安和兵，楊敬芳，馬媛媛，張俊婷，王書(shū)旺

(1.河北北方學(xué)院附屬第二醫(yī)院，河北 張家口 075100；2.張家口宣鋼醫(yī)院，河北 張家口 075100)

乙型肝炎是嚴(yán)重危害人體健康的傳染病之一[1]，乙肝病毒(HBV)是一種經(jīng)皮膚黏膜和性傳播的DNA病毒[2],對(duì)該病的快速診斷和治療已成為全球性公共衛(wèi)生問(wèn)題[3]。HBV低水平攜帶者低抗原量造成的漏檢尤其值得重視，HBV-DNA定量檢測(cè)是最直接最客觀的病毒復(fù)制指標(biāo)，其含量與患者的傳染性成正比[4]。我們選取了注射乙肝疫苗后乙肝表面抗原低滴度陽(yáng)性嬰幼兒進(jìn)行乙肝病毒DNA定量(HBV-DNA定量)檢測(cè)，探討HBsAg陽(yáng)性和疫苗接種的相關(guān)性及其臨床意義，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

采用化學(xué)發(fā)光微粒子法對(duì)河北北方學(xué)院附屬第二醫(yī)院2016—2019年間兒科病房和免疫門診接種乙肝疫苗2周內(nèi)的嬰幼兒進(jìn)行HBsAg檢測(cè)，檢出低滴度HBsAg陽(yáng)性嬰幼兒200例為研究組；選取200例接種乙肝疫苗后HBsAg陰性的嬰幼兒作為對(duì)照組。分別采用ELISA法和化學(xué)發(fā)光微粒子法進(jìn)行HBsAg檢測(cè)，每種方法選用同一臺(tái)儀器。對(duì)2組嬰幼兒分別進(jìn)行HBV-DNA定量檢測(cè)。

1.2 儀器與試劑

HBV-DNA定量檢測(cè)采用ABI7300實(shí)時(shí)熒光定量PCR分析儀，試劑由中山大學(xué)達(dá)安基因股份有限公司提供；化學(xué)發(fā)光微粒子法采用i2000SR化學(xué)發(fā)光儀(雅培公司生產(chǎn))，試劑為儀器配套進(jìn)口試劑；ELISA法采用安圖PHOMO酶免儀(鄭州安圖公司生產(chǎn))，試劑由北京萬(wàn)泰生物藥業(yè)股份有限公司提供。

1.3 方法

所有研究對(duì)象按要求禁食8～12 h，早晨空腹抽取靜脈血，分離血清進(jìn)行檢測(cè)。HBsAg檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)：化學(xué)發(fā)光法定量分析>0.05 IU·mL-1為陽(yáng)性，ELISA定性分析>cut off值為陽(yáng)性，HBV-DNA定量檢測(cè)以HBV-DNA>500 IU·mL-1為陽(yáng)性。嚴(yán)格按照實(shí)驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程(SOP文件)進(jìn)行操作。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

2 結(jié) 果

2.1 ELISA法和化學(xué)發(fā)光微粒子法檢測(cè)結(jié)果

研究組200例嬰幼兒中有4例化學(xué)發(fā)光微粒子法檢測(cè)結(jié)果為11.30、4.5、9.20、5.10 IU·mL-1，其余196例介于0.05～0.30 IU·mL-1，表現(xiàn)為弱陽(yáng)性；ELISA法檢測(cè)結(jié)果有12例表現(xiàn)為弱陽(yáng)性。研究組ELISA法對(duì)低滴度陽(yáng)性HBsAg靈敏度很低，陽(yáng)性率僅為6%，而化學(xué)發(fā)光微粒子法陽(yáng)性檢出率為100%(P<0.05)

