覃日宏，應(yīng)雨綺，李周東，林勝深，李宣錦，高鑫

（廣西中醫(yī)藥大學(xué)賽恩斯新醫(yī)藥學(xué)院，廣西 南寧）

0 引言

毛果算盤(pán)子為大戟科植物毛果算盤(pán)子(Glochidioneriocarpum Champ.) 的干燥地上部分，該植物在廣西資源豐富，分布廣泛，其主治清熱利濕，散瘀消腫，解毒止癢；用于治療生漆過(guò)敏，水田皮炎，皮膚瘙癢，蕁麻疹，濕疹，剝脫性皮炎，跌打損傷[1-2]，目前，對(duì)毛果算盤(pán)子的抗炎研究已有所報(bào)道[3]，但是關(guān)于其不同提取部位的抗炎作用的研究及篩選尚未見(jiàn)報(bào)道，研究中藥不同部位的藥效是中醫(yī)藥研發(fā)的一個(gè)新思路。本文對(duì)毛果算盤(pán)子不同極性部位的抗炎作用進(jìn)行體外給藥進(jìn)行研究，確定有效極性部位，為其進(jìn)一步開(kāi)發(fā)及臨床應(yīng)用提供有效依據(jù)。

1 實(shí)驗(yàn)藥材與方法

1.1 儀器

AUY220 電子天平（日本島津）、RE-52AA 旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(上海亞榮生化儀器廠)。

1.2 試劑

二甲苯（國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司，批號(hào)：20170601）、卡拉膠（如吉生物科技，批號(hào)：190110）、石油醚（廣東光華科技股份有限公司，批號(hào)：20140319）、乙酸乙酯（西隴科學(xué)，批號(hào)：120702-1）、正丁醇（上海申博有限公司，批號(hào)：1406101）、丙二醇（西隴科學(xué)，批號(hào)：180102-1）、吐溫-80（西隴科學(xué)，批號(hào)：170305）、復(fù)方醋酸曲安奈德溶液（廣東恒誠(chéng)有限公司，批號(hào)：1904401）、甲醇（西隴科學(xué)，批號(hào)：190104-1）。

1.3 動(dòng)物

小鼠為昆明種，SPF 級(jí)，20±2g（由長(zhǎng)沙市天勤生物技術(shù)有限公司提供），許可證號(hào)：SCXK（2014-0011）♂。

1.4 藥材

毛果算盤(pán)子藥材采自廣西隆林，經(jīng)廣西中醫(yī)藥大學(xué)賽恩斯新醫(yī)藥學(xué)院苑敏副教授鑒定，為大戟科植物毛果算盤(pán)子(Glochidioneriocarpum Champ.) 的干燥地上部分。毛果算盤(pán)子提取工藝：取毛果算盤(pán)子1kg 干燥地上部分處理成約0.5cm 小段，置回流裝置中加70%乙醇浸泡30min，加熱回流60min，過(guò)濾，取濾液，濾渣加70%乙醇繼續(xù)回流提取30min，過(guò)濾，取濾液，合并兩次濾液，減壓濃縮至無(wú)醇味后加適當(dāng)?shù)乃钩苫鞈乙海来斡靡宜嵋阴?、正丁醇進(jìn)行萃取，剩下部位為水部位，將萃取液減壓濃縮后至水域濃縮成膏狀，分別得乙酸乙酯部位（A1）、正丁醇部位（A2）、水部位（A3），置-20℃冰箱中保存，備用。臨用前配制成相應(yīng)的濃度，每個(gè)溶液均內(nèi)含體積分?jǐn)?shù)為7.0% 的藥用丙二醇，作透皮吸收、含浸膏分別8% 聚山梨酯-80 助溶。

1.5 實(shí)驗(yàn)方法

1.5.1 對(duì)二甲苯致小鼠耳腫脹的影響

取小白鼠（♂）80 只，放置實(shí)驗(yàn)環(huán)境適應(yīng)3 天，體重18～22g，隨機(jī)分成8 個(gè)組：復(fù)方醋酸曲安奈德溶液組，生理鹽水對(duì)照組，A1、A2、A3 高、低劑量組（相當(dāng)于原藥材相當(dāng)于原藥材1.2g/mL、0.6g/mL）。8 組小鼠均用微量移液器移取二甲苯，分別在右耳廓前后兩面均勻凃抹二甲苯致炎(0.04mL/ 只)，致炎0.5、1、2 小時(shí)后，8 組小鼠分別用相應(yīng)濃度的藥物在右耳廓涂藥，用藥量為4mL/kg，模型組同時(shí)凃抹相同劑量的生理鹽水，4 小時(shí)后將6 組小鼠頸椎脫臼處死，逐只剪下雙耳，用8mm 打孔器分別在左右耳相同部位打下耳片，在電子分析天平稱重，以兩耳片的重量差為炎癥腫脹度，并計(jì)算腫脹抑制率。腫脹度=右耳重量(mg)－左耳重量(mg)；腫脹抑制率(%)=[( 模型組平均腫脹度－給藥組平均腫脹度)/ 模型組平均腫脹度×100%。

