李龍飛 綜述 官成濃 審校

廣東醫(yī)科大學(xué)，廣東 湛江 524001

肝癌在我國(guó)乃至全世界是一種極為常見(jiàn)的消化道惡性腫瘤，每年全世界的發(fā)病人數(shù)約78 萬(wàn)，位列惡性腫瘤第6 位，每年的死亡病例約75 萬(wàn)，高居惡性腫瘤死亡率第2 位，而我國(guó)每年約有39 萬(wàn)新發(fā)病例，在惡性腫瘤發(fā)病率中排第五位，占全球新發(fā)病例約50%，每年死亡人數(shù)約38 萬(wàn)，占惡性腫瘤死亡率第2位，嚴(yán)重威脅人類生命安全[1]。成年人最常見(jiàn)的肝癌類型為肝細(xì)胞肝癌(hepatocellular carcinoma，HCC)，約占原發(fā)性肝癌的90%。肝癌起病隱匿，初期臨床癥狀不明顯，僅有食欲下降、惡心等無(wú)特征的癥狀，到了中晚期才出現(xiàn)肝大、肝區(qū)疼痛、黃疸及消瘦等相關(guān)癥狀，這時(shí)多數(shù)已出現(xiàn)轉(zhuǎn)移：肝內(nèi)轉(zhuǎn)移或遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移，再行診治，預(yù)后極差。在我國(guó)，肝炎尤其是乙型病毒性肝炎患者是進(jìn)展為原發(fā)性肝癌的主要高危人群[2]。但也有部分肝癌患者既往無(wú)慢性乙型肝炎病史，所以肝癌發(fā)病機(jī)制復(fù)雜多樣，迄今也未被明確闡明[3]。目前肝癌患者的主要治療手段包括手術(shù)切除、動(dòng)脈栓塞化療或全身化療等，但效果均不佳，5年生存率僅10.1%[1]。

1 肝臟與免疫細(xì)胞

肝臟是具有重要代謝、生物合成、消化和解毒功能的淋巴器官[4]。它經(jīng)由肝動(dòng)脈和經(jīng)由門(mén)靜脈的腸系統(tǒng)循環(huán)接受血液[4]。由于肝臟不斷暴露于病毒、細(xì)菌和腸道菌群，因此肝臟環(huán)境在維持體內(nèi)平衡的免疫耐受性和針對(duì)侵入病原體的肝臟免疫力之間建立了平衡[5]。肝細(xì)胞和膽管細(xì)胞(膽管細(xì)胞)是占全部肝細(xì)胞約80%的主要細(xì)胞類型。肝臟中的非實(shí)質(zhì)細(xì)胞包括肝星狀細(xì)胞(HSC)、肝竇內(nèi)皮細(xì)胞(LSEC)、枯否細(xì)胞(KC)和樹(shù)突細(xì)胞(DC)。肝臟含有多種先天性和適應(yīng)性免疫細(xì)胞[6]。在正常肝臟中，自然殺傷(NK)和NK-T(NKT)細(xì)胞，DC、LSEC 和KC 在抑制性細(xì)胞表面配體和免疫抑制性細(xì)胞因子的情況下呈遞抗原，由此維持肝對(duì)各種抗原的耐受性[7]。

