潘錫龍，彭明，陳燕輝，梁利斯，方玲(.中山市東升醫(yī)院檢驗(yàn)科，廣東中山5844；.中山市中醫(yī)院檢驗(yàn)科，廣東中山58400；.中山市博愛醫(yī)院檢驗(yàn)科，廣東中山58400)

在幾個有代表性的臨床試驗(yàn)中，用BRAHMS公司Kryptor系統(tǒng)制定的降鈣素原(procalcitonin,PCT)的截斷值被廣泛應(yīng)用于感染性疾病的診療[1-2]。隨著PCT在感染性疾病診療中的廣泛應(yīng)用，各種PCT檢測技術(shù)得到迅速開發(fā)和應(yīng)用，然而目前還沒有公認(rèn)的PCT參考測量程序和參考物質(zhì)[3]，因此不同檢測系統(tǒng)的結(jié)果是否具有可比性或不同檢測系統(tǒng)可否使用相同截斷值仍不確定。本研究擬分析基蛋生物Getein1600、羅氏cobas e602和梅里埃VIDAS PC免疫分析系統(tǒng)檢測PCT的偏倚，并評價其使用截斷值時的一致性。

1 材料與方法

1.1檢測系統(tǒng) Getein1600熒光免疫分析系統(tǒng)(簡稱Getein1600)、cobas e602電化學(xué)發(fā)光分析系統(tǒng)(簡稱cobas e602)和VIDAS PC 熒光酶免分析系統(tǒng)(簡稱VIDAS PC)均為封閉系統(tǒng)，即有使用配套試劑、校準(zhǔn)品和質(zhì)控品，各系統(tǒng)主要描述見表1。

表1 Getein1600、cobas e602和VIDAS PC檢測系統(tǒng)的主要描述

注：a,由中國GeteinBotech(基蛋生物)公司生產(chǎn)；b，由美國Thermo Fisher Scientific(賽默飛) 公司生產(chǎn)。

1.2血清樣本

1.2.1偏倚分析 收集中山市中醫(yī)院2019年6月20—24日檢驗(yàn)PCT的血清標(biāo)本231份，其中來自男性112份，來自女性119份。每份標(biāo)本分裝3份后立即于(-21±1)℃保存。2019年6月25日，將每份標(biāo)本中的1份留在中山市中醫(yī)院檢驗(yàn)科，將另外2份在4～8 ℃恒溫下分別派發(fā)給中山市東升醫(yī)院檢驗(yàn)科和中山市博愛醫(yī)院檢驗(yàn)科。

1.2.2不精密度驗(yàn)證 2019年6月20日，收集中山市中醫(yī)院檢驗(yàn)PCT的血清標(biāo)本，混合配制成2份不同濃度樣本L1、 L2并分別分裝90份，將L1、 L2各30份留在中山市中醫(yī)院檢驗(yàn)科，將L1、L2各30份在4～8 ℃恒溫下分別派發(fā)給中山市東升醫(yī)院檢驗(yàn)科和中山市博愛醫(yī)院檢驗(yàn)科。

1.2.3標(biāo)本收集及運(yùn)送要求 嚴(yán)格按照各檢測系統(tǒng)的標(biāo)本收集要求，并參考CLSI EP9-A3[4]、EP15-A3[5]進(jìn)行收集和保存，確保新鮮、足量、無溶血、無嚴(yán)重黃疸(低于最小干擾濃度)、無嚴(yán)重脂濁(低于最小干擾濃度)，PCT濃度在檢測線性之內(nèi)。標(biāo)本派發(fā)，包括包裝、運(yùn)輸、交接等符合中國《實(shí)驗(yàn)室生物安全通用要求》(GB19489—2008)。

1.3方法

1.3.1樣本檢測 (1)偏倚分析：參考CLSI EP9-A3，各檢驗(yàn)科在同一時間用各自檢測系統(tǒng)檢測PCT。(2)不精密度驗(yàn)證：參考CLSI EP15-A3，自2019年6月20日，各檢驗(yàn)科用各自檢測系統(tǒng)每天檢測5份L1、L2標(biāo)本PCT，持續(xù)5天，其他L1、L2標(biāo)本作為出現(xiàn)離群值時剔除數(shù)據(jù)后的補(bǔ)充標(biāo)本。在此過程中，L1、L2待檢標(biāo)本均于(-21±1)℃保存。(3)檢測要求：各檢測系統(tǒng)的樣本檢測和維護(hù)保養(yǎng)均嚴(yán)格遵守標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程進(jìn)行，室內(nèi)質(zhì)控均在控。

