孟潔, 李紅雨, 趙書君, 石鴻玉, 付晗

(鄭州大學 第三附屬醫(yī)院 婦科腫瘤病區(qū)， 河南 鄭州 450000)

子宮內膜癌是最常見的女性生殖系統(tǒng)惡性腫瘤之一，在我國的發(fā)病率呈逐年上升趨勢[1].子宮內膜樣腺癌是子宮內膜癌中發(fā)病率最高的一種類型,預后較好，但仍有部分晚期患者的手術、內分泌、放化療等治療效果欠佳，亟待尋找新的治療靶點[2].趨化因子配體1[chemokine (C-X-C motif) ligand 1，CXCL1]，也稱為生長調節(jié)因子α，是一種分泌型生長因子，在多種腫瘤中表達上調，有研究發(fā)現CXCL1能夠促進腫瘤細胞的增殖及侵襲，還能夠趨化腫瘤相關免疫細胞參與構建腫瘤微環(huán)境，進而促進腫瘤的發(fā)展[3].關于CXCL1在子宮內膜樣腺癌中的表達及作用機制，目前少有報道.本研究通過檢測子宮內膜樣腺癌和子宮內膜非典型增生患者的子宮內膜組織及正常增生期子宮內膜組織中CXCL1的表達，并從細胞水平驗證其功能，探討CXCL1與子宮內膜樣腺癌增殖侵襲的相關性，期望為腫瘤靶向治療提供一個可能思路[4].

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 組織標本

2016年9月至2018年12月于我院行手術治療經術后病理證實為子宮內膜樣腺癌患者的子宮內膜組織，一部分(50例)福爾馬林固定，一部分(30例)-80 ℃保存，同時于手術標本取出10 min內收集距腫瘤邊緣2 cm范圍外的體積為3 mm×3 mm×3 mm的內膜組織(病理證實為正常子宮內膜組織)作為對照，放置-80 ℃保存，后續(xù)用于QRT-PCR檢測.同期借閱我院病理科診斷為子宮內膜非典型增生患者的子宮內膜組織及正常增生期子宮內膜組織的石蠟包埋標本，各40例.入選人群已排除應用激素類藥物、合并有自身免疫性疾病、其他惡性腫瘤者、或經放化療者.該實驗已通過我院倫理委員會，并與患者簽署書面或口頭知情同意書.

1.1.2 細胞

人子宮內膜高分化腺癌細胞株Ishikawa細胞購自中科院協(xié)和細胞庫.

1.1.3 主要試劑及器材

高糖DMEM培養(yǎng)基購自美國Hyclone公司，胎牛血清購自以色列BI公司，CCK-8試劑盒購自日本同仁公司，AnnexinⅤ-FITC/PI凋亡檢測試劑盒購及基質膠均購自美國BD公司，transwell小室購自美國Corning公司，逆轉錄試劑盒及SYBR熒光定量檢測試劑盒購自日本TOYOBO公司，QRT-PCR引物購自北京擎科有限公司，兔抗人多克隆抗體CXCL1、兔抗人單克隆抗體MMP9及Caspase-3、CXCL1 ELISA試劑盒購自武漢三鷹集團，兔抗人單克隆抗體pNF-κB p65及β-actin購自美國Cell Signaling Technology公司，DAB免疫組化試劑盒購自北京康為世紀有限公司，CXCL1干擾siRNA購自上海吉瑪有限公司，轉染試劑lipofectamine3000及BCA蛋白定量試劑盒購自美國Thermo Fisher Scientific集團.倒置熒光顯微鏡IX71(IX2-1LL100)購自奧林巴斯醫(yī)療株式會社，雙色紅外激光掃描成像系統(tǒng)(Odyssey CIX)購自美國LI-CORinc公司，酶標儀(Thermo-MK3)購自美國ThermoFisher公司.

1.2 方法

1.2.1 細胞培養(yǎng)

Ishikawa細胞用含體積分數為10%胎牛血清的高糖DMEM培養(yǎng)基(以下簡稱“完全培養(yǎng)基”)，置于37 ℃，體積分數為5% CO2培養(yǎng)箱中，當融合度達70%～90%時，進行胰蛋白酶消化傳代或者計數鋪板.