對(duì)照組200例嬰幼兒化學(xué)發(fā)光微粒子法、ELISA法檢測(cè)結(jié)果全部為陰性。

2.2 研究組和對(duì)照組乙肝病毒DNA定量檢測(cè)結(jié)果

研究組200例HBsAg陽(yáng)性嬰幼兒中HBV-DNA定量檢測(cè)陽(yáng)性者4例，陽(yáng)性率為2%，其中3例嬰幼兒的母親是HBsAg攜帶者，可能是新生兒分娩過(guò)程中發(fā)生母嬰傳播，成為HBV攜帶者；1例嬰幼兒陽(yáng)性原因不明，父母HBsAg均為陰性，可能為嬰幼兒后期感染HBV所致；研究組中其余196例嬰幼兒HBV-DNA定量結(jié)果全部為陰性。對(duì)照組中200例嬰幼兒HBV-DNA定量結(jié)果全部為陰性。

HBsAg低滴度陽(yáng)性和嬰幼兒接種疫苗可能相關(guān)，尚需積累資料對(duì)相關(guān)性作進(jìn)一步研究。

3 討 論

目前關(guān)于HBsAg低滴度陽(yáng)性患者研究較少[5]，我們對(duì)河北北方學(xué)院附屬第二醫(yī)院兒科病房和免疫門診近3年乙肝疫苗免疫接種病例資料進(jìn)行回顧性分析，分析了2 000名接種乙肝疫苗嬰幼兒2周內(nèi)化學(xué)發(fā)光微粒子法檢測(cè)乙肝五項(xiàng)的結(jié)果，篩選出200例HBsAg弱陽(yáng)性嬰幼兒，陽(yáng)性率約為10%，有研究報(bào)道定量陽(yáng)性率為18%[6]。20世紀(jì)90年代國(guó)外陸續(xù)報(bào)道過(guò)新生兒接種乙肝疫苗后出現(xiàn)短暫HBsAg陽(yáng)性的情況[7-9]。ELISA法檢測(cè)HBsAg只能進(jìn)行定性檢測(cè)，檢測(cè)靈敏度不高，對(duì)一些臨界陽(yáng)性易漏檢，HBsAg血清標(biāo)志物定量檢測(cè)能較為準(zhǔn)確地反映感染者體內(nèi)HBV含量[10]。本研究中，我們采用化學(xué)發(fā)光微粒子法定量檢測(cè)HBsAg血清標(biāo)志物，使用直徑約2μm順磁顆粒固相載體，表面積大、吸附效率高，固相抗原或抗體量增加；增強(qiáng)發(fā)光試劑可以使發(fā)光時(shí)間延長(zhǎng)、強(qiáng)度增加，檢測(cè)靈敏度顯著提高[11]。本研究結(jié)果表明，化學(xué)發(fā)光微粒子法檢測(cè)臨界陽(yáng)性標(biāo)本靈敏度遠(yuǎn)高于ELISA法，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。

研究組HBV-DNA定量檢測(cè)結(jié)果表明，接種乙肝疫苗后短期內(nèi)出現(xiàn)HBsAg低滴度陽(yáng)性為假陽(yáng)性，不存在HBV大量復(fù)制，可能因注射疫苗后疫苗在體內(nèi)稀釋并激活了免疫系統(tǒng)，產(chǎn)生免疫應(yīng)答，可能存在HBV低水平復(fù)制，高靈敏度化學(xué)發(fā)光微粒子法可檢測(cè)出弱陽(yáng)性，但這種復(fù)制水平HBV-DNA定量檢測(cè)達(dá)不到陽(yáng)性參考水平。

綜上，HBV-DNA定量檢測(cè)能夠直接反映HBV復(fù)制水平，可作為診斷HBV感染的重要依據(jù)?；瘜W(xué)發(fā)光微粒子法可降低ELISA漏檢HBsAg陽(yáng)性的風(fēng)險(xiǎn)[12]。接種乙肝疫苗嬰幼兒化學(xué)發(fā)光微粒子法檢測(cè)出現(xiàn)HBsAg高陽(yáng)性率可能與疫苗接種相關(guān)，并非乙肝病毒感染所致，但部分陽(yáng)性患者確系感染乙肝病毒所致，建議對(duì)已接種乙肝疫苗的嬰幼兒進(jìn)行HBsAg檢測(cè)最好在接種2～3周以后，可有效降低HBsAg的假陽(yáng)性率，HBsAg結(jié)果弱陽(yáng)性嬰幼兒需進(jìn)行HBV-DNA定量檢測(cè)以確診。