.05）。結果表明：不同工廠化育苗模式均可培育出生態(tài)化無特定病原苗種，方形池的納米管模式對PL10階段的蝦苗體長變異系數(shù)有顯著影響，可能不適用于高密度大規(guī)格蝦苗的養(yǎng)殖;U型池在育苗成活率、蝦苗生長速度及蝦苗均勻度上優(yōu)于傳統(tǒng)方形池。

關鍵詞：凡納濱對蝦（Litopenaeus vannamei）;室內;工廠化育苗模式;生態(tài)式SPF苗種

開展凡納濱對蝦（Litopenaeus vannamei）室內不同工廠化育苗模式的探究，以期為培育生態(tài)式SPF蝦苗提供實踐數(shù)據(jù)和技術參考。

1材料與方法

1.1試驗材料

1.1.1SPF無節(jié)幼體運用熒光定量PCR（qPCR）對生產(chǎn)無節(jié)幼體的進口親蝦進行蝦肝腸胞蟲（EHP）、蝦白斑綜合征病毒（WSSV）、蝦桃拉病毒（TSV）、傳染性皮下和造血壞死病毒（IHHNV）、傳染性肌壞死病毒（IMNV）、壞死性肝胰腺炎細菌（NHPB）、急性肝胰腺壞死病細菌（AHPND）、哈維氏弧菌（Vh）和蝦血細胞虹彩病毒（SHIV）等蝦類無特定病原的檢測，確保無節(jié)幼體是SPF的。

1.1.2試驗條件與設施育苗試驗在湛江海壹水產(chǎn)種苗有限公司徐聞縣龍?zhí)辆C合基地的室內育苗車間進行。養(yǎng)殖水源為經(jīng)消毒沉淀、沙濾、陶氏超濾及蛋白分離器等處理后的海水，其氨氮和亞硝酸鹽含量低于0.01 mg/L。

方形育苗池長寬高為3.3 m×3.3 m×1.3 m，共計9個，U型育苗池的體積為10 m3，共計9個，總計18個育苗池。

餌料及添加劑：主要包括微藻類（公司生物餌料培育中心培育的角毛藻、海鏈藻）、鹵蟲（公司生物餌料培育中心孵化的鹵蟲無節(jié)幼體）、江口罐裝早期蝦片、英偉微囊料、八卦桶裝蝦片、維他命C（博尚VC）、綠百多豐蝦素（光合菌）和EM菌培養(yǎng)基（廣州精博）等。

1.2試驗方法

1.2.1育苗試驗準備工作2019年5月28日對車間育苗池清洗消毒，用10 L淡水+有效濃度10%的碘液50 mL+洗潔精2～5 mL制成的混合溶液徹底刷洗內外壁兩遍，淡水沖干凈后通風晾曬2～3 d;對育苗工具、氣管、鉛粒、氣石、納米管、PVC底管進行徹底清洗消毒晾曬后，安裝在育苗池中;投幼體前一天準備好鹽度為32‰，經(jīng)公司水處理流程過濾后的海水入室內蓄水池中，調整海水總堿度140～160，pH值8.0～8.4，投入10 g/m3 EDTA-2Na，充分打均勻后，停氣沉淀24 h，海水溫度30 ℃。

1.2.2轉水及幼體投放2019年6月3日從蓄水池中過棉花棒轉水到18個育苗池中，水位70 cm（水體7 m3），檢測余氯為0，投放幼體前30 min投入1～1.5 g/m3的維他命C到各育苗池中。無節(jié)幼體是來自同一批次親蝦所生產(chǎn)，總量3 600萬尾，投放密度為200萬尾/池（20萬尾/m2），同時，取放幼體前的水樣涂弧菌板檢測得到黃弧菌、綠弧菌數(shù)量為0。

1.2.3試驗設計9個方形育苗池分成三組，育苗充氣模式分別是：氣石+鉛粒的吊管模式、納米管模式和PVC底管模式，每組3個平行;9個U形育苗池分成三組，育苗充氣模式分別是：氣石+鉛粒的吊管模式、納米管模式和PVC底管模式，每組3個平行;各組日常管理和操作保持一致。