1.5.2 對(duì)角卡拉膠致小鼠足腫脹的影響

取小白鼠（♂）80 只，放置實(shí)驗(yàn)環(huán)境適應(yīng)3 天，體重18～22g，隨機(jī)分成8 個(gè)組：復(fù)方醋酸曲安奈德溶液組，生理鹽水對(duì)照組，A1、A2、A3 高、低劑量組（相當(dāng)于原藥材相當(dāng)于原藥材1.2g/mL、0.6g/0）。實(shí)驗(yàn)者手抓小鼠將右后足跖放于藥液中浸泡180s，模型組浸泡于純凈水中。給藥后60min 小鼠右后足跖腱膜下緩慢注射1%卡拉膠(用生理鹽水配制)0.02mL/只致炎，致炎后1h、2h 后用前面同樣方法再分別給藥2 次，致炎3h 后脫頸椎處死各小鼠，于膝關(guān)節(jié)處剪下兩后足，分別稱左、右足重量，右后足減左后足重量的差值即為腫脹度；作t 檢驗(yàn)，比較藥物與對(duì)照組之間的差異。腫脹抑制率(%)=[( 模型組平均腫脹度－給藥組平均腫脹度)/ 模型組平均腫脹度×100%。

2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

2.1 對(duì)二甲苯致小鼠耳腫脹的影響與空白對(duì)照組相比，A2高、低劑量對(duì)二甲苯所引起的小鼠耳腫脹均有顯著的抑制作用（P＜0.05），抑制率22.55%、17.67%，結(jié)果見(jiàn)表1。

2.2 對(duì)卡拉膠致小鼠足腫脹的影響與空白對(duì)照組相比，A3 高、低劑量，A2 高劑量、對(duì)1% 卡拉膠所引起小鼠足腫脹都有顯著的抑制作用（P＜0.05），抑制率分別為44.98%、44.10%、28.38%。結(jié)果見(jiàn)表2。

表1 GEH 對(duì)二甲苯至小鼠耳腫脹的影響（，n=10）

表1 GEH 對(duì)二甲苯至小鼠耳腫脹的影響（，n=10）

注：與空白組對(duì)比：* P＜0.05，** P＜0.01,***P＜0.001

組別 劑量（g/mL） 腫脹度（g） 抑制率（%）NS 對(duì)照組 — 0.0168±0.0025 —復(fù)方醋酸曲安奈德溶液組 原液 0.0114±0.0054* 32.06 A1 高劑量組 1.2 0.0148±0.0051 12.08 A1 低劑量組 0.6 0.0154±0.0031 8.69 A2 高劑量組 1.2 0.0130±0.0041* 22.55 A2 低劑量組 0.6 0.0138±0.0022* 17.67 A3 高劑量組 1.2 0.0164±0.0055 2.38 A3 低劑量組 0.6 0.0168±0.0013 0.24

表2 GEH 對(duì)1%卡拉膠膠致小鼠足腫脹的影響n=10）

表2 GEH 對(duì)1%卡拉膠膠致小鼠足腫脹的影響n=10）

注：與空白組對(duì)比：* P＜0.05，** P＜0.01,***P＜0.001

組別 劑量（g/mL） 腫脹度（g） 抑制率（%）NS 對(duì)照組 — 0.0229±0.0077 —復(fù)方醋酸曲安奈德溶液組 原液 0.0128±0.0064** 44.10 A1 高劑量組 1.2 0.0212±0.0047 7.42 A1 低劑量組 0.6 0.0189±0.0084 17.47 A2 高劑量組 1.2 0.0164±0.0044* 28.38 A2 低劑量組 0.6 0.0169±0.0148 26.20 A3 高劑量組 1.2 0.0126±0.0081** 44.98 A3 低劑量組 0.6 0.0128±0.0067** 44.10

3 討論

炎癥初期以毛細(xì)血管擴(kuò)張、通透性增加、組織液滲出和水腫為特征，急性期以局部血管擴(kuò)張、通透性繼續(xù)增加為特征?；瘜W(xué)致炎劑二甲苯可引起組胺激肽、纖維蛋白溶解酶等炎性介質(zhì)釋放， 進(jìn)而引起局部毛細(xì)血管通透性增加及炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)， 最終引發(fā)耳部急性滲出性炎性水腫[4]；具有刺激性的角叉菜膠注入大鼠足跖后，可使大鼠的足跖局部毛細(xì)血管充血、水腫， 引發(fā)足跖體積增加， 同時(shí)伴有紅、腫、熱、痛等癥狀[5]。

本實(shí)驗(yàn)采用70%乙醇提取毛果算盤(pán)子的有效成分，依次用石油醚（石油醚無(wú)萃取物，因此不做為抗炎活性篩選部位）、乙酸乙酯、正丁醇三種溶劑進(jìn)行萃取，剩余部位作為水部位；用傳統(tǒng)的1%卡拉膠致小鼠腳腫脹、二甲苯致小鼠耳廓腫脹觀察毛果算盤(pán)子不同極性部位對(duì)小鼠的抗炎作用，結(jié)果顯示水部位和正丁醇高劑量對(duì)1%卡拉膠致小鼠腳腫脹具有明顯的抑制作用，正丁醇高、低劑量二甲苯致小鼠耳廓腫脹具有明顯的抑制作用，而乙酸乙酯部位則無(wú)抑制作用。

本實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證了毛果算盤(pán)子不同極性部位的體外抗炎作用，中藥成分十分復(fù)雜，抗炎機(jī)制也十分復(fù)雜，具有多靶點(diǎn)、多途徑、多環(huán)節(jié)的特點(diǎn)，本次試驗(yàn)對(duì)不同藥用部位的提取物進(jìn)行分離單獨(dú)測(cè)其抗炎鎮(zhèn)痛作用， 雖然不能確定是其中某個(gè)單體發(fā)揮抗炎鎮(zhèn)痛作用，但初步確定不毛果算盤(pán)子的有效極性部位，為其進(jìn)一步開(kāi)發(fā)及臨床應(yīng)用提供有效依據(jù)，但其不同部位的抗炎機(jī)制尚未明確，尚須進(jìn)一步從因子水平等進(jìn)行研究才能更全面更深層次的闡明其抗炎機(jī)制。