劉宇軒，李家富，韋甜

（1.隨州市公安司法鑒定中心，湖北 隨州 441300；2.賽默飛世爾（中國(guó)）有限公司，上海 200000）

1 案 例

1.1 簡(jiǎn)要案情

2010年10月9日凌晨，某鎮(zhèn)區(qū)加油站發(fā)生一起殺人案，老板汪某及妻子楊某被殘忍殺害于加油站臥室內(nèi)，室內(nèi)有翻動(dòng)痕跡。經(jīng)現(xiàn)場(chǎng)勘驗(yàn)提取到一名嫌疑人血跡，并檢出該嫌疑人常染色體DNA分型及YSTR分型數(shù)據(jù)。

1.2 破案經(jīng)過(guò)

案發(fā)后，當(dāng)?shù)鼐酵ㄟ^(guò)多種途徑偵查、比對(duì)，但一直未破獲。2016年下半年，該省公安廳啟動(dòng)了全省命案積案攻堅(jiān)工作，專案組運(yùn)用Y-STR家系排查技術(shù)，采集了現(xiàn)場(chǎng)周邊4個(gè)鄉(xiāng)鎮(zhèn)在校男性學(xué)生血樣6000余份。經(jīng)Y-STR分型檢驗(yàn)及比對(duì)，發(fā)現(xiàn)某鎮(zhèn)某村“李姓”家系26個(gè)Y-STR基因座分型與現(xiàn)場(chǎng)嫌疑人血跡的Y-STR分型差別僅有1～2個(gè)。專案組立即圍繞該村“李姓”家系開展了摸排工作。經(jīng)過(guò)詳細(xì)的家系調(diào)查和常染色體DNA比對(duì)，家系成員被一個(gè)個(gè)排除，排查陷入了困境。為了進(jìn)一步判斷現(xiàn)場(chǎng)血跡與“李姓”家系的關(guān)系，運(yùn)用YfilerTMPlatinum PCR擴(kuò)增試劑盒（美國(guó)Thermo Fisher Scientific公司）再次檢驗(yàn)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)現(xiàn)場(chǎng)血跡與“李姓”家系成員在38個(gè)Y-STR基因座分型中，存在3～5個(gè)差異。依據(jù)該試劑盒提供的判別標(biāo)準(zhǔn)，即兩個(gè)對(duì)比樣本中，3個(gè)Y-InDel中有任意一個(gè)位點(diǎn)不同，可排除兩者是同一家系；3個(gè)Y-InDel相同，不排除是同一家系，需進(jìn)一步依靠Y-STR分型差異數(shù)量進(jìn)行排除；當(dāng)Y-STR不匹配數(shù)≤4時(shí)，判定兩者較大可能來(lái)自同一家系。我們認(rèn)為不能排除作案人員是“李姓”或與“李姓”有某種親緣關(guān)系的可能性，據(jù)此制定了堅(jiān)持“李姓”家系及同村李姓以外家系排查的偵查策略，發(fā)現(xiàn)同村“武姓”家系成員“武某華”的Y-STR分型與“李姓”家系成員“李某峰”及現(xiàn)場(chǎng)血跡的Y-STR分型高度相似（表1）。據(jù)此分析認(rèn)為，嫌疑人極有可能是“武姓”家系中的一員，并與“李姓”存在某種關(guān)系。偵查人員立即對(duì)“武姓”家系展開了調(diào)查，經(jīng)常染色體STR檢驗(yàn)，確定武某即是該案作案人，此案告破。

表1 YfilerTMPlatinum PCR試劑盒檢測(cè)結(jié)果Tab.1 Test results of YfilerTMPlatinum PCR kit

續(xù)表1Continued Tab.1

2 討 論

理論上，Y-STR分型只有排除意義，不可作為認(rèn)定依據(jù)。尤其是當(dāng)比中家系與現(xiàn)場(chǎng)檢材Y-STR分型存在差別時(shí)，或完全比中某家系但排查許久沒(méi)有結(jié)果時(shí)，對(duì)比中家系的取舍將更難判斷。此類問(wèn)題最常用的解決方法是增加Y-STR基因座，理論上，聯(lián)合使用的Y-STR基因座越多，群體中出現(xiàn)的單倍型種類就越多，鑒定能力就越大[1]。為達(dá)到足夠數(shù)量的Y-STR基因座，各地實(shí)驗(yàn)室通常聯(lián)合應(yīng)用多個(gè)Y-STR試劑盒。但該策略會(huì)消耗更多的模板、花費(fèi)更多的時(shí)間，也會(huì)使突變的可能性增大，導(dǎo)致家系判斷更為困難。此時(shí)亦可利用InDel[2]、SNP[3]等具有更低突變率的遺傳標(biāo)記進(jìn)行家系推斷。