1.3.2不精密度驗(yàn)證 參考CLSI EP15-A3，用Grubbs′s法檢查離群值，計算各檢測系統(tǒng)的重復(fù)性和實(shí)驗(yàn)內(nèi)不精密度估計值，分別以國家衛(wèi)生健康委臨床檢驗(yàn)中心PCT室間質(zhì)評允許范圍(±30.0%)的1/4和1/3即±7.5%和±10.0%為可接受標(biāo)準(zhǔn)。

1.3.3偏倚分析 參考CLSI EP9-A3，計算每2種檢測系統(tǒng)配對結(jié)果的(y-x)/x值并采用ESD法檢驗(yàn)離群值；分析每2種檢測系統(tǒng)配對結(jié)果的相關(guān)性、方差齊性及偏差分布特征，選擇簡單線性回歸法(OLR)、加權(quán)最小二乘法(WLS)、Deming和Passing-Bablok 4種模型中最佳模型進(jìn)行回歸分析，通過回歸方程導(dǎo)出系統(tǒng)偏倚，計算4個截斷值(0.25 ng/mL、0.5 ng/mL、2.0 ng/mL和10.0 ng/mL)[3,6]處偏倚，以國家衛(wèi)生健康委臨床檢驗(yàn)中心PCT室間質(zhì)評允許范圍(±30.0%)的1/2即±15.0%為可接受標(biāo)準(zhǔn)。

1.3.4一致性評價 對每2種系統(tǒng)檢測結(jié)果分別以截斷值0.25 ng/mL、0.5 ng/mL、2.0 ng/mL和10.0 ng/mL進(jìn)行分類并計算分布頻數(shù)。對每2種系統(tǒng)檢測結(jié)果以每一截斷值分類的計數(shù)資料計算符合率，用Kappa檢驗(yàn)評價一致性，以一致性強(qiáng)度較好為每2種系統(tǒng)使用同一截斷值診斷時具有一致性的可接受標(biāo)準(zhǔn)。

1.4統(tǒng)計學(xué)分析 用Excel 2007、SPSS 16.0和Medcalc 15.0軟件進(jìn)行。采用Levene檢驗(yàn)分析方差齊性，P>0.05為方差齊。采用Pearson相關(guān)分析，P<0.05為有統(tǒng)計學(xué)意義。一致性評價時，Kappa系數(shù)(K)≤0.4一致性強(qiáng)度較差，0.40.75一致性強(qiáng)度較好。

2 結(jié)果

2.1不精密度驗(yàn)證Grubbs′s法檢查未發(fā)現(xiàn)離群值，Getein1600、cobas e602和VIDAS PC系統(tǒng)的重復(fù)性和實(shí)驗(yàn)室內(nèi)不精密度均在可接受標(biāo)準(zhǔn)內(nèi)，見表2。

表2 cobas e602、VIDAS PC、Getein1600系統(tǒng)不精密度性能

2.2偏倚分析 在231份血清的實(shí)際檢測中，15份超出Getein1600檢測上限，3份超出Getein1600檢測下限，以213份有效血清檢測數(shù)據(jù)納入分析。ESD法檢查未發(fā)現(xiàn)離群值。Getein1600與cobas e602、Getein1600與VIDAS PC檢測結(jié)果相關(guān)，偏差大致呈比例變化，但方差不齊，由Passing-Bablok回歸方程導(dǎo)出的正比例系統(tǒng)偏倚和計算的截斷值處偏倚均超出可接受標(biāo)準(zhǔn)；cobas e602與VIDAS PC檢測結(jié)果相關(guān)，偏差大致呈比例變化，方差齊，由WLS回歸方程導(dǎo)出的負(fù)比例系統(tǒng)偏倚和計算的截斷值處偏倚均超出可接受標(biāo)準(zhǔn)(10.0 ng/mL處偏倚除外)。見圖1和表3～4。

