解金輝， 種靖慧， 黃 嫻， 王 維， 董 崢， 李彤彤， 李立新， 吳麗娜

(天津市血液中心， 天津 300110)

輸注紅細(xì)胞是治療貧血的有效手段，在輸血過(guò)程中，由于受血者與獻(xiàn)血者具有不同的紅細(xì)胞抗原，將有可能發(fā)生紅細(xì)胞同種免疫。當(dāng)獻(xiàn)血者的紅細(xì)胞進(jìn)入受血者血液循環(huán)中，免疫系統(tǒng)會(huì)識(shí)別外來(lái)抗原并產(chǎn)生免疫應(yīng)答，從而產(chǎn)生針對(duì)外來(lái)抗原的抗體。在妊娠過(guò)程中，胎兒紅細(xì)胞也能刺激母體免疫系統(tǒng)，使之產(chǎn)生同種抗體。如果血液中存在紅細(xì)胞同種抗體，再次輸入含該抗原的紅細(xì)胞將會(huì)被患者體內(nèi)的抗體破壞，發(fā)生溶血性輸血反應(yīng)。為保證輸血安全有效，在輸血前需要對(duì)患者血漿進(jìn)行紅細(xì)胞不規(guī)則抗體篩選試驗(yàn)，如果檢測(cè)到同種抗體，需要選擇對(duì)應(yīng)抗原陰性的血液進(jìn)行交叉配血，避免發(fā)生輸血不良反應(yīng)。同時(shí)，還可以提示臨床醫(yī)生尋找該患者所需血液需要時(shí)間，尤其是當(dāng)患者血漿中含有針對(duì)高頻抗原的抗體時(shí)，如抗-Jk3[1],尋找相配合的血液非常困難。本文通過(guò)對(duì)紅細(xì)胞不規(guī)則抗體篩選陽(yáng)性的標(biāo)本進(jìn)行檢測(cè)，分析紅細(xì)胞血型抗體在本地區(qū)患者中的分布情況，以減少輸血不良反應(yīng)和延遲輸血情況發(fā)生，提高輸血的安全性和有效性。

1 對(duì)象與方法

1.1 研究對(duì)象

天津市各醫(yī)院在患者輸血前檢測(cè)中進(jìn)行紅細(xì)胞抗體篩選時(shí)，將檢測(cè)結(jié)果為陽(yáng)性的全血標(biāo)本送至本中心實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行檢測(cè)，2011年8月至2018年12月，共送檢2623份患者標(biāo)本?；颊吣挲g1歲至91歲，其中815份為男性患者，1808份為女性患者，多數(shù)患者將輸血作為常規(guī)的治療手段。為預(yù)防胎兒發(fā)生新生兒溶血病而注射IgG抗-D的RhD陰性孕婦不包括在內(nèi)。

1.2 抗體篩查與鑒定

血液標(biāo)本經(jīng)過(guò)3 000 r/min離心3 min后，將紅細(xì)胞與血漿分離，紅細(xì)胞用來(lái)檢測(cè)血型，血漿用來(lái)檢測(cè)不規(guī)則抗體。利用試管法檢測(cè)紅細(xì)胞ABO及Rh(D)血型。抗人球蛋白微柱凝膠卡方法和鹽水試管法同時(shí)進(jìn)行3個(gè)細(xì)胞( Screening panel 123, Sanquin, 荷蘭；Dia-Cell I-II-III Asia，BIO-RAD，瑞士)的抗體篩選試驗(yàn)，加入抗篩細(xì)胞和患者血漿的抗人球蛋白凝膠卡(LISS/Coombs ID-Card, Diamed，瑞士)于37℃孵育15 min后,1 030 r/min離心10 min。如果抗體篩選結(jié)果陽(yáng)性，隨后用含有16個(gè)細(xì)胞( Makropanel 16, Sanquin，荷蘭)的譜細(xì)胞進(jìn)行抗體鑒定試驗(yàn)。如果確定抗體特異性，檢測(cè)患者該抗體對(duì)應(yīng)的紅細(xì)胞抗原(抗血清購(gòu)自德國(guó)CE-IMMUNODIAGNOSTIKA和荷蘭Sanquin，抗-Mur和抗-Tja來(lái)源于上海血液中心饋贈(zèng))。