2 調(diào)節(jié)性B細(xì)胞發(fā)現(xiàn)與分化

以前有關(guān)肝癌與免疫細(xì)胞的相互作用的研究多集中在T 細(xì)胞上，但近年來(lái)越來(lái)越多的證據(jù)證明B 細(xì)胞在肝癌的發(fā)生發(fā)展中也起著重要作用。1996 年，WORF等[8]首次通過(guò)小鼠EAE模型證實(shí)了B細(xì)胞具有免疫抑制功能。1997年MIZOGUCHI等[9]發(fā)現(xiàn)了機(jī)體內(nèi)存在一種通過(guò)產(chǎn)生IL-10 細(xì)胞因子，調(diào)節(jié)其他免疫細(xì)胞作用，從而發(fā)生免疫抑制效應(yīng)的B細(xì)胞，這種細(xì)胞能下調(diào)炎癥級(jí)聯(lián)反應(yīng)，從而抑制小腸炎癥的發(fā)展，并被 命 名 為 調(diào) 節(jié) 性B 細(xì) 胞(regulatory B cell，Breg)。IL-10 也成為Breg 的重要生物標(biāo)志物。有研究顯示，BAFF (B 細(xì)胞活化因子)能促進(jìn)Breg 分泌IL-10[10]。有研究提示，由B1 細(xì)胞和MZ-B 細(xì)胞(marginalzone B cell)分化來(lái)的及一些相關(guān)的其他B細(xì)胞稱為天然調(diào)節(jié)性B細(xì)胞，通過(guò)TLR信號(hào)活化產(chǎn)生IL-10，從而在自身免疫疾病、炎癥、感染性疾病中發(fā)揮作用，由濾泡B細(xì)胞或T2 型邊緣帶前體B 細(xì)胞(T2-MZPB)分化來(lái)的稱為適應(yīng)性調(diào)節(jié)性B細(xì)胞，通過(guò)CD40激活后產(chǎn)生IL-10發(fā)揮作用[11]。

3 調(diào)節(jié)性B細(xì)胞的分型

關(guān)于人體Bregs表型的研究雖然迄今尚未完全明確，但也取得了一定的進(jìn)展。有研究者在小鼠中發(fā)現(xiàn)了一種可以分泌IL-10的CD1dhiCD5+B細(xì)胞[12]。近來(lái)也發(fā)現(xiàn)Bregs 表面存在CD40[13]、CD21、CD23、CD24、CD43、CD80、CD86、CD154[14]等多種特異性表面分子。此外，Bregs 還存在其他許多不同類型的表面分子，例 如CD19+CD24hiCD38hi 的B 細(xì) 胞[15]，CD19+CD27B 細(xì) 胞[16]，CD19+CD25B 細(xì) 胞[17]，CD19+CD5+Foxp3B 細(xì)胞[18]及CD25+CD71+CD73B 細(xì) 胞[19]。因此，不同類型的Bregs亞群發(fā)揮著不同的作用。

