■李小瑩 陳淼芬 丁婷玉 張民達(dá) 曾建國(guó)， 謝紅旗*

（1.湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)園藝學(xué)院，湖南長(zhǎng)沙410128；2.湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)中獸藥湖南省重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，湖南長(zhǎng)沙410128；3.湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)分析測(cè)試中心，湖南長(zhǎng)沙410128）

博落回屬（Macleaya R. Br.）為罌粟科下屬，屬內(nèi)含博落回[Macleaya cordata (Willd.) R. Br.]與小果博落回[Macleaya microcarpa (Maxim.) Fedde]兩種藥用植物。博落回屬植物均系為多年生高大草本，主要分布在中國(guó)、東南亞、南美以及歐洲等地區(qū)。作為傳統(tǒng)藥用植物，博落回屬植物已有1 000多年的藥用歷史[1-2]，現(xiàn)代研究表明博落回屬植物具多種藥理活性，如抗菌[3]、抗炎[4]、殺蟲[5]、抗癌[6-7]、促生長(zhǎng)[3]等作用。2005年博落回被歐洲食品管理局（EFSA）批準(zhǔn)用于生產(chǎn)動(dòng)物飼料添加劑Sangrovit?，其葉子、果實(shí)和種子的粉末混合提取物是飼料添加劑Sangrovit?的主要部分，血根堿和白屈菜紅堿被認(rèn)為是Sangrovit?的主要活性成分[9]。2009年，曾建國(guó)研究團(tuán)隊(duì)利用博落回開發(fā)出國(guó)內(nèi)第一個(gè)二類中獸藥-美佑壯，成為后抗生素時(shí)代的領(lǐng)跑者；郁建生等開發(fā)的博落回注射液也廣泛應(yīng)用于各種家禽的抗菌、消炎、抗病毒；同時(shí)博落回還被開發(fā)成博落回生物殺蟲劑、博落回腫癢酊以及能源調(diào)節(jié)劑SensoPower?等[10-12]。

博落回屬植物中主要含生物堿、揮發(fā)油、苯丙素類、三萜類、甾體等多種成分。姚默[13]對(duì)小果博落回?fù)]發(fā)性成分進(jìn)行研究，分離出59 個(gè)化合物，鑒定了38個(gè)揮發(fā)性成分。劉秀斌等[14]采用超臨界CO2萃取博落回種子油發(fā)現(xiàn)含有花生酸、亞麻酸、亞油酸、順-13-十八烯和順-11-二十碳烯酸等。

在飼料添加劑行業(yè)中，中草藥飼料添加劑占據(jù)優(yōu)勢(shì)地位?；趯?duì)“替抗”中草藥型飼料添加劑的關(guān)注，本研究運(yùn)用HS-SPME-GC-MS 法對(duì)博落回屬植物不同部位的揮發(fā)性成分進(jìn)行提取與比較，為各藥用部位的充分利用提供理論依據(jù)，并為博落回屬植物作為飼料添加劑的進(jìn)一步開發(fā)利用提供新思路。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

材料采于國(guó)家中藥材生產(chǎn)（湖南）技術(shù)中心核心基地，經(jīng)曾建國(guó)教授鑒定為博落回與小果博落回。

1.2 儀器與設(shè)備

GC-MS-QP2010 氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀（日本島津儀器公司）；GL-3250磁力攪拌器（海門市其林貝爾儀器制造有限公司）；聚二甲基硅烷萃取頭-65 μm（美國(guó)Supelco 公司）;Retsch MM400型球磨機(jī)（廣州艾威儀器科技有限公司）；METTLER AE240型電子天平（瑞士梅特勒-托利多公司）。