1.2.4SPF餌料制備與投喂生物餌料的制備，包括微藻類和豐年蟲的培養(yǎng)，要通過檢測確保投喂的餌料是無特定病原攜帶（SPF），人工餌料的投喂，包括蝦片、微生態(tài)制劑及其他輔料等，每個產(chǎn)品也必須通過無特定病原（SPF）的檢測。

1.2.5日常育苗關鍵點把控a.育苗溫度范圍，全程30～32 ℃;b.育苗車間的光照和通風，避免陽光直射，苗池正上方2～3 m處用遮陽布擋光，打開車間門窗，自然通風;c.苗池人為藻相構建：無節(jié)幼體發(fā)育到N5～N6時，開始向苗池投喂角毛藻、海鏈藻，維持水體中藻類密度5萬～8萬cell/mL，一直持續(xù)到蝦苗完全變糠蝦Ⅰ期（M1），保持苗池的藻類不老化;d.苗池自然菌相形成：每日向苗池水體中投喂一定量的光合細菌，以供蝦苗攝食菌體及凈化水質，每日投喂一定量的EM菌培養(yǎng)基，為苗池的細菌增殖提供必要的營養(yǎng)物質，以配合藻類和人工餌料中的有益細菌繁殖，形成天然的菌相，達到苗池的總菌平衡;e.餌料投喂：蝦苗蚤Ⅰ階段（Z1）投喂早期微囊料和前期罐裝蝦片，投喂量為1 g/m3，4次/d，蝦苗蚤Ⅱ（Z2）至蚤Ⅲ階段（Z3），投喂量增加到1.2～1.5 g/m3，6次/d，使用凍死或燙死的豐年蟲無節(jié)幼體投喂100～150 g/百萬尾，4次/d，并且要依據(jù)蝦苗攝食、拖便情況進行調整;蝦苗糠Ⅰ（M1）至糠Ⅲ階段（M3）投喂中期微囊料和中期桶裝蝦片，投喂量15～25 g/百萬尾，6次/d，使用凍死或燙死的豐年蟲無節(jié)幼體投喂200～300 g/百萬尾，4次/d，并且要依據(jù)蝦苗攝食、糞便情況進行調整;蝦苗到仔蝦階段投喂中后期桶裝蝦片，投喂量40～60 g/百萬尾，6次/d，使用活的豐年蟲無節(jié)幼體投喂250～300 g/百萬尾，4次/d，并且要依據(jù)蝦苗攝食、糞便情況進行調整;f. 加換水：蚤Ⅲ（Z3）至糠Ⅲ階段（M3）每日按海水與淡水1∶1比例加水6～10 cm，仔蝦后每日換水15%～30%，每日加水前向苗池投入1.2～1.5 g/m3的維他命C，加水后向苗池投入10 g/m3的小蘇打;g. 溶氧量：保持水體溶氧量6 mg/L以上，N2～N6階段充氣呈微波狀態(tài)，Z1～Z3階段微沸騰狀態(tài)，M1～M3階段沸騰狀態(tài)，仔蝦后強沸騰狀態(tài)。

1.2.6育苗過程水質與細菌跟蹤在蝦苗的M3階段和PL3階段取苗池海水進行水質和細菌測定，水質包括pH值、氨氮和亞硝氮含量，pH值用玻璃電極法檢測，銨態(tài)氮和亞硝酸鹽含量采用分光光度計法測定。

細菌測定包括水體弧菌和蝦體弧菌含量，取水樣稀釋進行tcbs平板涂布，取PL3和PL7階段的蝦苗10～20尾用75%酒精消毒蝦體表面，接著噴蒸餾水清洗酒精，與1 mL蒸餾水充分混合研磨，取100 μL樣本加至tcbs平板均勻涂布，在31 ℃恒溫箱中培養(yǎng)16～18 h后，觀察平板中菌落生長情況。