2 結(jié)果

所有2623份標(biāo)本的紅細(xì)胞不規(guī)則抗體篩選結(jié)果均為陽(yáng)性，進(jìn)行抗體鑒定結(jié)果顯示，509例為自身抗體，而且沒(méi)有檢出同種抗體。其他標(biāo)本中，檢出2139個(gè)同種抗體，還有96名患者的抗體特異性未確定，共計(jì)2744個(gè)紅細(xì)胞同種抗體。

在這些鑒定出來(lái)的同種抗體中，最常見(jiàn)的抗體是Rh系統(tǒng)抗體，占總數(shù)的54.7%(1502/2139)(表1)，其中抗-E是檢出最多的同種抗體， 達(dá)到730個(gè)(單獨(dú)出現(xiàn)或者和其他抗體聯(lián)合出現(xiàn)，以下同)，抗-c 239個(gè)，抗-e 188個(gè)，抗-C 210個(gè)，抗-D 135個(gè)。MNS系統(tǒng)檢出312個(gè)，Lewis系統(tǒng)檢出169個(gè)，Kidd系統(tǒng)檢出62個(gè)，P系統(tǒng)檢出21個(gè)，Duffy系統(tǒng)檢出26個(gè)，Diego系統(tǒng)檢出45個(gè)。

在檢出同種抗體的血液中，大多數(shù)只產(chǎn)生一個(gè)抗體，在含有2個(gè)或多個(gè)抗體的患者中，最常見(jiàn)的是抗-c與抗-E同時(shí)出現(xiàn)，本次統(tǒng)計(jì)的2623名患者中，在211人中同時(shí)檢出抗-c和抗-E。

本次統(tǒng)計(jì)中，檢出Kell系統(tǒng)中抗-Ku和抗-K各一例，這兩種抗體在中國(guó)人中相對(duì)較少。

Tab.1Frequency of alloantibodies according to blood group system

Antibody typeSubtypePercentage of totalTotal(%)Rh systemanti-C7.7%(210)anti-c8.7%(239)anti-D4.9%(135)anti-E26.2%(730)anti-e6.9%(188)54.7MNS systemanti-M9.4%(259)anti-N0.5%(13)anti-S0.9%(26)anti-Mur0.5%(14)11.4Lewis systemanti-Lea4.9%(133)anti-Leb1.3%(36)6.2Duffy systemanti-Fya0.1%(4)anti-Fyb0.8%(22)1.0Kidd systemanti-Jka1.8%(48)anti-Jkb0.5%(14)2.3P systemanti-P10.7%(19)anti-P1PPk0.1%(2)0.8Kell systemanti-Ku1anti-K10.1Diego systemanti-Dia0.1%(4)anti-Wra1.5%(41)1.6Autoantibody18.6%(509)18.6Unidentified3.5%(96)3.5

3 討論

本文中，女性紅細(xì)胞抗體篩選陽(yáng)性人數(shù)明顯高于男性，因?yàn)槿焉锸窌?huì)對(duì)機(jī)體有初次刺激，再次妊娠或者輸血將更容易產(chǎn)生紅細(xì)胞不規(guī)則抗體。孕婦血液中含有紅細(xì)胞抗體將導(dǎo)致新生兒溶血病的發(fā)生，ABO血型系統(tǒng)的溶血病最常見(jiàn)[2]，但是其他血型系統(tǒng)的溶血病會(huì)更加嚴(yán)重，所以有輸血史或者妊娠史的女性，再次懷孕時(shí)，應(yīng)該進(jìn)行紅細(xì)胞不規(guī)則抗體的檢測(cè)，及時(shí)應(yīng)對(duì)因此發(fā)生的ABO血型系統(tǒng)之外的新生兒溶血病。