圖1 每2種系統(tǒng)檢測結(jié)果偏差圖

表3 每2種系統(tǒng)檢測結(jié)果的相關(guān)和回歸分析

注：a,方差不齊(P<0.05)；b,方差齊(P>0.05);c,r與“0”差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)；d，斜率與“1”差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)；e，截矩與“0”差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。

表4 每2種系統(tǒng)在截斷值處的預(yù)期偏倚及其可接受性

2.3一致性評價 Getein1600與cobas e602使用相同截斷值診斷時均不具有一致性；Getein1600與VIDAS PC使用同一截斷值0.25 ng/mL或0.5 ng/mL診斷時不具有一致性，使用2.0 ng/mL或10.0 ng/mL診斷時具有一致性；cobas e602與VIDAS PC使用相同截斷值診斷時均具有一致性。見表5～8。

表5 Getein1600與cobas e602使用相同截斷值時分類計數(shù)的頻數(shù)分布

表6 Getein1600與VIDAS PC使用相同截斷值時分類計數(shù)的頻數(shù)分布

表7 cobas e602與VIDAS PC使用相同截斷值時分類計數(shù)的頻數(shù)分布

表8 每2種檢測系統(tǒng)使用同一截斷值的Kappa檢驗(yàn)

3 討論

本研究發(fā)現(xiàn)每2種系統(tǒng)間均存在不可接受的比例系統(tǒng)偏倚，即使是均使用BRAHMS PCT檢測抗體的cobas e602與VIDAS PC也不例外。其中使用不同檢測抗體的檢測系統(tǒng)(Getein1600與cobas e602、Getein1600與VIDAS PC)間偏倚比使用相同檢測抗體的檢測系統(tǒng)(cobas e602與VIDAS PC)間偏倚要大。國內(nèi)外關(guān)于Getein1600與cobas e602偏倚的研究報道較少，僅有王世松等[7]報道，但與本研究結(jié)論不同，可能與比對數(shù)據(jù)差值分布特征不同有關(guān)。Getein1600與VIDAS PC比對暫未見報道。在cobas e602與VIDAS PC偏倚分析的報道中，楊石等[8]報道與本研究結(jié)論一致，存在不可接受的偏倚。國外幾乎都以BRAHMS公司Kryptor系統(tǒng)為參照比較評價其他與之使用相同檢測抗體(即BRAHMS PCT抗體)的檢測系統(tǒng)。從國外研究[3,6,9-12]中直接或間接推導(dǎo)得知絕大部分[3,6,9-11]與本研究結(jié)論大致相同，僅少數(shù)[12]與本研究結(jié)論有異。由此可見，在大多數(shù)情況下即使是使用相同檢測抗體的兩種系統(tǒng)也存在明顯偏倚。

本研究發(fā)現(xiàn)均使用BRAHMS PCT檢測抗體的cobas e602與VIDAS PC系統(tǒng)的診斷具有一致性，可以使用任一相同截斷值診斷。研究[3,6,9-12]同時也評價了不同PCT系統(tǒng)診斷一致性，均指出有較高符合率或較好一致性，可以或基本可以使用相同截斷值診斷，表明使用BRAHMS PCT檢測抗體的系統(tǒng)具有較好的量值傳遞。相比于cobas e602與VIDAS PC，使用不同檢測抗體的Getein1600與VIDAS PC在使用部分截斷值診斷時具有一致性，而Getein1600與cobas e602不可以使用相同截斷值診斷，一致性強(qiáng)度依次減低。

綜上所述，不同PCT系統(tǒng)存在明顯檢測偏倚，尤其是使用不同檢測抗體的系統(tǒng)偏倚會更大和往往不能使用相同截斷值。實(shí)驗(yàn)室在開展PCT檢測或更換不同PCT檢測方法時,尤其是應(yīng)用非BRAHMS PCT檢測抗體的檢測系統(tǒng)，在未經(jīng)比對情況下不能隨意套用目前廣泛使用的截斷值，應(yīng)加強(qiáng)比對研究和診斷一致性評價，必要時應(yīng)建立合適的截斷值。