1.2.2 免疫組織化學染色法(IHC)檢測CXCL1蛋白的表達

組織固定及石蠟包埋切片，依次脫蠟，滅活內源性酶，熱修復抗原，血清封閉，一抗(V一抗∶V抗體稀釋液=1∶200)孵育，4 ℃過夜，洗滌，二抗孵育30 min后進行DAB染色，復染，封片，顯微鏡下觀察.CXCL1主要定位于胞漿，少數胞膜可見.結果采用半定量積分法判定：隨機選取5個400倍高倍視野，在每個高倍視野下計數100個細胞(胞膜染色或胞膜、胞漿同時染色為陽性細胞)，無著色記錄為0分，淡黃色記錄為1分，棕黃色記錄為2分，棕褐色記錄為3分，記錄5個視野的平均數：0～5%為0分，6%～25%為1分，26%～50%為2分；51%～75%為3分，>75%為4分，染色強度與陽性細胞百分比得分乘積小于4為陰性，≥4為陽性.由兩位高年資病理醫(yī)師通過獨立雙盲法讀片評定免疫組化結果.

1.2.3 QRT-PCR法檢測組織及細胞中CXCL1mRNA的表達

提取RNA逆轉錄合成cDNA，使用SYBR預混式熒光定量試劑盒，總反應體系為20 μL,模板cDNA質量濃度為0.5 ng/μL. CXCL1引物序列為Forward：5′-CCCAAACCGAAGTCATAGCC-3′，Reverse：5′-ATC-CGCCAGCCTCTATCACA-3′；內參GAPDH序列為Forward: 5′-AGAACGGGAAGCTT-GTCATC-3′，Reverse:5′-CATCGCCCCACTTGATT-TTG-3′. 反應條件為：95℃預變性30 s，95℃變性15 s，65℃退火15 s，72 °C延伸45 s，進行40個循環(huán).系統(tǒng)自動檢測熒光，得出Ct值(循環(huán)閾值).運用2-ΔΔCt法計算CXCL1的表達情況.

1.2.4 siRNA技術干擾細胞CXCL1基因的表達

按照lipofectamine3000說明書操作.用熒光標記的陰性對照siRNA轉染細胞株，在熒光顯微鏡下檢測轉染效率.轉染效率大于70%后，分別轉染三條陽性siRNA，即siCXCL1-249,siCXCL1-322和siCXCL1-376.48 h后使用QRT-PCR檢測CXCL1的mRNA表達，72 h后ELISA法檢測上清液中CXCL1的蛋白表達，選擇干擾效率最佳的一條siRNA進行后續(xù)細胞實驗.

1.2.5 CCK-8實驗檢測細胞增殖

將細胞按照5×103/孔的密度接種于96孔板中，加入100 μL培養(yǎng)液，24 h后，CXCL1沉默組轉染干擾效率最佳的siRNA,NC(normal control)組轉染陰性對照RNA，于轉染后0、48、72 h加入CCK-8試劑10 μL，37 ℃細胞培養(yǎng)箱放置1.5 h，檢測450 nm處的光密度.

1.2.6 流式細胞儀Annexin Ⅴ-FITC/PI法檢測細胞凋亡率

將細胞按照1×105/孔接的密度種于6孔板上，完全培養(yǎng)基培養(yǎng)24 h后，CXCL1沉默組轉染篩選的干擾效率最佳的siRNA，NC組轉染陰性對照siRNA，培養(yǎng)48 h后，用不含EDTA的胰酶消化，收集細胞，以1 000 r/min離心5 min，PBS清洗細胞2 次，收集(1～5)×105個細胞加入binding buffer體積400 μL置冰浴,每管內加入FITC-Ⅴ體積5 μL，于流式細胞儀檢測前加入PI體積5 μL，binding buffer體積100 μL混勻，避光孵育15 min，加入PI后1 h內用流式細胞儀檢測.

1.2.7 細胞劃痕實驗檢測細胞遷移能力

將細胞按照3×105/孔的密度接種于6孔板中，加入完全培養(yǎng)基2 mL,24 h后，CXCL1沉默組轉染干擾效率最佳的siRNA,NC組轉染陰性對照RNA，轉染6 h后用10 μL槍頭參照直尺在6孔板底部劃線，間隔1 cm劃兩條直線，再垂直它們劃兩條間隔1 cm的直線，PBS沖洗3次，加入無血清培養(yǎng)基，分別于0、48、72 h拍照記錄.劃痕寬度代表細胞的遷移能力，通過Image J劃線法測量，細胞的遷移能力用遷移率表示.遷移率=(0 h間隙寬度-觀察時間點間隙寬度)/0 h間隙寬度.

