毛小慧 申 文 蔣志霞 王堯淇

1.黃河中心醫(yī)院河南唯實(shí)司法鑒定中心，河南 鄭州 450000；2.河南申友醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)所有限公司，河南 鄭州 450000

一、案例

(一)案由

被鑒定人趙某，男性，59歲，單位體檢時(shí)偶然發(fā)現(xiàn)右胸包塊，行穿刺組織病理學(xué)活檢，診為乳腺癌。由于醫(yī)學(xué)理論常識(shí)有限，趙某家屬認(rèn)為男性沒(méi)有罹患乳腺癌的可能性，體檢所在醫(yī)院在做組織病理學(xué)檢查取材時(shí)可能錯(cuò)拿樣本，因此趙某家屬認(rèn)為該醫(yī)院診斷結(jié)果存在差錯(cuò)。同時(shí)趙某家屬希望能夠避免再次穿刺確定組織病理學(xué)診斷結(jié)果的準(zhǔn)確性，同時(shí)可以對(duì)被鑒定人趙某隱瞞病情，防止趙某因情緒失控出現(xiàn)意外，故將被鑒定人趙某血樣及組織病理切片送至我鑒定中心進(jìn)行DNA個(gè)體識(shí)別鑒定。

(二)檢測(cè)方法

1.石蠟組織切片脫蠟

取未染色組織切片3張，將組織片刮下置于1.5ml離心管中，加入1.0ml二甲苯，震蕩混勻，56℃水浴10min以上，14000轉(zhuǎn)離心1min以上，棄上清，重復(fù)一次；加1.0ml無(wú)水乙醇，震蕩混勻，14000離心1min以上，棄上清，重復(fù)一次；輕彈離心管底部，將沉淀打散，輕微打開(kāi)離心管蓋，將離心管置于100℃金屬恒溫浴內(nèi)烘干。

2.樣本DNA提取及擴(kuò)增分析

采用QIAamp@石蠟組織DNA專提試劑盒(QIAamp@DNA FFPE Tissue Kit)，按照說(shuō)明書中規(guī)定的方法提取石蠟切片組織DNA，按照《法庭科學(xué)DNA實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)規(guī)范》(GA/T 383-2014)、《法醫(yī)生物檢材的提取、保存、送檢規(guī)范》(GA/T 1162-2014)及《法庭科學(xué)人類熒光標(biāo)記STR復(fù)合擴(kuò)增檢測(cè)試劑質(zhì)量基本要求》(GA/T 815-2009)標(biāo)準(zhǔn)規(guī)范中的方法，應(yīng)用PowerPlex16HS試劑盒對(duì)提取的石蠟切片組織DNA及血斑樣本進(jìn)行PCR復(fù)合擴(kuò)增，擴(kuò)增產(chǎn)物經(jīng)ABI3500Dx型基因分析儀電泳分離和激光掃描分析，得到石蠟切片組織和血斑樣本的常染色體STR分型結(jié)果。

(三)分型結(jié)果

1.石蠟組織DNA分型結(jié)果

2.血樣DNA分型結(jié)果

(四)鑒定意見(jiàn)

D3S1358、TH01、D21S11、D18S51、PentaE、D5S818、D13S317、D7S820、D16S539、CSF1P0、PentaD、vWA、D8S1179、TPOX、FGA等15個(gè)常染色體STR基因座均為人類遺傳標(biāo)記，具有人類種屬特異性和組織同一性，聯(lián)合應(yīng)用可以進(jìn)行個(gè)體識(shí)別同一認(rèn)定，其累積個(gè)體識(shí)別機(jī)率值為1-4.7070×10-20。

本案中，組織病理石蠟切片常染色體STR分型與趙某血斑樣本15個(gè)常染色體STR分型結(jié)果相同，經(jīng)計(jì)算似然比率(LR)值為2.1245×1019，其數(shù)值大于全世界人口總數(shù)。根據(jù)目前DNA檢測(cè)結(jié)果，支持送檢組織病理石蠟切片組織與趙某血斑樣本來(lái)自于同一個(gè)體。

