中國醫(yī)科大學(xué)(110001) 孫 雪 曾 浪 孫 卓 李翠英

B細(xì)胞具有分泌抗體、抗原提呈、分泌免疫調(diào)節(jié)因子等作用，在免疫應(yīng)答中主要產(chǎn)生正向調(diào)節(jié)作用。近期研究發(fā)現(xiàn)，自身免疫病小鼠部分B細(xì)胞通過分泌白細(xì)胞介素10(IL-10)等細(xì)胞因子，發(fā)揮負(fù)向免疫調(diào)節(jié)作用。這部分B細(xì)胞已被命名為調(diào)節(jié)性B細(xì)胞，下面對調(diào)節(jié)性B細(xì)胞在慢性炎癥疾病和自身免疫疾病中的作用及可能機(jī)制做以初步探討。

1 調(diào)節(jié)性B細(xì)胞的發(fā)現(xiàn)與來源

1996 年，Wolf等人在實驗性自身免疫性腦脊髓膜炎(EAE)的模型中最先提出了B細(xì)胞的調(diào)節(jié)性功能的存在[1]。2006年，Mizoguchi等首次使用調(diào)節(jié)性B細(xì)胞的概念來定義這些具有負(fù)向調(diào)控功能的B細(xì)胞群體[2]。2008年，Yanaba等在研究小鼠 CHS模型時鑒定了一群CD5+CDldhi的調(diào)節(jié)性B細(xì)胞，發(fā)現(xiàn)這些B細(xì)胞能夠抑制T細(xì)胞增殖和T細(xì)胞介導(dǎo)的炎癥反應(yīng)并具有抗原特異性[3]。

B細(xì)胞主要分為B1和B2兩種細(xì)胞。B1細(xì)胞來源于胎兒的肝臟，在腸黏膜組織、胸膜和腹膜中表達(dá)豐富。B1細(xì)胞可分為Bla細(xì)胞(CD11b+CD5+)和B1b細(xì)胞(CD11b+CD5-)。B2細(xì)胞來源于骨髓，主要集中于次級淋巴器官。不成熟B2細(xì)胞(IgM+B220+)發(fā)育為過渡性B細(xì)胞1型(CD24hiCD21-B220+)和2型(CD24hiCD21+B220+)，過渡性B細(xì)胞2型可分化為脾臟與淋巴結(jié)中的成熟濾泡性B細(xì)胞(CD24+CD21+B220+)和脾臟中的邊緣性B細(xì)胞(MZB，CD1dhiCD21hi)。

調(diào)節(jié)性B細(xì)胞的來源和調(diào)控機(jī)制目前不是十分清楚。大部分研究者認(rèn)為，調(diào)節(jié)性B細(xì)胞來源于邊緣區(qū)B細(xì)胞(MZB)或B1細(xì)胞。Lenert和Watanabe等在系統(tǒng)性紅斑狼瘡(SLE)及CHS模型小鼠體內(nèi)實驗中認(rèn)為調(diào)節(jié)性B細(xì)胞是來源于脾的MZB細(xì)胞(CD21hiCD23-)[4-5]。而 Mizoguchi等在炎癥性腸炎模型中發(fā)現(xiàn)調(diào)節(jié)性B細(xì)胞與腸系膜淋巴結(jié)B細(xì)胞(CDl9+CD21hiCD24hiCD23+)的表型有類似之處[6]。另一種觀點(diǎn)認(rèn)為，正常小鼠體內(nèi)的B細(xì)胞可抑制樹突細(xì)胞對IL-10的分泌，同時抑制Thl細(xì)胞的活性。有研究認(rèn)為，B1細(xì)胞也可能是調(diào)節(jié)性B細(xì)胞的來源之一[7]。還有研究也認(rèn)為，脾 B10細(xì)胞與CD5+CD19+B220+Bla細(xì)胞表型有相似之處。因此，調(diào)節(jié)性B細(xì)胞很可能是上述兩種細(xì)胞的活化形式。