1.2.8 transwell實驗檢測細胞侵襲能力

用Matrigel膠1∶4稀釋后取50 μL置于transwell小室上室，37 ℃放置5 h，吸棄多余液體，加入100 μL無血清培養(yǎng)基水化基質膠，37 ℃，30 min后吸棄培養(yǎng)液.收集轉染48 h后的細胞，PBS清洗3次，無血清培養(yǎng)基重懸細胞，調整細胞密度為1×105/mL，吸取200 μL細胞混懸液置于上室，下室內加入600 μL體積分數為20%胎牛血清的培養(yǎng)基，37 ℃培養(yǎng)72 h后，用質量分數為4%的多聚甲醛，固定30 min，清洗后4 ℃風干，用質量分數為0.1%的結晶紫染色后顯微鏡下觀察，取6個視野平均細胞數，代表腫瘤細胞的侵襲能力.

1.2.9 Western Blot檢測蛋白表達

將細胞按照1×105/孔接種于6孔板上，完全培養(yǎng)基培養(yǎng)24 h后，CXCL1沉默組轉染篩選的干擾效率最佳的siRNA，NC組轉染陰性對照siRNA，繼續(xù)培養(yǎng)72 h后，棄去原培養(yǎng)基，用預冷PBS清洗細胞1次，胰蛋白酶消化貼壁細胞，顯微鏡下觀察細胞基本脫落時加入足量完全培養(yǎng)基終止消化，收集細胞至10 mL離心管，1 500 r/min離心10 min，棄上清，用預冷PBS清洗一次，加RIPA裂解液于冰上裂解30 min，轉入1.5 mL離心管，于4 ℃，12 000 r/min離心30 min，收集上清液，用BCA蛋白定量試劑盒檢測蛋白質量濃度，按比例(V蛋白溶液體積∶V上樣緩沖液體積=1∶4)加入上樣緩沖液，于100 ℃沸水中變性10 min，每組上樣蛋白質量為40 μg，行質量分數為10%的SDS-PAGE電泳分離目的蛋白，冰浴條件下300 mA恒流1 h轉至PVDF膜，用質量分數為5%的脫脂牛奶于室溫封閉1.5 h，TBST洗滌4次，每次5 min，稀釋后的一抗(V一抗∶V抗體稀釋液=1∶1 500)孵育，4 ℃過夜，TBST洗滌4次，每次5 min，稀釋后的二抗(V二抗∶V抗體稀釋液=1∶1 500)孵育1 h，TBST洗滌4次，每次5 min，Immobilion Western HRP底物發(fā)光液暗室顯像，Image J軟件分析條帶灰度值，取目的條帶灰度值與內參條帶灰度值的比值為目的蛋白的相對表達量.

1.3 統(tǒng)計學方法

2 結果

2.1 不同子宮內膜組織中CXCL1的表達情況

CXCL1定位于胞漿內，正常增生期子宮內膜組織，非典型增生子宮內膜組織及子宮內膜樣腺癌組織的陽性率分別為40.0%， 62.5%，76.0%，子宮內膜樣腺癌組織陽性率與非典型增生子宮內膜組織之間比較無統(tǒng)計學差異(P>0.05)，但均顯著高于正常增生期組織(P<0.05)，免疫組化圖像見圖1，CXCL1在各組織中的表達情況見表1.在不同年齡、是否絕經、不同分化程度及不同浸潤深度的患者中，CXCL1的表達無顯著統(tǒng)計學差異，而在腫瘤直徑較大、有淋巴結轉移及分期較晚的患者中，CXCL1的表達顯著升高，具有統(tǒng)計學差異(P<0.05，表2).

A:正常增生期子宮內膜組織；B:非典型增生子宮內膜組織；C:子宮內膜樣腺癌組織.

表1 不同組織類型中CXCL1免疫組化結果的陽性率

Table 1 Positive expression rate of CXCL1 in different kind of tissues measured by immunohistochemistry assay

組別nn陽性(%)n陰性(%)正常增生期子宮內膜組織4016(40.0)24(60.0)非典型增生子宮內膜組織4025(62.5)15(37.5)1)子宮內膜樣腺癌組織5038(76.0)1)12(24.0)

1)與正常子宮內膜組織比較，P<0.05.