二、討論

DNA個(gè)體識(shí)別鑒定一般用于鑒別遺留在刑事案件案發(fā)現(xiàn)場(chǎng)的生物學(xué)檢材是否為嫌疑人所留，被廣泛應(yīng)用于刑事案件偵查中。隨著生物科學(xué)技術(shù)和人們認(rèn)識(shí)水平的發(fā)展，近年來(lái)DNA個(gè)體識(shí)別被應(yīng)用于日常民事案件或個(gè)人需求的案例也越來(lái)越多。本案例即個(gè)人向社會(huì)鑒定機(jī)構(gòu)委托進(jìn)行DNA個(gè)體識(shí)別鑒定，用于明確是否系男性親屬罹患乳腺惡性腫瘤，進(jìn)行該鑒定避免了該病人再次進(jìn)行組織穿刺或手術(shù)，同時(shí)也滿足了病人家屬對(duì)病人病情進(jìn)行保密的需要。根據(jù)現(xiàn)有醫(yī)學(xué)理論，由于男性也有乳腺組織，也有罹患乳腺患的風(fēng)險(xiǎn)，但發(fā)病率很低，十分罕見(jiàn)，所以廣大人民群眾受知識(shí)理論限制，普遍認(rèn)為男性沒(méi)有乳腺惡性腫瘤的發(fā)病可能，本次鑒定也只是社會(huì)司法鑒定機(jī)構(gòu)受理DNA個(gè)體識(shí)別一個(gè)特例。而社會(huì)司法鑒定機(jī)構(gòu)受理的DNA個(gè)體識(shí)別業(yè)務(wù)范圍還涉及惡性腫瘤保險(xiǎn)合同欺詐、因組織病理誤診而產(chǎn)生的醫(yī)患糾紛、面目毀損的尸體認(rèn)領(lǐng)及車輛駕乘人員的認(rèn)定等。通過(guò)本次鑒定可以看到，DNA檢測(cè)司法鑒定手段可以有效地對(duì)此類案件進(jìn)行答疑解惑。

本案的關(guān)鍵技術(shù)環(huán)節(jié)在于從石蠟組織切片中提取DNA分子。石蠟組織切片制作過(guò)程涉及福爾馬林固定、水洗、乙醇脫水、二甲苯透明、石蠟包埋等一系列過(guò)程，其中福爾馬林、二甲苯等化學(xué)試劑對(duì)DNA分子具有明確的破壞作用，所以石蠟組織切片中提取DNA分子有一定技術(shù)難度[1]。石蠟組織的DNA分子提取必須經(jīng)過(guò)脫蠟處理和提取兩個(gè)步驟。主要脫蠟處理方法有：水浴脫蠟、微波脫蠟及二甲苯脫蠟。提取方法有：Chelex-100+試劑盒提取法、磁珠提取法、Chelex-100+磁珠純化法等[2]。本案我們利用的是二甲苯對(duì)組織進(jìn)行脫蠟后，利用QIAamp@石蠟組織DNA專提試劑盒(QIAamp@DNA FFPE Tissue Kit)提取石蠟組織切片中的DNA分子，利用PowerPlex16HS試劑盒將提取的DNA分子和血斑樣本進(jìn)行復(fù)合擴(kuò)增，利用ABI3500Dx型基因分析儀電泳分離和激光掃描分析，得到的基因圖譜分型良好，并且經(jīng)過(guò)再次復(fù)核試驗(yàn)結(jié)果后，出具DNA個(gè)體識(shí)別鑒定意見(jiàn)。本次鑒定也再次印證了QIAamp@石蠟組織DNA專提試劑盒(QIAamp@DNA FFPE Tissue Kit)商業(yè)化試劑盒提取石蠟組織切片中DNA分子的有效性。

隨著DNA分子檢測(cè)技術(shù)的發(fā)展，社會(huì)司法鑒定機(jī)構(gòu)在DNA檢測(cè)“軟硬件”方面已經(jīng)足以勝任各方面需求，我國(guó)很多地方的DNA親子鑒定、DNA個(gè)體識(shí)別鑒定甚至“市場(chǎng)化”，可以看出法醫(yī)物證技術(shù)帶給我們社會(huì)價(jià)值日益凸顯，但同時(shí)我們也不難看出法醫(yī)物證類鑒定行業(yè)在案件受理、風(fēng)險(xiǎn)控制及倫理法律責(zé)任方面仍有欠缺，所以社會(huì)DNA檢測(cè)機(jī)構(gòu)行業(yè)規(guī)范和法律法規(guī)的完善也迫在眉睫，希望行業(yè)協(xié)會(huì)及相關(guān)行政管理部門予以重視，為維護(hù)司法公正和社會(huì)和諧創(chuàng)造有利政策條件。