2 調(diào)節(jié)性B細(xì)胞的調(diào)節(jié)機(jī)制

調(diào)節(jié)性B細(xì)胞通過分泌細(xì)胞因子或者與其他細(xì)胞直接作用等發(fā)揮其調(diào)控機(jī)制。在炎癥疾病中，調(diào)節(jié)性B細(xì)胞通過分泌IL-10對機(jī)體起到保護(hù)性作用[8]。IL-10通過抑制T細(xì)胞向Th1細(xì)胞分化，影響樹突狀細(xì)胞分泌IL-6、IL-12等，從而影響Th1和Th17細(xì)胞的發(fā)育。調(diào)節(jié)性B細(xì)胞還能通過產(chǎn)生IL-10或CXCL13等降低專職APC的活性，抑制抗原提呈細(xì)胞的遷移。IL-10作為免疫抑制因子可以減少細(xì)胞表面MHCⅡ類分子的表達(dá)，下調(diào)腫瘤壞死因子從而抑制免疫應(yīng)答[9]。此外，調(diào)節(jié)性B細(xì)胞還通過直接抑制病理性細(xì)胞(自身反應(yīng)性T細(xì)胞和固有免疫細(xì)胞)的活性與功能進(jìn)而抑制炎癥。如果沒有這些調(diào)節(jié)性B細(xì)胞的限制，病理狀態(tài)下的T細(xì)胞很可能會過度擴(kuò)增，進(jìn)一步加重病情。

3 調(diào)節(jié)性B細(xì)胞在不同疾病中的調(diào)節(jié)作用及可能機(jī)制

3.1 調(diào)節(jié)性B細(xì)胞與炎癥性腸病(IBD)IBD是一種器官特異性自身免疫性疾病，主要特點(diǎn)是腸道炎癥和腸黏膜損傷。IBD的免疫功能紊亂包括兩方面:一是克羅恩病(CD)，由Th1途徑介導(dǎo)，由Tregs調(diào)節(jié);另一種是潰瘍性結(jié)腸炎(UC)，是由Th2途徑介導(dǎo)形成組織破壞和炎性病變。

Mizoguchi等在炎癥性腸炎模型小鼠體內(nèi)發(fā)現(xiàn)，CD1dhi的腸系膜淋巴結(jié)B細(xì)胞可通過產(chǎn)生IL-10抑制腸道炎癥反應(yīng)[6]。在免疫缺陷(SCID)小鼠體內(nèi)移植Gαi2KO(自發(fā)性IBD模型)小鼠的骨髓后會產(chǎn)生腸炎癥狀，并檢測到 MZP、MZ、B1a細(xì)胞大量減少，表明在Gαi2KO腸炎小鼠體內(nèi)MZ等發(fā)揮抑制效應(yīng)的 B細(xì)胞的減少是致病的重要原因[10]。在IBD中，存在于腸系膜淋巴結(jié)(MLN)中的MZB細(xì)胞多克隆非特異性地分化為固有性調(diào)節(jié)性B細(xì)胞，發(fā)揮調(diào)節(jié)功能，在細(xì)菌特異性的刺激下，通過CD28-B7之間的介導(dǎo)，可產(chǎn)生調(diào)節(jié)功能更加強(qiáng)大的特異性調(diào)節(jié)性 B 細(xì)胞[11]。

調(diào)節(jié)性B細(xì)胞在小鼠炎癥性腸病模型中表現(xiàn)出明顯的調(diào)節(jié)作用，用體外移植成熟調(diào)節(jié)性B細(xì)胞治療IBD，為以后炎癥性腸病的治療提供了新思路。

3.2 調(diào)節(jié)性B細(xì)胞與SLE SLE由B細(xì)胞介導(dǎo)的非器官特異性自身免疫性疾病，該病累及皮膚、關(guān)節(jié)、腎臟、肺、漿膜、心血管等多種器官系統(tǒng)，表現(xiàn)為B細(xì)胞過度增殖活化、產(chǎn)生多種自身抗體(以抗雙鏈DNA抗體最為主要)。SLE模型中小鼠體內(nèi)的調(diào)節(jié)性B細(xì)胞主要通過分泌IL-10來發(fā)揮免疫抑制作用，大量的IL-10可以抑制巨噬細(xì)胞和樹突狀細(xì)胞分泌IL-12，還可以抑制T細(xì)胞的增殖與分化，從而抑制正向免疫應(yīng)答[4]。Blair等將由競爭性抗CD40抗體活化后的T2調(diào)節(jié)性B細(xì)胞轉(zhuǎn)移到MRL/pr(SLE動物模型)小鼠體內(nèi)，發(fā)現(xiàn)T2調(diào)節(jié)性B細(xì)胞可明顯改善小鼠體內(nèi)的腎病，提高小鼠的存活率[12]。