1)Compared with proliferative endometrial tissues，P<0.05.

表2 CXCL1表達與子宮內膜樣腺癌臨床病理參數的相關性

Table 2 Correlation between CXCL1 expression and clinicopathological parameters of endometrioid adenocarcinoma

臨床病理參數n高表達n低表達2值P值年齡/歲0.1190.730 ≤50185 >50207絕經0.6750.411 是215 否177分化程度1.5220.467 高分化287 中分化43 低分化62浸潤深度1.1450.285 <1/22711 ≥1/2111腫瘤直徑5.2460.036 <6 cm2111 ≥6 cm171淋巴轉移5.6450.018 有151 無13分期6.9480.008 Ⅰ-Ⅱ期2011 Ⅲ-Ⅳ期181

共有20名患者進行淋巴結清掃術(術前大部分患者已行內膜診刮，對于淋巴結的清掃，結合術中剖開暴露宮腔明確腫瘤直徑以及術前MRI決定，所選入組患者均未行術前放化療).

A total of 20 patients underwent lymph node dissection (most patients had undergone endometrial scraping before surgery, for lymph node dissection, combined with intraoperative exposure of the uterine cavity to determine the tumor diameter and preoperative MRI decision, none of the selected patients were enrolled preoperative radiotherapy and chemotherapy).

2.2 CXCL1在子宮內膜樣腺癌組織中的表達

在子宮內膜樣腺癌組織與癌旁組織中的CXCL1mRNA表達水平分別為：(3.35±1.85)，(1.76±1.86),CXCL1在癌組織中的表達水平顯著高于癌旁組織，有統(tǒng)計學差異(F=0.034，P=0.002)，見圖2.

1)與癌旁組織比較，P<0.01.

1)Compared with adjacent tissues,P<0.01.

圖2 子宮內膜樣腺癌與癌旁組織中CXCL1的相對表達

Fig.2CXCL1mRNA expression in endometrioid adenocarcinoma tissues and adjacent tissues

2.3 干擾效率最佳siRNA的選擇

優(yōu)化轉染條件，使轉染效率大于70%，轉染后各組細胞的熒光圖像見圖3.轉染后48 h，經QRT-PCR法檢測，NC組、siCXCL1-249組、siCXCL1-322組、siCXCL1-376組CXCL1mRNA的相對表達量分別為(1.21±0.65)，(0.09±0.03)，(0.19±0.18)，(0.05±0.04).與NC組比較，其余3組CXCL1mRNA的表達量均顯著降低(P<0.05)，但3組之間比較無統(tǒng)計學差異(P>0.05).轉染后72 h，NC組、siCXCL1-249組、siCXCL1-322組、siCXCL1-376組細胞上清液中CXCL1的蛋白質量濃度分別為(96.00±15.75)pg/mL，(37.80±12.07)pg/mL，(62.20±9.26)pg/mL，(25.2±5.26)pg/mL.與NC組比較，其余3組CXCL1的蛋白質量濃度均顯著降低(P<0.05)；siCXCL1-376組與其他3組之間均有統(tǒng)計學差異(P<0.05)(圖4).故選取siCXCL1-376作為干擾siRNA沉默CXCL1基因表達，進行后續(xù)細胞實驗.

2.4 沉默CXCL1后Ishikawa細胞增殖情況

與NC組比較，轉染24 h后，CXCL1沉默組的細胞增殖無統(tǒng)計學變化，轉染48、72、96 h后，CXCL1沉默組的細胞增殖明顯受到抑制(P<0.05，P<0.01)，且隨著時間延長，抑制作用更加明顯(圖5).

圖3 普通光學顯微鏡及熒光顯微鏡下siRNA轉染情況(×400)

1)與NC組比較，P<0.05；2)與siCXCL1-249組比較，P<0.05；3)與siCXCL1-322組比較，P<0.05.1)Compared with NC group，P<0.05；2)Compared with siCXCL1-249 group，P<0.05；3)Compared with siCXCL1-322 group，P<0.05.

1)與NC組比較，P<0.05；2)與NC組比較，P<0.01.

1)Compared with NC group，P<0.05；2)Compared with NC group，P<0.01.