1.2.7蝦苗抗應激能力檢測取100尾PL5階段的蝦苗置于15‰的海水中1 h，清點蝦苗的死亡數(shù)量，計算PL5蝦苗抗應激成活率=（100-死亡數(shù)量）/100×100%;取100尾PL10階段的蝦苗置于淡水中30 min，然后撈取所有蝦苗到30‰海水中30 min，清點蝦苗的死亡數(shù)量，計算PL10蝦苗抗應激成活率=（100-死亡數(shù)量）/100×100%。

1.2.8無特定病原攜帶（SPF）檢測取各育苗池PL3和PL8階段的蝦苗按照1.1.1中的方法進行檢測。

1.2.9蝦苗數(shù)據(jù)測量

育苗成活率測定方法：在試驗結束時，分別將每組苗池的蝦苗收集，稱取質量（W1，精確至0001 g），再從其中隨機取100 尾蝦苗，稱取其質量（W2），計算每個育苗池內蝦苗存活總數(shù)。蝦苗全長測定：測量自對蝦的額劍尖端至對蝦尾節(jié)的末端的長度，要將對蝦盡量伸直，然后測量，在PL5、PL10階段分別隨機取各組50尾蝦苗進行全長測量。

相關計算公式如下：

育苗成活率SR（%）=[（W1/W2）/100]/N×100%? （1）

生長速率LGR（cm/d）=（L1-L0）/（t1-t0）???????? （2）

蝦苗體型差異（測量出全部蝦苗體長數(shù)據(jù)的變異系數(shù)，CV）=標準差/平均值×100%? （3）

式（1）～（3）中，L0和L1為前一次取樣的蝦苗全長和后一次取樣時的全長，t0和t1分別為前一次采樣時間和后一次采樣時的時間，N為每個池的幼體投放數(shù)量。

1.2.10數(shù)據(jù)分析采用SPSS 19.0分析軟件對實驗數(shù)據(jù)進行單因素方差分析（ANOVA），并使用Duncan法進行多重比較，檢驗處理間的差異顯著性水平設為0.05;實驗數(shù)據(jù)采用平均值±標準差表示。

2結果與分析

2.1室內不同工廠化育苗模式的水質和細菌情況

2.1.1傳統(tǒng)方形池與U型池三種充氣模式育苗過程的水質情況從表1可知，傳統(tǒng)方形池與U型池的三種充氣育苗模式在育苗過程的水質情況都趨于穩(wěn)定，沒有顯著差異（P>0.05），PL3階段pH的穩(wěn)定得益于每天的換水量，大大降低了水中的有機質，以及NaHCO3的投入，其是酸堿緩沖劑，能有效提高水中的總堿度，維持pH值的穩(wěn)定;育苗M3和PL3階段氨氮、亞硝氮含量總體趨于平穩(wěn)，沒有異常波動和超標（育苗用水標準：氨氮<0.4 mg/L，亞硝氮<0.1 mg/L），主要的原因可能是水處理后的水質潔凈度、換水量的保證、餌料投喂量的精準把控以及苗池菌相的穩(wěn)定等方面，與充氣模式關聯(lián)不大。綜上可得，三種育苗充氣模式在方形池和U型池中對水質的影響沒有顯著差異，可用于凡納濱對蝦工廠化生態(tài)式苗種的培育。

2.1.2傳統(tǒng)方形池與U型池三種充氣模式育苗過程的細菌情況從表2可知，傳統(tǒng)方形池與U型池的三種充氣育苗模式在各階段對水體、蝦體細菌的含量沒有顯著影響（P>0.05），各苗池都沒有出現(xiàn)弧菌超標的現(xiàn)象（育苗養(yǎng)殖水弧菌參考：黃弧菌≤10 000，綠弧菌≤1000，熒光菌=0，單位是cfu/mL;蝦苗弧菌參考：黃弧菌≤200，綠弧菌≤10，熒光菌=0，單位是cfu/尾），首先是得益于苗池人為藻相的構建，每日投喂的藻類細胞不老化，并維持密度5萬～8萬cell/mL持續(xù)到蝦苗完全變糠蝦Ⅰ期（M1），有效抑制了水體中有害弧菌的生長，其次是定向投入了EM菌培養(yǎng)基，促使苗池的菌相得以自然天成，有效維持了益生菌相的生態(tài)平衡，減少了有害弧菌的繁殖，最后是育苗用水的安全和潔凈，通過加換水，大大降低了有害弧菌的帶入風險。因此，三種充氣模式對育苗過程的細菌基本沒有影響。