4 調(diào)節(jié)性B細(xì)胞的作用

之前的研究已經(jīng)證實(shí)，B 淋巴細(xì)胞主要通過(guò)呈遞抗原、產(chǎn)生抗體及細(xì)胞因子等途徑在特異性免疫中發(fā)揮作用。Breg則主要通過(guò)分泌抑制細(xì)胞因子IL-10發(fā)揮免疫抑制作用。FLORES-BORJA 等[20]發(fā)現(xiàn)分泌IL-10 的Breg 能抑制CD4T 細(xì)胞增生，促使其轉(zhuǎn)化為T(mén)reg，同時(shí)抑制CD4T細(xì)胞IFN-γ及TFN-α的分泌，還能抑制T細(xì)胞向Th1和Th17轉(zhuǎn)化，CD19CD24hiCD38hiB細(xì)胞亞群也可抑制CD4T細(xì)胞增生、細(xì)胞因子產(chǎn)生、Th1/TH17 分化、HIV-1 特異性CD8 T 細(xì)胞免疫應(yīng)答及幼CD40T 細(xì)胞向Foxp3Treg 及分泌IL-10Treg 分化。另外，Breg還可通過(guò)細(xì)胞-細(xì)胞的相互作用調(diào)控T細(xì)胞。如，Breg與T細(xì)胞通過(guò)CD40-CD40L表面分子結(jié)合，分泌IL-10抑制效應(yīng)性T細(xì)胞增生，從而抑制炎癥性腸病的發(fā)生[21]。在實(shí)驗(yàn)性變態(tài)性腦炎疾病模型(experiment allergic encephalomyelifis，EAE)小鼠中，Breg 通過(guò)與調(diào)節(jié)性T細(xì)胞的表面分子CD28作用，從而活化該細(xì)胞[22]。CD40缺陷小鼠會(huì)促成更嚴(yán)重EAE，體內(nèi)IL-10數(shù)量也降低，TH1 和Th17 數(shù)量則增多。最近研究也提示，IL-35 是一種具有免疫抑制功能的細(xì)胞因子，也可由Breg分泌。若EAE小鼠中缺乏IL-35，則病情不能得到有效控制[23]。另外，研究人員在感染曼氏血吸蟲(chóng)小鼠中發(fā)現(xiàn)Breg 可通過(guò)Fas-FasL 途徑誘導(dǎo)CD40T 細(xì)胞凋亡[21]。Breg分泌的IL-10能影響Th1/Th2動(dòng)態(tài)比例，當(dāng)平衡向Th1移動(dòng)時(shí)，在EAE小鼠中起保護(hù)作用。IL-10在慢性炎癥環(huán)境中抑制IL-1β的生成及信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)和轉(zhuǎn)錄激活因子(signal transductiong and activator of transcription-3，STAT3)的活化，下調(diào)炎性級(jí)聯(lián)反應(yīng)[21-22]。此外，有研究發(fā)現(xiàn)，還存在一種可分泌TGF-β的Breg，在免疫反應(yīng)中發(fā)揮負(fù)性調(diào)節(jié)作用[22]。OLKHANUD等[24]發(fā)現(xiàn)Breg 通過(guò)與腫瘤之間的CD40、CD154 的信號(hào)通路分泌TGF-β發(fā)揮負(fù)性調(diào)節(jié)作用，而該細(xì)胞被稱為腫瘤誘生細(xì)胞(tBreg)。TGF-β通過(guò)抑制NK 細(xì)胞、CD4、CD8T細(xì)胞，促進(jìn)調(diào)節(jié)性T細(xì)胞生成，減少免疫效應(yīng)細(xì)胞增殖及IFN-γ和TNF-α分泌，從而抑制腫瘤免疫[25-26]。有研究指出TGF-β還可促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的侵襲和轉(zhuǎn)移，主要通過(guò)特異激活STAT3 及PMEPA1 (上調(diào)前列腺跨膜蛋白)的腫瘤基因和血管生成基因及誘導(dǎo)CD4T細(xì)胞分化分泌FoxP3+的Treg實(shí)現(xiàn)的[27-29]。

5 調(diào)節(jié)性B細(xì)胞的調(diào)控機(jī)制

Toll 樣受體(Toll like receptor，TLR)是一種模式識(shí)別受體，對(duì)于機(jī)體識(shí)別外源危險(xiǎn)信號(hào)、激活天然免疫反應(yīng)非常重要。TLR不僅能傳遞促進(jìn)炎癥反應(yīng)和自身免疫反應(yīng)的信號(hào)，同時(shí)TLR還能傳遞一種保護(hù)信號(hào)[30]。體外實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，用TLR2和TLR4激動(dòng)劑刺激MZ-B細(xì)胞能導(dǎo)致細(xì)胞分泌IL-10的上升[31]，而且，在此過(guò)程中如有CD40的參與，會(huì)進(jìn)一步促進(jìn)IL-10的釋放。以上研究表明，經(jīng)TLR活化的B細(xì)胞通過(guò)表面的CD40與CD4+T細(xì)胞表面CD40L 的作用，促進(jìn)IL-10 的產(chǎn)生[30]。在體外，用脂多糖與離子霉素刺激能誘導(dǎo)B細(xì)胞分化產(chǎn)生IL-10。當(dāng)過(guò)繼輸注CD1dhiCD5+B10 細(xì)胞后，能減輕在CD19缺陷小鼠體內(nèi)誘導(dǎo)的超敏反應(yīng)[30]。此外，B細(xì)胞、TLR2、TLR4 及MyD88 的缺陷小鼠會(huì)發(fā)展成慢性EAE[31]。TLR2 和TLR4 在HBV 感染中亦發(fā)揮重要作用。多數(shù)研究認(rèn)為，TLR2和TLR4的激活可以促進(jìn)肝臟細(xì)胞中IFN-γ的分泌以達(dá)到抗病毒的目的。然而，TLR2 和TLR4 對(duì)調(diào)節(jié)性B 細(xì)胞的作用卻可能導(dǎo)致HBV 感 染 的 進(jìn) 展。 而TLR2 和TLR4 對(duì) 于CD19+CD24hiCD38hi B細(xì)胞是否具有調(diào)節(jié)作用尚不清楚。