圖5 沉默CXCL1后細胞增殖情況

Fig.5 Proliferation of Ishikawa cells withCXCL1knockdown

2.5 沉默CXCL1后Ishikawa細胞凋亡情況

轉染72 h后，NC組與CXCL1沉默組的凋亡率分別為(6.3±0.3)%，(8.7±0.7)%，與NC組比較，CXCL1沉默組的凋亡率顯著降低，具有統(tǒng)計學差異(P=0.012<0.05，圖6).流式細胞儀檢測的凋亡率數值較低，故加測凋亡蛋白Caspase-3蛋白表達以進一步驗證. NC組與CXCL1沉默組Caspase-3蛋白的相對表達量分別為(0.34±0.02),(0.64±0.11)，與NC組比較，CXCL1沉默組的Caspase-3蛋白表達顯著升高(P<0.05)，見圖7.

2.6 沉默CXCL1后Ishikawa細胞遷移能力變化

與NC組比較，轉染48 h后，CXCL1沉默組的細胞遷移率無統(tǒng)計學變化，轉染72 h后，CXCL1沉默組的細胞遷移率顯著降低(P<0.05，圖8).

1)與NC組比較，P<0.05.
1)Compared with NC group，P<0.05.

圖6 沉默CXCL1后Ishikawa細胞凋亡情況

Fig.6 Apoptosis of Ishikawa cells withCXCL1knockdown

圖7 沉默CXCL1后Ishikawa細胞Caspase-3蛋白的表達情況

Fig.7 Expression of Caspase-3 protein in Ishikawa cells withCXCL1knockdown

2.7 沉默CXCL1后Ishikawa細胞侵襲能力變化

NC組與CXCL1沉默組細胞平均穿膜細胞數分別為(95.33±13.01)，(24.33±6.66)，與NC組比較，CXCL1沉默組穿膜細胞數量明顯減少，具有統(tǒng)計學差異(P=0.004<0.05，圖9).

2.8 沉默CXCL1后 Ishikawa細胞pNF-κB及MMP9蛋白的表達

NC組與CXCL1沉默組NF-κB p65蛋白的相對表達量分別為(0.85±0.15)，(0.81±0.13)，pNF-κB p65蛋白的相對表達量分別為(0.69±0.13)，(0.32±0.08)，NF-κB p65蛋白的磷酸化率分別為(81.25±15.56)%，(40.61±12.52)%，與NC組比較，CXCL1沉默組NF-κB p65蛋白的磷酸化率顯著降低(P<0.05)；兩組MMP-9的相對蛋白表達量分別為(0.64±0.08)，(0.17±0.07)，與NC組比較，CXCL1沉默組MMP-9蛋白表達顯著降低(P<0.05).見圖10.

圖8 沉默CXCL1后Ishikawa細胞遷移情況(×400)

Fig.8 Migration of Ishikawa cells withCXCL1knockdown(×400)

1)與NC組比較，P<0.05.1)Compared with NC group，P<0.05.

圖10 沉默CXCL1后Ishikawa細胞pNF-κB及MMP9蛋白的表達情況

Fig.10 Expression of pNF-κB and MMP9 protein in Ishikawa cells withCXCL1knockdown

3 討論

子宮內膜樣腺癌是子宮內膜癌中發(fā)病率最高的一種類型，預后較好，但仍有一部分患者發(fā)現時疾病已到晚期，故需要更有效的新的治療手段.有研究顯示趨化因子及相關信號通路的激活與腫瘤的進展轉移有關，而子宮內膜樣腺癌的預后與某些特定趨化因子關系密切，已有研究顯示趨化因子配體12[chemokine (C-X-C motif) ligand 12，CXCL12]，白介素8(interleukin-8，IL-8)， 基質細胞衍生因子1(stromal cell-derived factor 1，SDF-1)等趨化因子及相應受體在子宮內膜樣腺癌組織中高表達，對其發(fā)生發(fā)展具有促進作用[5-7]，可能成為治療子宮內膜樣腺癌的新靶點.因此探究趨化因子與子宮內膜樣腺癌的關系也可能為腫瘤靶向治療提供依據.