2.2室內不同工廠化育苗模式的蝦苗表現(xiàn)情況

2.2.1傳統(tǒng)方形池與U型池三種充氣模式的蝦苗抗應激能力比較由表3可知，傳統(tǒng)方形池與U型池的三種充氣育苗模式對PL5和PL10階段蝦苗的抗應激能力沒有顯著影響（P>0.05），各育苗池的蝦苗都通過了應激檢驗標準（PL5階段蝦苗存活率>90%，PL10階段蝦苗存活率>85%），適合養(yǎng)殖。

2.2.2傳統(tǒng)方形池與U型池三種充氣模式的蝦苗性狀指標比較由表4可知，三種充氣模式在傳統(tǒng)方形池和U型池中對蝦苗的育苗成活率（SR）、生長速率（LGR）及PL5階段蝦苗體長變異系數(shù)（CV）的影響不顯著（P>0.05），但方形池的納米管充氣模式在PL10階段蝦苗CV較其余組出現(xiàn)顯著差異（P<0.05），推斷是在方形池納米管對水體的氣動模式不適宜高密度養(yǎng)殖大規(guī)格蝦苗。U型池的三種充氣模式蝦苗SR（平均7703%）相比傳統(tǒng)方形池（平均63.96%）具顯著差異（P<0.05），而且U型池蝦苗LGR略高，但差異不顯著（P>0.05），可能與U型池的形狀、特殊的構造有關系。

3討論

3.1室內不同工廠化育苗模式的水質和細菌情況

國內外學者對凡納濱對蝦的室內、室外水泥池育苗試驗，工廠化育苗，生態(tài)育苗及仿生態(tài)育苗等方面進行了大量的研究，并取得了許多寶貴的成果[4-7]。培育優(yōu)質高產(chǎn)生態(tài)式SPF對蝦苗種，除了優(yōu)質的親本種質、餌料營養(yǎng)等因素，還與育苗環(huán)境因素密不可分，包括水體微生物群落的生態(tài)調控作用、養(yǎng)殖水體的理化指標穩(wěn)定、育苗模式的優(yōu)選等等，除此之外，對蝦苗的SPF檢測已經(jīng)成為行業(yè)評判苗種質量好壞最基本的標準。本次試驗通過室內不同工廠化育苗充氣模式的探究，運用生態(tài)式育苗理念，在育苗池中構建了人為藻相，利用定向投入EM菌培養(yǎng)基，促使菌相自然天成，試驗得到不同的充氣模式對育苗的水質和細菌沒有影響，未出現(xiàn)超標的現(xiàn)象，通過對蝦苗抽樣進行SPF檢測，結果顯示所有苗池都是陰性。關于凡納濱對蝦室內工廠化育苗過程的水質變化、細菌生物量、菌群結構等已大量報道[8-11]，但不同充氣模式的育苗水質、細菌的跟蹤與探究尚未見報道。