1.3 方法

1.3.1 樣品處理

將采收的博落回與小果博落回置于40 ℃恒溫烘箱，烘干后將根、莖、葉、果分別用球磨機(jī)粉碎過2 號(hào)篩，備用。

1.3.2 頂空固相微萃取條件

博落回根精密稱取20 mg，置于15 ml頂空瓶中，并將其置于磁力攪拌器平面上插入裝有萃取頭的手動(dòng)進(jìn)樣器，70 ℃下預(yù)熱40 min，再將萃取頭伸出頂空萃取40 min，，取出后立即插入色譜儀240 ℃進(jìn)樣口，解吸5 min。其余樣品同上。

1.3.3 色譜條件

色譜柱：CD-WAX（30 m×25 mm，0.25 μm）；載氣：氦氣；流速：0.98 ml/min；柱溫：60 ℃；進(jìn)樣口溫度：240 ℃；溫度程序：起始溫度60 ℃保持2 min，3 ℃/min的速度升至100 ℃并保持5 min，3 ℃/min的速度升至190 ℃并保持5 min，10 ℃/min的速度升至220 ℃并保持2 min。

1.3.4 質(zhì)譜條件

離子源：EI 源；離子源溫度：200 ℃；接口溫度：220 ℃；掃描模式：全掃描；掃描時(shí)間：2～59 min；掃描范圍（M/Z）：45～500。

2 結(jié)果與分析

采用上述條件對(duì)樣品進(jìn)行處理與檢測(cè)，譜圖見圖1。通過NIST 數(shù)據(jù)庫(kù)及面積歸一化對(duì)各個(gè)質(zhì)譜峰進(jìn)行分析，確定其成分并進(jìn)行比較，共分離并鑒定了博落回屬植物中123 種揮發(fā)性成分。從博落回的根中分離出61個(gè)成分，并對(duì)55個(gè)成分進(jìn)行了鑒定，占總揮發(fā)性成分的90.16%；從小果博落回的根中分離出48個(gè)成分，并對(duì)40 個(gè)成分進(jìn)行了鑒定，占總量的83.33%；從博落回的莖中分離出54個(gè)成分，并對(duì)47個(gè)成分進(jìn)行了鑒定，占總量的87.04%；從小果博落回的莖中分離出46個(gè)成分，并對(duì)42個(gè)成分進(jìn)行了鑒定，占總量的91.30%；從博落回的葉中分離出56個(gè)成分，并對(duì)52個(gè)成分進(jìn)行了鑒定，占總量的92.86%；從小果博落回的葉中分離出55 個(gè)成分，并對(duì)49 個(gè)成分進(jìn)行了鑒定，占總量的89.09%；從博落回的果中分離出82個(gè)成分，并對(duì)76 個(gè)成分進(jìn)行了鑒定，占總量的92.68%；從小果博落回的果中分離出56 個(gè)成分，并對(duì)51 個(gè)成分進(jìn)行了鑒定，占總量的91.07%

博落回與小果博落回各生長(zhǎng)部位中均含有芳姜黃酮、芳樟醇、金合歡烯、(S)-β-雙代謝烯、(-)-β-curcumene、4，5，9，10-脫水異松葉烯、6-methyl-2-(4-methylphenyl)heptan-4-one、百里酚、香芹酚等9 個(gè)成分，且芳姜黃酮與(S)-β-雙代謝烯的相對(duì)百分含量均高于1.0%。博落回根、葉、果與小果博落回根、葉、果中含量最高的揮發(fā)性成分均為β-倍半水芹烯，其它主要成分有姜烯、反式石竹烯、(S)-β-雙代謝烯；博落回莖中含量最高的揮發(fā)性成分為芳姜黃酮，其次為α-姜黃烯、(1R,4S,5S)-1,8-dimethyl-4-prop-1-en-2-ylspiro[4.5]dec-8-ene；小果博落回莖中含量最高的揮發(fā)性成分為(1R,4S,5S)-1,8-dimethyl-4-prop-1-en-2-yl-spiro[4.5]dec-8-ene，其次為α-姜黃烯、10-鄰苯二酚、紫穗槐二烯，博落回與小果博落回各生長(zhǎng)部位中含量最高的揮發(fā)性成分相對(duì)百分含量均高于20.0%。其余成分均有差異。具體結(jié)果見表1（僅列出含量大于1%的揮發(fā)性成分）。