本案中，我們應(yīng)用了YfilerTMPlatinum PCR試劑盒。該試劑盒采用六色熒光標(biāo)記系統(tǒng)，共包含38個(gè)Y-STR基因座和3個(gè)中國(guó)特有的近零突變的Y-InDel位點(diǎn)[4]。38個(gè)Y-STR基因座同時(shí)擴(kuò)增，減少了模板的消耗，也節(jié)省了檢案時(shí)間。另外，復(fù)合擴(kuò)增體系中加入的Y-InDel位點(diǎn)，是該試劑盒的獨(dú)特之處。該體系中的3個(gè)Y-InDel相比Y-STR突變率更低，可以在后代中長(zhǎng)久保留，不會(huì)丟失其突變特征。當(dāng)兩個(gè)對(duì)比樣本的3個(gè)Y-InDel中有任意一個(gè)位點(diǎn)不同，即可排除兩者是同一家系，提高了家系排除效力。

本案中，現(xiàn)場(chǎng)血跡與多名“李姓”家系成員在3個(gè)Y-InDel位點(diǎn)分型結(jié)果完全一致，Y-STR基因座中不匹配個(gè)數(shù)在3～5個(gè)，故“李姓”家系的可疑性不能排除?！袄钚铡奔蚁抵心承┏蓡T如“李某峰”和“武姓”家系中某些成員如“武某華”在3個(gè)Y-InDel位點(diǎn)分型相同，38個(gè)Y-STR基因座分型僅有1個(gè)不同，推測(cè)該村“李姓”“武姓”具有同源的可能性，如能進(jìn)一步對(duì)兩家系進(jìn)行Y-SNP及Y-InDel等低突變位點(diǎn)的檢驗(yàn)，將有助于推斷兩家系的關(guān)系。

LIU等[5]認(rèn)為：利用AmpF?STRTMYfilerTMPCR擴(kuò)增試劑盒（美國(guó)AB公司）同一家系判別的標(biāo)準(zhǔn)為基因座不同數(shù)≤2且步長(zhǎng)≤2；YfilerTMPlus PCR擴(kuò)增試劑盒（美國(guó)Thermo Fisher Scientific公司）的判別標(biāo)準(zhǔn)為基因座不同數(shù)≤4且累計(jì)步長(zhǎng)≤5。但隨著案件中使用的Y-STR基因座數(shù)增加，研究人員需要進(jìn)一步研究如何合理地確定判別標(biāo)準(zhǔn)。YfilerTMPlatinum PCR擴(kuò)增試劑盒提供的同一家系判別標(biāo)準(zhǔn)為3個(gè)Y-InDel位點(diǎn)分型相同的前提下，Y-STR基因座不同數(shù)≤4。此標(biāo)準(zhǔn)為該試劑盒給出的參考標(biāo)準(zhǔn)，但該判別標(biāo)準(zhǔn)效力，還需進(jìn)一步研究。本案中也觀察到，該村“李姓”“武姓”部分成員僅一個(gè)位點(diǎn)不同，利用YfilerTMPlatinum PCR擴(kuò)增試劑盒推斷可能為同一家系；采集的多名“李姓”成員與作案人“武某”Y-STR基因座分型不同數(shù)在3～5個(gè)，部分成員分型不同數(shù)大于4。提示我們?cè)诓杉瘜?duì)比血樣時(shí)，應(yīng)同時(shí)采集多名家系成員，以免判斷錯(cuò)誤。同時(shí)，當(dāng)出現(xiàn)對(duì)比家系位點(diǎn)不同數(shù)大于4時(shí)，也不能輕易排除，可以進(jìn)一步挖掘該家系近親關(guān)系。