3.2室內不同工廠化育苗模式的蝦苗表現(xiàn)情況

凡納濱對蝦工廠化育苗的供氣一般采用羅茨鼓風機，常用的充氣方式有吊管、納米管和PVC底管，一般情況下，不同技術員采用不同的充氣方式育苗，主要與其長久從事育苗的習慣性操作手法相關，總的而言，對蝦育苗沒有固定的充氣方式。本次試驗首次探究了凡納濱對蝦室內工廠化育苗的三種充氣模式對蝦苗性狀的影響，同時也對比了傳統(tǒng)方形池與U型池的育苗效果，結果得到：傳統(tǒng)方形池和U型池的三種育苗充氣模式對蝦苗抗應激能力沒有影響;方形池的三種充氣模式中僅納米管模式會對PL10階段的蝦苗體長變異系數(shù)產(chǎn)生顯著影響，而U型池的三種充氣模式?jīng)]有影響;U型池蝦苗成活率顯著高于傳統(tǒng)方形池，且蝦苗生長速度也優(yōu)于傳統(tǒng)方形池。分析上述結果的原因可能有：一是蝦苗的抗應激能力與其自身生長發(fā)育速度及蝦體抗應激機制的完善程度有關聯(lián)，而充氣模式的改變并未影響蝦苗的變態(tài)發(fā)育;二是方形池中的納米管模式會從池底翻滾水體，但水體滾動的力量有一定的局限性，方形池邊緣處可能會存在滾動的死角，而健壯的蝦苗一般逆水而流，匯聚在納米管的氣頭處，攝食充足，久而久之就導致了蝦苗的大小分化，蝦苗的體長變異系數(shù)變大，而在U型池中因其特殊的形狀則不會存在類似現(xiàn)象;三是U型池較傳統(tǒng)方形池而言，U型池的形狀、構造具有其特殊的先天優(yōu)勢，例如充氣無死角，水體滾動徹底、力度強，餌料不易下沉、存留在水中的時間長，蝦苗隨水流運動更頻繁，與自然海域水流生活環(huán)境更類似等等，這些先天優(yōu)勢可以造就蝦苗更高的存活率，育苗過程損耗更低，蝦苗的生長速度更快。

4結論

不同工廠化育苗模式均可培育出生態(tài)化無特定病原苗種，三種充氣模式對水質、細菌沒有影響。

方形池的納米管模式對PL10階段的蝦苗體長變異系數(shù)有顯著影響，在工廠化高密度大規(guī)格蝦苗的養(yǎng)殖中易出現(xiàn)大小分化。

U型池在育苗成活率、蝦苗生長速度及蝦苗均勻度上優(yōu)于傳統(tǒng)方形池。

參考文獻：

[1] 張偉權.世界重要養(yǎng)殖品種——南美白對蝦生物學簡介[J].海洋科學，1990，14（3）：69～73.

[2] 李大海.經(jīng)濟學視角下的中國海水養(yǎng)殖發(fā)展研究——實證研究與模型分析[D].中國海洋大學， 2007：43-46.

[3] 彭張明，黃明，樵江華，等.養(yǎng)殖密度和鹽度對南美白對蝦標粗過程生長性狀的影響[J].水產(chǎn)科技情報，2019，46（03）：154-159.

[4] 梁華芳.南美白對蝦室外育苗的初步試驗[J].水產(chǎn)科學，2003，22（2）：27-29.

[5] 駱大鵬，何玉貴，楊明秋，等.凡納濱對蝦室內生態(tài)育苗技術[J].現(xiàn)代農業(yè)科技，2015（10）：256-257.

[6] 王玉佩，肖培弘，孔玉敏，等.臭氧在南美白對蝦工廠化育苗生產(chǎn)中的應用[J].漁業(yè)現(xiàn)代化， 2006（1）：23-24.

[7] 林更銘，楊清良，許章程.對蝦無公害生態(tài)育苗[J].海洋科學，2007，31（10）：11-14.

[8] 黃明哲.南美白對蝦育苗中若干水質變化的影響[J].漁業(yè)致富指南，2015（10）：46-50.

[9] Yan M， Jian L， Bin W， et al. Study on the quantity dynamic changes of heterobacteria and vibrios in larvae industrialized culture system[J]. Agricultural Science and Technology， 2008， 36（18）：7703-7126.

[10] 薛明，何瑤瑤，邱孟德，等.高通量測序分析凡納濱對蝦育苗期水體菌群結構特征[J].水產(chǎn)學報，2017，41（05）：785-794.

[11] 蘇國成，周常義.凡納濱對蝦育苗水環(huán)境的細菌學初探[J].集美大學學報（自然科學版），2007（04）：289-293.

（收稿日期：2020-01-03）

基金項目：企業(yè)自選科技項目HNHY-2019-03。

作者簡介：彭張明（1989-），男，碩士，從事南美白對蝦育苗與養(yǎng)殖。E-mail：pzm731675208@126.com。

通信作者：蒲桂川（1992-），女，助理工程師，從事南美白對蝦育苗與檢測。E-mail：190617599@qq.com。DOI：10.3969/j.issn.1004-6755.2020.02.008