在本研究中，最常見(jiàn)的同種抗體是抗-E, 其次是抗-M，抗-c，抗-C，抗e，抗-D 和抗-Lea檢出數(shù)量相近。該結(jié)果同中國(guó)其他研究小組和馬來(lái)西亞的研究結(jié)果類似[3,4]。在高加索人，黑人和亞洲蒙古人中[5-8]，抗E是最常見(jiàn)的。在含有抗-E的患者準(zhǔn)備輸血時(shí)，如果輸注的紅細(xì)胞Rh血型與患者一樣，而不僅僅是ee表型，那么抗-c產(chǎn)生的幾率就很低了。Vichinsky EP等[9]統(tǒng)計(jì)發(fā)現(xiàn)，當(dāng)輸注的紅細(xì)胞選擇E，C，K抗原與患者相同時(shí)，患者同種免疫率將會(huì)從3%下降至0.5%，這也給輸血前檢測(cè)的工作人員提出了一個(gè)問(wèn)題，在選擇血液時(shí)，是E、C抗原與患者相同，還是僅僅避開(kāi)含有抗體對(duì)應(yīng)的抗原。

Mur抗原是GYPA基因與GYPB基因雜交后的新基因表達(dá)的蛋白產(chǎn)物，該抗原在歐洲及非洲人群中屬于稀有的抗原，而在東南亞人群中相對(duì)常見(jiàn)，中國(guó)人群中的Mur抗原分布頻率能達(dá)到7%，在中國(guó)南方地區(qū)該抗體也是比較常見(jiàn)[10]，所以在南方地區(qū)進(jìn)行抗體篩選試驗(yàn)所用到的紅細(xì)胞最好含有Mur抗原，以避免漏檢抗-Mur抗體。如果選用的抗體篩選細(xì)胞不含有Mur抗原，將會(huì)漏檢該抗體。在本文中鑒定出14例抗-Mur抗體，因?yàn)榍捌谑褂玫牟灰?guī)則抗體篩選細(xì)胞中不包括Mur抗原，可能有Mur抗體未檢測(cè)到，所以實(shí)際Mur抗體比例會(huì)比本文中得到的比例高。

紅細(xì)胞的自身抗體可能會(huì)縮短紅細(xì)胞的存活壽命[11],在本文中，有509例患者含有自身抗體，其與獻(xiàn)血者紅細(xì)胞在微柱凝膠卡中的反應(yīng)強(qiáng)度從弱凝集至3+，這種反應(yīng)強(qiáng)度弱于或者等同于自身對(duì)照的反應(yīng)強(qiáng)度。在檢測(cè)過(guò)程中需要注意的是，強(qiáng)的自身抗體有遮蔽作用，可能會(huì)影響同種抗體的檢出[12]，從而發(fā)生溶血性輸血反應(yīng)。此外，還有96例抗體特異性未能確定，可能由于患者服用藥物所致，也可能是譜細(xì)胞中有的抗原未作標(biāo)注，需要進(jìn)行后續(xù)試驗(yàn)。

高加索人與亞洲蒙古人間抗體特異性最大的不同之處在于抗-K，該抗體是臨床很重要的同種抗體，在高加索人中很常見(jiàn)[4,13],但在中國(guó)人中極少檢出。本文中檢出兩例Kell系統(tǒng)的抗體，分別是抗-Ku和抗-K。K抗原陽(yáng)性血型在亞洲人中存在很少，K抗原陰性的人輸注K抗原陽(yáng)性血液的幾率很低，故產(chǎn)生抗-K抗體的人很少，這也是抗-K抗體在我國(guó)檢出少的原因。

總之，在本實(shí)驗(yàn)室鑒定的紅細(xì)胞不規(guī)則抗體中，抗-E，抗-c，抗-M最為常見(jiàn)，如果篩選細(xì)胞中含有Mur抗原，能夠避免抗-Mur的漏檢。在輸血前檢測(cè)中，當(dāng)患者檢出不規(guī)則抗體，應(yīng)提前進(jìn)行備血，避免由此導(dǎo)致的延遲輸血，影響治療效果。