余文武，鄭曉林，劉旭川，李志祥，柴俊，張以芳

(云南農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)院，云南 昆明 650201)

豬瘟和藍(lán)耳病是嚴(yán)重危害我國養(yǎng)豬業(yè)的主要傳染病，給我國養(yǎng)豬行業(yè)造成了巨大的經(jīng)濟(jì)損失，并被列為一類動(dòng)物疫病，一直是我國重點(diǎn)防控的動(dòng)物疫病[1]。隨著我國養(yǎng)豬業(yè)不斷的規(guī)?；l(fā)展，已研發(fā)了多種豬瘟和藍(lán)耳病疫苗[2]。目前生產(chǎn)中使用的豬瘟疫苗主要有豬瘟組織凍干疫苗和豬瘟細(xì)胞凍干疫苗；豬藍(lán)耳病疫苗有弱毒疫苗(CH-1R 株、R98 株、JXAI-R 株、 ATCCVR-2332株)和滅活疫苗(CH-1R株、NVDC-JXAR株)[3]。疫苗的使用使豬瘟等主要疫病的發(fā)病率和死亡率得到下降或控制，但部分豬場由于疫苗使用或免疫程序不當(dāng)，仍然存在豬瘟和豬藍(lán)耳病流行的風(fēng)險(xiǎn)[4]。藍(lán)耳病疫苗毒株的多樣性，也讓很多養(yǎng)豬企業(yè)對于藍(lán)耳疫苗的選擇產(chǎn)生了困惑，因此，準(zhǔn)確掌握疫病的流行動(dòng)態(tài)、免疫抗體有計(jì)劃的監(jiān)測，了解豬場免疫狀態(tài)，對降低傳染病風(fēng)險(xiǎn)有重要意義[5]。

1 材料與方法

1.1 樣品來源

2019年4月，無菌采集云南某規(guī)?；i場公豬、后備母豬、懷孕前期、懷孕中期、懷孕后期、哺乳期母豬、仔豬至出欄各階段豬血液樣品。公豬全部采樣，其他組別或年齡段豬各采5～6頭，共計(jì)采樣64份，無菌靜脈采血，分離血清。采樣豬均進(jìn)行過豬瘟疫苗免疫，豬藍(lán)耳疫苗免疫記錄不祥。

1.2 主要試劑

豬繁殖與呼吸障礙綜合征抗體ELISA檢測試劑盒為美國愛德士(IDEXX)生物科技有限公司產(chǎn)品，豬瘟病毒抗體檢測試劑盒為荷蘭百測(BioChek)生物制品有限公司產(chǎn)品。

1.3 主要儀器與材料

酶標(biāo)儀、恒溫箱、離心機(jī)、洗瓶或洗板機(jī)、單道和多道微量移液槍、移液槍槍頭、量筒、吸水紙、封條、蒸餾水或去離子水等。

1.4 豬藍(lán)耳抗體檢測方法及結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn)

豬繁殖與呼吸障礙綜合征抗體檢測按IDEXX試劑盒操作說明書進(jìn)行。

結(jié)果有效性判定：為保證試驗(yàn)結(jié)果準(zhǔn)確有效，陽性對照吸光度的平均值-陰性對照吸光度的平均值≥0.15,陰性對照吸光度的平均值≤0.15。

結(jié)果判定：S/P=(樣品吸光度值-陽性對照吸光度的平均值)/(陽性對照吸光度的平均值-陰性對照吸光度的平均值)， S/P≥0.40為陽性，S/P<0.40為陰性。

1.5 豬瘟抗體檢測方法及結(jié)果判定

豬瘟病毒抗體檢測按BioChek公司試劑盒操作說明書進(jìn)行。

結(jié)果有效性判定：為保證試驗(yàn)結(jié)果準(zhǔn)確有效，陰性對照吸光度值的平均值<0.35。

陽性對照的平均值-陰性對照的平均值>0.15。

結(jié)果判定：S/P=(樣品吸光度值-陽性對照吸光度的平均值)/(陽性對照吸光度的平均值-陰性對照吸光度的平均值), S/P≥0.500為陽性, S/P≤0.499為陰性。

2 結(jié)果與討論

2.1 豬瘟抗體的檢測結(jié)果

由表1、圖1及圖2可以看到豬瘟抗體檢測結(jié)果，豬瘟抗體總陽性率平均為64.06%，但各組別存在較大差異，其中公豬、后備母豬、懷孕前期、懷孕中期、懷孕后期和哺乳期母豬抗體陽性率均為100%，說明這些組別的抗體較好，對豬瘟野毒感染有較強(qiáng)抵抗力。

檢測30頭仔豬、保育豬及育肥豬的三組樣品抗體陽性率為23.33%，其中0～15d、16～30d、31～45d、46～75d、76～100d、100d至出欄豬的陽性率分別為60%、40%、0、0、20%、0(3/5、2/5、0/5、0/5、1/5、0/5)，豬抗體陽性率均在80%以下，說明這些組別的抗體較低，比較容易出現(xiàn)豬瘟野毒感染。

表1 不同組別或日齡階段的豬瘟抗體檢測結(jié)果

圖1不同組別或日齡階段豬的豬瘟病毒抗體S/P值

圖2 不同組別或日齡階段的豬在接種豬瘟疫苗后的抗體陽性率

2.2 豬藍(lán)耳抗體檢測結(jié)果

由表2、圖3及圖4可以看到豬藍(lán)耳抗體的檢測結(jié)果，檢測豬藍(lán)耳抗體總陽性率為54.69%，各組別存在較大差異，其中公豬、后備母豬、懷孕前期、懷孕中期、懷孕后期和哺乳期母豬抗體陽性率分別為50%、16.67%、0、80%、80%、40%(4/8、1/6、0/5、4/5、4/5、2/5)；檢測30頭仔豬、保育豬及育肥豬的抗體陽性率為66.67%，其中0～15d、16～30d、31～45d、46～75d、76～100d、100d至出欄豬的陽性率分別為60%、40%、40%、100%、100%、60%(3/5、2/5、2/5、5/5、5/5、3/5)。

除46～75d、76～100d兩組外，其他各組抗體陽性率均在80%以下，如果本豬場注射過豬藍(lán)耳疫苗，說明該豬場藍(lán)耳抗體保護(hù)率低；如果未注射過疫苗，說明是野毒感染抗體，該豬場已經(jīng)存在豬藍(lán)耳野毒感染，淘汰陽性公豬[6]。

表2 不同日齡階段的豬藍(lán)耳病抗體檢測結(jié)果

圖3不同日齡階段豬的豬藍(lán)耳病病毒抗體S/P值

圖4 不同日齡階段的豬在接種豬藍(lán)耳病疫苗后的抗體陽性率

以上通過統(tǒng)計(jì)計(jì)算得到不同日齡階段豬的豬瘟抗體或豬藍(lán)耳抗體S/P值，可以作為判定豬瘟或藍(lán)耳抗體的陽性率的依據(jù)，并直觀清晰的了解抗體的離散度[7]。統(tǒng)計(jì)柱狀圖可以直觀了解每頭豬檢測樣品抗體的高低。