段瑞強(qiáng)，李長青

（河南省新鄭市人民醫(yī)院 兒科，河南 鄭州 451100）

肺炎支原體肺炎（mycoplasmal pneumoniae pneumonia，MPP）發(fā)病比較復(fù)雜，與肺泡上皮細(xì)胞損傷或免疫炎癥反應(yīng)存在一定的聯(lián)系，而NOD 樣受體蛋白 -3 （NOD-like receptor pyrin domain 3，NLRP3）炎癥小體是免疫炎癥反應(yīng)領(lǐng)域的研究熱點(diǎn)［1］。目前該病臨床上主要采用大環(huán)內(nèi)酯類抗生素治療，其中阿奇霉素為臨床大部分醫(yī)院首選抗生素，但單獨(dú)使用療程較長，癥狀改善緩慢［2］。而孟魯司特鈉為一種白三烯受體拮抗劑，能有效改善患兒的臨床癥狀［3］。本研究主要探討阿奇霉素聯(lián)合孟魯司特鈉對肺炎支原體肺炎兒童NLRP3炎癥小體通路的影響，為臨床治療提供參考，現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選擇2017 年1 月至2019 年 1 月在本院接受治療的108 例肺炎支原體肺炎患兒作為研究對象。均符合臨床診斷標(biāo)準(zhǔn)［4］，均無先天性免疫功能缺陷和腫瘤疾病，近期未使用過激素治療；排除精神障礙患兒以及其他感染的患兒。所有患兒按照隨機(jī)數(shù)字表法分成兩組，對照組54 例，男32 例，女 22 例；年齡 3～12 歲，平均（7.25±1.27）歲；病程 3～20 d，平均（9.24±4.23）d。觀察組 54 例，男 32 例，女 22 例；年齡 3～12 歲，平均（7.25±1.27）歲；病程 3～20 d，平均（9.24±4.23）d。兩組患兒的性別、年齡、病程等一般資料比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05），具有可比性。本研究經(jīng)院倫理委員會批準(zhǔn)，所有患兒家屬均簽署知情同意書。

1.2 方法

兩組均給予吸氧、化痰、止咳和抗感染治療，在此基礎(chǔ)上，對照組患兒采用注射用阿奇霉素（東北制藥集團(tuán)沈陽第一制藥有限公司，批號：H20000426）治療，10 mg/（kg·d），加 5% 葡萄糖125～250 mL 靜脈滴注，持續(xù)5 d。癥狀改善后，口服阿奇霉素干混懸劑（輝瑞制藥有限公司，國藥準(zhǔn)字：H10960112），10 mg/（kg·d），3 d 后，停用 4 d，持續(xù)治療3 周。在此基礎(chǔ)上，觀察組加用孟魯司特鈉（魯南貝特制藥有限公司，批號：H20080340），1 次/d，≥6 歲的患兒 5 mg/次，＜6 歲的患兒 4 mg/次，治療3 周。

1.3 臨床療效

①顯效：發(fā)熱咳嗽等完全緩解，胸部X 線片及血常規(guī)指標(biāo)完全正常；②有效：患兒癥狀、體征明顯改善，胸部X 線片及血常規(guī)指標(biāo)好轉(zhuǎn)；③無效：上述癥狀、體征及檢查指標(biāo)均無明顯好轉(zhuǎn)或惡化。總有效率=（顯效例數(shù)+有效例數(shù)）/總例數(shù)×100%。

1.4 樣本的采集及檢測

抽取空腹靜脈血10 mL 分裝乙二胺四乙酸抗凝管和非抗凝管?？鼓芨嗡乜鼓?，加入人淋巴細(xì)胞分離液，2 000 rpm 離心15 min，分離外周血單個核細(xì)胞 （peripheral blood mononuclear cell，PBMC）。非抗凝管3 500 rpm 離心15 min，分離血清，酶聯(lián)免疫吸附測定（enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA） 法測定白細(xì)胞介素-1β（interleukin-1β，IL-1β）、IL-18 水平。

1.5 實(shí)時定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)測定NLRP3、凋亡相關(guān)斑點(diǎn)樣蛋白、Caspase-1 mRNA水平

采用Trizol 試劑提取PBMC 總RNA，測定純度。按照逆轉(zhuǎn)錄試劑盒說明將總RNA 合成cDNA采用LightCycler 96 實(shí)時熒光定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（polymerase chain reaction，PCR） 儀 （Roche Diagnostics 公司，德國）進(jìn)行基因擴(kuò)增，引物序列由上海英駿公司提供。NLRP3 上游序列：5′-ACAGGCAATGCGTATCGTGA-3′，下游序列：5′-AAACCTAAACCAAAGGATCGGA-3′，產(chǎn)物 330 bp；ASC 上游序列：5′-TTACGGCTCGCACAGACAC-3′，下游序列：5′-TAGAGTGCTAGCAACGGCTTG-3′，產(chǎn) 物 141 bp； Caspase-1 上 游 序 列 ： 5′ -TCTAAAATCTCGCACGGGCA-3′，下游序列：5′-GACTCAACACAGCAACCAGC-3′，產(chǎn)物 182 bp；βactin 上游序列：5′-TCTTCTTCTGCAACTGGCG-3′，下 游 序 列 ： 5′-GACTGGGGTATCCAAGTGGG-3′，產(chǎn)物231 bp。采用相對定量2-△△Ct 法比較目的基因相對表達(dá)水平。

1.6 統(tǒng)計學(xué)方法

采用SPSS 17.0 軟件處理數(shù)據(jù)。計量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（）表示，組間比較采用t檢驗(yàn)；計數(shù)資料以百分率（%）表示，采用χ2檢驗(yàn)，臨床療效采用秩和檢驗(yàn)。P＜0.05 為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組臨床療效比較