有學(xué)者通過對B細(xì)胞活化因子(BAFF)與SLE聯(lián)系的探討，發(fā)現(xiàn)BAFF基因表達(dá)的異常增多可以導(dǎo)致SLE，血漿中高濃度的BAFF蛋白能刺激B細(xì)胞分泌IL-10，進(jìn)而參與免疫應(yīng)答[13]。還有學(xué)者在研究SLE患者血清IL-10變化后推測，由于SLE患者相關(guān)DNA的低甲基化導(dǎo)致IL-10超表達(dá)[14]，這為基因治療SLE提供更多可能性。

3.3 調(diào)節(jié)性B細(xì)胞與感染 調(diào)節(jié)性B細(xì)胞在寄生蟲感染過程中具有明顯的抗炎作用[15]。與野生型小鼠相比，曼氏血吸蟲感染的μMT小鼠顯示出更強(qiáng)烈的Thl型反應(yīng)。還有學(xué)者經(jīng)研究發(fā)現(xiàn)，小鼠受寄生蟲感染后，體內(nèi)產(chǎn)生的調(diào)節(jié)性B細(xì)胞可以減少過敏氣道炎癥的發(fā)生[16]。

微生物感染后，B淋巴細(xì)胞可以促進(jìn)機(jī)體的免疫應(yīng)答由Th1型向Th2型轉(zhuǎn)變，防止過強(qiáng)的Th1型反應(yīng)對自身的危害。多種 TLR激劑，如 TLR2、TLR4、TLR5、TLR7、TLR8 和 TLR9 可刺激調(diào)節(jié)性 B細(xì)胞產(chǎn)生IL-10，抑制DC和巨噬細(xì)胞產(chǎn)生lL-12和TNF-α等促炎細(xì)胞因子，從而避免幼年鼠產(chǎn)生過度炎癥[17]。在新生期小鼠天然免疫系統(tǒng)的研究中，有學(xué)者發(fā)現(xiàn)，體內(nèi)的Ⅰ型干擾素通過增強(qiáng)B細(xì)胞分泌IL-10來控制新生小鼠的炎癥反應(yīng)[18]。多種研究表明，在抗病毒抗細(xì)菌及寄生蟲感染的免疫應(yīng)答中均存在抑制機(jī)體免疫反應(yīng)的調(diào)節(jié)性B細(xì)胞。需要注意的是，在某些條件下，調(diào)節(jié)性B細(xì)胞可能通過抑制免疫反應(yīng)反而延長感染時間。因此，調(diào)節(jié)性B細(xì)胞在病毒、細(xì)菌等感染過程中的調(diào)節(jié)作用還有待進(jìn)一步研究。

3.4 調(diào)節(jié)性B細(xì)胞與腫瘤 調(diào)節(jié)性B細(xì)胞既可以通過抑制自身反應(yīng)性T細(xì)胞活性來抑制自身免疫反應(yīng)，又可以抑制細(xì)胞毒性T細(xì)胞的活性，進(jìn)而下調(diào)抗腫瘤免疫。將腫瘤細(xì)胞與B淋巴細(xì)胞缺陷小鼠的脾細(xì)胞共同培養(yǎng)，CD8+T淋巴細(xì)胞和NK細(xì)胞會分泌IFN-γ，但如果在共培養(yǎng)時加入純化的正常小鼠B淋巴細(xì)胞或者IL-10，則可以減少IFN-γ的分泌。腫瘤細(xì)胞可通過CD40/CD40L誘導(dǎo)調(diào)節(jié)性B細(xì)胞產(chǎn)生 IL-10，抑制 CD8+T細(xì)胞的活性，降低CD8+T細(xì)胞和NK細(xì)胞產(chǎn)生 IFN-γ的水平[19]。調(diào)節(jié)性B細(xì)胞還可以通過CD40/CD40L作用于T細(xì)胞，抑制T細(xì)胞增殖。