CXCL1是趨化因子家族中的一員，可通過自分泌與旁分泌模式調節(jié)細胞增殖凋亡及轉移相關信號通路，亦可以通過募集白細胞和激活促炎介質塑造腫瘤微環(huán)境而促進腫瘤生長和轉移[8].Kuo[9]的研究小組報道，CXCL1可激活前列腺癌中的NF-κB/HDAC1(nuclear factor kappa-B/histone deacetylase 1)信號通路，進而促進細胞增殖；有學者[10]進行體外實驗發(fā)現，重組人抗CXCL1抗體可減少白介素6(Interleukin-6，IL-6)及金屬蛋白酶MMPs(matrix metalloproteinase)的產生，增加金屬蛋白酶組織抑制因子4[tissue inhibitor of metalloproteinases4(TIMP-4)]的產生進而抑制前列腺癌細胞的遷移、侵襲；Korivi過表達CXCL1后發(fā)現絲裂原活化蛋白激酶(mitogen activited protein kinase，MAPK)途徑被激活，上皮間質轉化(epithelial-mesenchymal transition，EMT)相關產物增加，進而促進乳腺癌細胞的遷移、侵襲[11].大量關于卵巢癌[12]及乳腺癌[13]的研究表明，CXCL1通過與多種腫瘤相關免疫細胞表面均會表達的CXCR2(C-X-C chemokine receptor type 2)受體結合，可增加髓源性巨噬細胞的產生及募集，穩(wěn)固腫瘤微環(huán)境，加強免疫抑制[14]，進而促進腫瘤進展.

然而關于CXCL1與子宮內膜樣腺癌相關性的研究較少，本研究發(fā)現子宮內膜樣腺癌組織中CXCL1表達顯著升高，不同病理分級的子宮內膜樣腺癌組織中CXCL1表達差異不明顯，腫瘤直徑較大、有淋巴轉移、分期較晚患者的子宮內膜樣腺癌組織中CXCL1表達量顯著升高，提示其可能成為子宮內膜樣腺癌的一種潛在的腫瘤標志物.體外實驗中，沉默CXCL1后，細胞增殖明顯被抑制，細胞凋亡率及凋亡蛋白Caspase-3表達量均增加，細胞遷移及侵襲能力均降低.

NF-κB是在生物體內普遍存在并穩(wěn)定表達的一種轉錄因子，可因各種致癌物質、生長因子等的刺激發(fā)生磷酸化、泛素化而被激活，從而發(fā)揮生物學作用，在包括子宮內膜樣腺癌在內的多種類型腫瘤中調節(jié)細胞增殖凋亡、血管形成及轉移[15].本研究發(fā)現，沉默CXCL1后，磷酸化的NF-κB蛋白表達量減少，而EMT促轉移相關物質金屬蛋白酶MMP-9蛋白表達量也減少，MMP-9被證明多為NF-κB依賴型，在NF-κB調控下，發(fā)揮增加血管形成、促進腫瘤轉移等作用[16-17].本研究提示沉默CXCL1可能下調磷酸化NF-κB進而抑制Ishikawa細胞的增殖、遷移能力及侵襲能力，促進細胞凋亡，發(fā)揮對腫瘤的抑制作用.而有學者在結腸癌的相關報道中提出CXCL1基因近端啟動子有NF-κB反應元件，CXCL1可能依賴NF-κB的活化而被激活表達增加，進而促進腫瘤生長[18]，結合本實驗，猜想CXCL1與NF-κB可能存在一種反饋調節(jié)，共同促進腫瘤的增殖侵襲，這需要進一步驗證.

總而言之，結合免疫組化和組織QRT-PCR結果以及體外實驗結果，證明CXCL1在子宮內膜樣腺癌組織中表達升高，沉默CXCL1可以降低Ishikawa細胞增殖、遷移及侵襲能力，促進細胞凋亡，CXCL1可能通過NF-κB磷酸化發(fā)揮促腫瘤進展的作用.后續(xù)可予以不同類型的子宮內膜癌細胞株來明確CXCL1在其他類型子宮內膜癌中的表達，后期本課題組也將以腫瘤相關免疫細胞為出發(fā)點尋找其相關性.腫瘤發(fā)生紛繁復雜，多種蛋白通路交錯構成一個復雜的網絡，CXCL1與子宮內膜樣腺癌發(fā)生發(fā)展可能有更多的機制需要去探索.結合CXCL1對腫瘤自身增殖侵襲作用的抑制，也為腫瘤的靶向治療提供了一個可能，然而其能否用于臨床，仍需后續(xù)大量實驗以及臨床大數據研究.