觀察組總有效率為96.30%，優(yōu)于對照組的83.33%，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。見表1。

表1 兩組臨床療效比較

2.2 兩組IL-1β、IL-18水平比較

與治療前比較，兩組IL-1β、IL-18 水平均明顯下降，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。治療后觀察組IL-1β、IL-18 水平均明顯低于對照組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。見表2。

2.3 兩組NLRP3、ASC、Caspase-1 mRNA水平比較

與治療前比較，兩組NLRP3、凋亡相關(guān)斑點(diǎn)樣 蛋 白 （apoptosis-associated speck-like protein，ASC）、Caspase-1 水平均明顯下降，差異有統(tǒng)計學(xué)意義 （P＜0.05）。治療后觀察組 NLRP3、ASC、Caspase-1 水平均明顯低于對照組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。見表3。

表2 兩組治療前后IL-1β、IL-18 水平比較 （，pg/mL）

表2 兩組治療前后IL-1β、IL-18 水平比較 （，pg/mL）

注：?與治療前比較，P＜0.01。

組別對照組觀察組t值P值IL-1β IL-18治療后128.28±16.57?101.48±15.29?8.735 0.000例數(shù)54 54治療前6.52±1.26 6.49±1.35 0.119 0.905治療后3.49±1.07?2.68±1.02?4.026 0.000治療前172.46±18.59 174.58±17.95 0.603 0.548

表3 兩組治療前后NLRP3、ASC、Caspase-1 水平比較 （）

表3 兩組治療前后NLRP3、ASC、Caspase-1 水平比較 （）

注：?與治療前比較，P＜0.01。

組別對照組觀察組t值P值A(chǔ)SC治療后1.53±0.15?1.32±0.11?8.296 0.000例數(shù)54 54 NLRP3治療前2.02±0.18 2.05±0.16 0.915 0.362治療后1.78±0.15?1.59±0.13?5.959 0.000治療前1.72±0.17 1.75±0.18 0.890 0.375治療后1.52±0.13?1.38±0.14?5.385 0.000 Caspase-1治療前1.89±0.16 1.87±0.15 0.252 0.504

2.4 不良反應(yīng)

兩組患者治療后均未出現(xiàn)明顯的不良反應(yīng)。

3 討論

MPP 是兒童常見臨床疾病，臨床上主要采用大環(huán)內(nèi)酯類抗生素治療，最為廣泛的為阿奇霉素，該藥化學(xué)結(jié)構(gòu)穩(wěn)定，抗菌效果明顯，無明顯的副作用［5］。但單獨(dú)使用阿奇霉素對患兒的炎癥反應(yīng)以及免疫機(jī)能的修復(fù)效果不明顯。而孟魯司特鈉可以拮抗白三烯受體，降低白三烯水平，并達(dá)到緩解機(jī)體的炎癥反應(yīng)，緩解患兒的臨床癥狀。本研究中，觀察組采用阿奇霉素聯(lián)合孟魯司特鈉治療肺炎支原體肺炎，臨床療效明顯優(yōu)于對照組，與既往研究結(jié)果一致［6］。

有文獻(xiàn)顯示，MPP 的發(fā)生與細(xì)胞的炎性反應(yīng)存在一定的聯(lián)系，當(dāng)MPP 發(fā)生時易誘發(fā)全身性炎性反應(yīng)，并對機(jī)體造成損傷，促進(jìn)機(jī)體免疫細(xì)胞分泌并釋放多種炎癥因子，加重機(jī)體的損傷［7］。IL-1β 來源于單核巨噬細(xì)胞，為一種前炎性因子，而激活的IL-1β 能誘導(dǎo)其他炎癥因子的表達(dá)，協(xié)同其他因子共同參與炎癥的發(fā)生和進(jìn)展［8］。而IL-18來源于單核巨噬細(xì)胞和樹突狀細(xì)胞，IL-18 前體在IL-1β 的作用下，形成有活性的IL-18，參與MPP病理過程［9］。本研究中，患兒接受相應(yīng)的治療后，觀察組患兒的IL-1β、IL-18 下降幅度明顯優(yōu)于對照組，提示阿奇霉素聯(lián)合孟魯司特鈉能有效調(diào)節(jié)炎癥因子水平，發(fā)揮抗感染效果。

有研究顯示，MPP 的發(fā)生與過量的宿主免疫反應(yīng)有關(guān)，固有免疫可以有效抵御病原微生物入侵，并通過活化下游信號通路，誘發(fā)免疫應(yīng)答和炎癥反應(yīng)［10］。NLRP3 為 NOD 樣受體家族成員，易被活性氧等因素活化。因此，MPP 發(fā)生后，氧自由基水平的增加是激活NLRP3 的重要途徑，并募集pro-caspase-1 和ASC 共同組建大分子蛋白復(fù)合體，即NLRP3 炎癥小體。NLRP3 炎癥小體被活化后，可調(diào)節(jié)Caspase-1 活化，并剪切IL-1β 前體，激活I(lǐng)L-1β 成熟和分泌，IL-1β 作為促炎因子誘導(dǎo)大量炎癥因子釋放［11］。本研究中，觀察組NLRP3、ASC、Caspase-1 水平明顯低于對照組，說明阿奇霉素聯(lián)合孟魯司特鈉對肺炎支原體肺炎兒童具有保護(hù)作用。

綜上所述，阿奇霉素聯(lián)合孟魯司特鈉治療兒童肺炎支原體肺炎臨床效果明顯，其機(jī)制可能與其調(diào)節(jié)者NLRP3、ASC、Caspase-1 炎性體基因的表達(dá)有關(guān)，但具體機(jī)制有待進(jìn)一步研究。