目前，B細(xì)胞消除可為腫瘤免疫治療提供有益作用，但如果能特異性去除調(diào)節(jié)性B細(xì)胞可能會更有效地增強(qiáng)抗腫瘤免疫反應(yīng)，在腫瘤治療方面有廣闊前景。

3.5 調(diào)節(jié)性B細(xì)胞與其他疾病 除上述疾病，調(diào)節(jié)性B細(xì)胞還參與很多其他自身免疫性疾病及炎癥性疾病過程，Matsushita等的細(xì)胞轉(zhuǎn)移實驗已經(jīng)證實，多發(fā)性硬化癥(MS)小鼠模型中分泌IL-10的調(diào)節(jié)性B細(xì)胞細(xì)胞對小鼠體內(nèi)的炎癥反應(yīng)具有抑制作用[20]。將膠原誘導(dǎo)性關(guān)節(jié)炎 (CIA)小鼠本身的調(diào)節(jié)性B細(xì)胞直接分選后輸入關(guān)節(jié)炎小鼠體內(nèi)能產(chǎn)生顯著的抑制疾病效果[21]。Rowe等發(fā)現(xiàn)，骨髓移植后的MT小鼠比野生型小鼠的早期移植物抗宿主反應(yīng)增強(qiáng)，說明調(diào)節(jié)性B細(xì)胞可在移植物抗宿主病(GVHD)中發(fā)揮負(fù)性調(diào)節(jié)功能[20]。同種疾病模型下，B細(xì)胞的缺失與長期免疫缺陷導(dǎo)致的后期感染有關(guān)，對后來的慢性GVHD影響較大[22]。

4 研究前景

調(diào)節(jié)性B細(xì)胞在自身免疫與慢性炎癥性疾病、抗微生物寄生蟲感染、抗腫瘤、移植排斥等方面均表現(xiàn)出一定的調(diào)節(jié)作用。目前臨床上主要通過藥物或者抗體以減少幼稚B細(xì)胞的數(shù)量來降低引起排斥反應(yīng)的抗體濃度，以達(dá)到抑制排斥反應(yīng)產(chǎn)生和誘導(dǎo)免疫耐受的目的[23]。利用調(diào)節(jié)性B細(xì)胞治療疾病，主要應(yīng)用于免疫過度狀態(tài)下，如過敏反應(yīng)、自身免疫病、移植物抗宿主病等。增強(qiáng)或抑制調(diào)節(jié)性B細(xì)胞的作用，可抑制有害的免疫反應(yīng)，增強(qiáng)機(jī)體免疫力。

雖然我們在調(diào)節(jié)性B細(xì)胞的研究中取得了很大的成就，但還有很多問題仍待解決，如調(diào)節(jié)性B細(xì)胞如何調(diào)控IL-10的生成?調(diào)節(jié)性B細(xì)胞發(fā)揮調(diào)控作用是否具有抗原特異性?調(diào)節(jié)性B細(xì)胞是否有特異的轉(zhuǎn)錄因子?類似的很多問題值得我們進(jìn)一步思考和探究。

目前對調(diào)節(jié)性B細(xì)胞的研究主要集中在動物模型方面，而且由于調(diào)節(jié)性B細(xì)胞的比例極小，其純化與擴(kuò)增是將來應(yīng)用方面的主要問題之一。通過對LSP或李斯特菌體內(nèi)感染的B細(xì)胞分泌細(xì)胞因子表達(dá)水平的分析，發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)錄因子Foxp1的表達(dá)抑制了B細(xì)胞炎性因子的分泌，但促進(jìn)B細(xì)胞對IL-10的分泌，對B細(xì)胞負(fù)向免疫調(diào)控功能具有潛在的誘導(dǎo)作用。由此可以考慮利用Foxp1或其它因子刺激調(diào)節(jié)性B細(xì)胞分泌IL-10或直接利用IL-10抑制免疫過度等相關(guān)疾病[24]。

隨著調(diào)節(jié)性B細(xì)胞研究的不斷深入，對其機(jī)制、特性、作用的不斷掌握，將使調(diào)節(jié)性B細(xì)胞在未來的臨床診治中起到重要的推動作用。

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