圖1 博落回屬植物各個(gè)部位的TIC圖譜

3 討論

在以前的研究中，多采用水蒸氣蒸餾法與超臨界CO2萃取法對(duì)揮發(fā)性成分進(jìn)行提取，水蒸氣蒸餾法用時(shí)較長(zhǎng)、操作繁瑣，且高溫可能會(huì)使一些熱不穩(wěn)定成分分解而導(dǎo)致?lián)]發(fā)性成分部分損失。而頂空固相微萃取法用時(shí)較短、用量較少、操作簡(jiǎn)單、無需使用提取溶劑，且極大程度地對(duì)揮發(fā)性成分進(jìn)行了保留，故頂空固相微萃取法可作為一種新型通用的方法對(duì)揮發(fā)油進(jìn)行提取。

使用頂空固相微萃取法時(shí)，萃取頭的填料因影響揮發(fā)性成分提取及分離效果則顯得尤為重要。本研究首先對(duì)萃取頭進(jìn)行了篩選，分別采用粉色、灰色與白色萃取頭對(duì)博落回莖中的揮發(fā)性成分進(jìn)行萃取和檢測(cè)，結(jié)果表明粉色萃取頭對(duì)于揮發(fā)性成分吸附及分離效果最好，故選擇粉色萃取頭來對(duì)本研究的揮發(fā)性成分進(jìn)行萃取。且因所采樣品產(chǎn)地、季節(jié)、批次及揮發(fā)性成分提取方式的不同，可能會(huì)導(dǎo)致本研究與之前文獻(xiàn)中所鑒定的揮發(fā)性成分會(huì)有所差異。

隨著飼料替抗標(biāo)準(zhǔn)制定工作的進(jìn)行，“替代抗生素”這一話題顯得尤為重要，而目前中草藥型飼料添加劑因其獨(dú)特的優(yōu)勢(shì)作為“替抗”產(chǎn)品是極具潛力的選擇。由本研究可知，博落回屬植物不同部位均具作為飼料添加劑的條件與優(yōu)勢(shì)，其不同生長(zhǎng)部位可用作不同作用中草藥型飼料添加劑的原料。如博落回根、葉、果與小果博落回根、葉、果中含量最高的揮發(fā)性成分β-倍半水芹烯具抗病毒、抗?jié)兊榷喾N藥理活性[15]，博落回根等六個(gè)生長(zhǎng)部位中均含有的成分百里酚對(duì)飼料中霉菌具較強(qiáng)的抑制作用[16]，可迅速穿透致病微生物的細(xì)胞膜，改變H+和K+的滲透性，破壞細(xì)胞線粒體正常生化反應(yīng)達(dá)到殺菌的目的，還可抑殺有害病原體，保護(hù)腸道微生態(tài)平衡，促進(jìn)生長(zhǎng)，提高免疫力。而博落回根等生長(zhǎng)部位中含量均高于20%的成分姜烯則有抗菌消炎、殺蟲、抗?jié)兊榷喾N作用[17]，還可增強(qiáng)胃液的分泌和腸壁的蠕動(dòng)，從而幫助消化，促進(jìn)生長(zhǎng)及提高免疫力。對(duì)于現(xiàn)代飼料工業(yè)而言，抗菌抗炎型飼料添加劑占主導(dǎo)地位，而博落回屬植物不同生長(zhǎng)部位中的具多種藥理作用的揮發(fā)性成分作為飼料添加劑應(yīng)用于飼料中，既可對(duì)其進(jìn)行充分開發(fā)與利用，又可為飼料添加劑行業(yè)的發(fā)展提供思路與討論。