6 調(diào)節(jié)性B細(xì)胞與腫瘤免疫

腫瘤免疫一般包括免疫清除、免疫平衡、免疫逃逸等三個(gè)過(guò)程[32]。有研究認(rèn)為Breg 通過(guò)分泌多種細(xì)胞因子發(fā)揮負(fù)性調(diào)控作用，從而促進(jìn)腫瘤的發(fā)生、發(fā)展[33-34]，也有研究認(rèn)為B 細(xì)胞通過(guò)分泌特異性抗體誘導(dǎo)CD40T細(xì)胞發(fā)揮抗腫瘤作用[35]。有研究指出，分泌IL-10的Breg也稱B10細(xì)胞，在宮頸癌、食管癌患者外周血中B10 細(xì)胞及IL-10 含量越高，癌癥分化程度越低，且與癌癥浸潤(rùn)程度成正相關(guān)[36-37]。INOUE 等[38]發(fā)現(xiàn)去除B 細(xì)胞后的小鼠抗腫瘤免疫反應(yīng)有所增強(qiáng)。OLKHANUAD 等[24]發(fā) 現(xiàn)tbreg 具 有Sata3 特 征，分泌TGF-β誘導(dǎo)Fox3Ptreg 促進(jìn)轉(zhuǎn)移。INOUE 等[38]指出，Breg 通過(guò)CD40-CD40L 途徑誘 導(dǎo)Breg 分泌IL-10，IL-10可減少M(fèi)HC Ⅱ類分子、TNF-α、顆粒酶、穿孔素等生成，抑制免疫效應(yīng)。IL-10 還可直接抑制DC 活性，促使CD4T 細(xì)胞分化為T(mén)reg，使腫瘤中Treg 增加，而Treg 分泌IL-10 再促進(jìn)腫瘤發(fā)生[39]。IL-10 增加骨髓來(lái)源的抑制性細(xì)胞(myeloid-derived suppressor cells，MDSC)數(shù)量、激活血管生成基因進(jìn)一步抑制T細(xì)胞、DC及NK細(xì)胞活性，促使腫瘤轉(zhuǎn)移[40]。

7 展望

已經(jīng)有研究證明，調(diào)節(jié)性B 細(xì)胞在自身免疫疾病中扮演重要角色，如系統(tǒng)性紅斑狼瘡、炎癥性疾腸病，在寄生蟲(chóng)感染及血液系統(tǒng)相關(guān)疾病及腫瘤免疫中也發(fā)揮著重要作用。但目前Breg 與腫瘤免疫的相關(guān)關(guān)系還存在許多問(wèn)題，如關(guān)于Breg 的分型仍不夠明確，不同的B淋巴細(xì)胞亞群在不同腫瘤發(fā)揮的作用是否有區(qū)別，調(diào)節(jié)性B細(xì)胞發(fā)揮調(diào)控作用的途徑復(fù)雜多樣等等。Breg與腫瘤相關(guān)關(guān)系的研究尚處于起始階段，相信隨著研究的不斷深入，以Breg為靶點(diǎn)的腫瘤免疫治療手段將會(huì)越來(lái)越多，越來(lái)越精細(xì)化。