張錫波 何慧君 葉旭鑫 吳志鋒 張鳳宜 萬志鵬

（東莞市人民醫(yī)院檢驗(yàn)科 廣東 東莞 523000）

1.資料與方法

1.1 標(biāo)本來源

收集無溶血、黃疸和脂血的病人及健康體檢者的新鮮血清制作成5種不同肌酐濃度的混合血清樣本。

1.2 干擾物

羥苯磺酸鈣膠囊廠家為上海朝暉藥業(yè)有限公司，包裝規(guī)格為10粒/板/盒，每粒含羥苯磺酸鈣0.5g（按C12H10CaO10S2計(jì)）。

1.3 儀器試劑

儀器使用Beckman Coulter的AU5831生化分析儀，試劑為配套的Beckman Coulter公司肌氨酸氧化酶法試劑，貨號(hào)OSR61204，規(guī)格為4×45mL R1,4×15mL R2。干化學(xué)使用儀器為強(qiáng)生Ortho-Clinica Diagnostics VITROS 5600生化分析儀(以下簡稱強(qiáng)生V5600),試劑使用配套的試劑（300測試/盒）。校準(zhǔn)品使用配套校準(zhǔn)品，Beckman Coulter質(zhì)控是原廠質(zhì)控，強(qiáng)生V5600使用第三方朗道質(zhì)控。

待測樣本配制：根據(jù)羥苯磺酸鈣藥物特性，峰值濃度一般為8～15μg/ml[2]，因此配制時(shí)應(yīng)包含該濃度范圍。先配制3種不同藥物濃度的貯存液A（400μg/ml）、貯存液B（1000μg/ml）、貯存液C（2000μg/ml），收集5種肌酐濃度的混合血清，并配制成一系列不同藥物濃度的待測血清，盡可能不影響基質(zhì)情況下，加入物應(yīng)小于5%，各種肌酐濃度樣本配制方法相同，最終配制40個(gè)檢測樣本。

1.4 重復(fù)次數(shù)確定

首先參考美國CLIA’88能力比對檢驗(yàn)的分析質(zhì)量要求肌酐的可接受范圍為15或%26.5μmol/L（取大者），因此設(shè)定實(shí)驗(yàn)的最大允許干擾值dmax為對照均值的7.5%或13.25μmol/L（取大者）。重復(fù)測定10次對照樣本得出批內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)差s，計(jì)算各濃度樣本的dmax/s均大于3，查表可確定應(yīng)重復(fù)檢測的次數(shù)為3次。

表1 AU5800上羥苯磺酸鈣對肌酐檢測干擾值dobs

表2 強(qiáng)生V5600上羥苯磺酸鈣對肌酐檢測干擾值dobs

1.5 方法

根據(jù)CLSI EP7-A2文件的實(shí)施方案要求，分別進(jìn)行配對試驗(yàn)和劑量效應(yīng)試驗(yàn)。分別在AU5800和強(qiáng)生V5600上對配制好的樣本進(jìn)行檢測，各測定3次，取平均值。

1.6 數(shù)據(jù)分析

計(jì)算干擾值dobs和干擾效應(yīng)的95%可信區(qū)間(CL),dobs為測試樣本均值和對照樣本均值之間的差值,計(jì)算dobs±t0.975,n-1s√￣2/n,如果其范圍不包括0，則可判斷對檢測結(jié)果有干擾，如dobs大于dmax則存在明顯干擾。

2.結(jié)果

2.1 BECKMAN AU5800低濃度樣本（70.3μmol/L）受干擾嚴(yán)重，不同濃度羥苯磺酸鈣對肌酐檢測干擾值見表1、表2。

圖1 AU5800上羥苯磺酸鈣對肌酐檢測干擾效應(yīng)曲線

圖2 強(qiáng)生V5600上羥苯磺酸鈣對肌酐檢測干擾效應(yīng)曲線

3.討論

目前，我國檢測肌酐的主要方法有堿性苦味酸法和肌氨酸氧化酶法[3]，但由于堿性苦味酸法的特異性不好，試劑穩(wěn)定性差，定標(biāo)周期短等缺點(diǎn)，因此現(xiàn)在多數(shù)檢驗(yàn)科都選擇肌氨酸氧化酶法作為檢測肌酐的常規(guī)方法，其具備特異性高和干擾因素少、不會(huì)產(chǎn)生有毒物質(zhì)等優(yōu)點(diǎn)，有利于快速自動(dòng)化分析儀的檢測。它的原理是肌酐被肌酸酐酶水解為肌酸。生成的肌酸被肌酸酶水解為肌氨酸和尿素。肌氨酸氧化酶促進(jìn)肌氨酸的氧化性脫甲基作用，產(chǎn)生氨基乙酸、甲醛和過氧化氫。過氧化物酶(POD)的出現(xiàn)，使已產(chǎn)生的過氧化氫和N-（3-磺丙基）-3-甲氧基-5-甲基苯胺(HMMPS)以及4-氨基安替吡啉起定量氧化縮合反應(yīng)，產(chǎn)生藍(lán)色色素，肌酐濃度與在600/700nm處吸光率的變化成比例。干化學(xué)法與其不同的是色原不同。

羥苯磺酸鈣是一種改善微循環(huán)的血管保護(hù)藥，化學(xué)名稱為2，5一二羥基苯磺酸鈣一水合物，常用于治療糖尿病視網(wǎng)膜病變、糖尿病腎病、其他原因所致的慢性腎功能衰竭及冠心病等疾病。其機(jī)制是可降低毛細(xì)血管通透性，增強(qiáng)抗氧化能力，改善淋巴回流，減少血管內(nèi)膜損傷；降低血液黏稠度，調(diào)節(jié)纖溶系統(tǒng)和凝血系統(tǒng)等機(jī)制，防止血栓形成，從而保護(hù)血管[4-5]。健康人單次服用500mg羥苯磺酸鈣后血藥濃度達(dá)峰時(shí)間為3～6小時(shí)，峰值濃度約8～15μg/ml,消除半衰期約在5小時(shí)左右。正常用量（每天1.0～1.5mg/日，分2～3次），6小時(shí)血藥濃度穩(wěn)定，GFR正常的病人24小時(shí)血藥濃度均在6μg/ml以上。