高超， 趙丹青， 孫磊， 朱科靜， 許永劼， 朱金鳳， 金玉姬， 潘衛(wèi),5,6**

(1.貴州醫(yī)科大學(xué) 檢驗(yàn)學(xué)院， 貴州 貴陽 550004； 2.貴州醫(yī)科大學(xué)附院 婦產(chǎn)科， 貴州 貴陽 550004； 3.長春千麥醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室有限公司， 吉林 長春 130031； 4.吉林醫(yī)藥學(xué)院 基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院， 吉林 延吉 132013； 5.貴州醫(yī)科大學(xué)附院 產(chǎn)前診斷中心， 貴州 貴陽 550004； 6.貴州醫(yī)科大學(xué) 環(huán)境污染與疾病監(jiān)控教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室， 貴州 貴陽 550004)

人乳頭瘤病毒(human papillomavirus，HPV)感染是宮頸癌發(fā)病的一個(gè)根本原因[1-3]。目前，已發(fā)現(xiàn)的HPV有130多種亞型，其中能夠引起宮頸癌和高度宮頸上皮內(nèi)瘤變的稱為高危型HPV[4-6]。研究表明，不同地區(qū)、不同人群感染的HPV亞型也有所不同。本研究針對長春地區(qū)505名女性體檢人群，取其宮頸脫落細(xì)胞，采用Luminex 200流式熒光技術(shù)進(jìn)行HPV基因檢測，分析該地區(qū)HPV感染情況、基因亞型分布特征及患者年齡分布特點(diǎn)，為該地區(qū)女性宮頸癌的早期預(yù)防、發(fā)現(xiàn)和控制提供參考。

1 資料與方法

1.1 對象、儀器及試劑

1.1.1研究對象 選取2018年3月長春地區(qū)505例的門診體檢女性，年齡20～70歲。納入標(biāo)準(zhǔn)：無宮頸癌、無宮頸手術(shù)史、無盆腔放射治療史、無激素使用史、有性生活史，排除妊娠、之前確認(rèn)患有宮頸癌前病變及患有宮頸癌經(jīng)過治療的女性。

1.1.2儀器與試劑 Luminex 200 多功能流式點(diǎn)陣儀、Eppendorf Mastercylcer Gradient 基因擴(kuò)增儀、低溫高速離心機(jī)以及超凈工作臺(tái)，上海透景公司的核酸提取盒、HPV核酸擴(kuò)增分型檢測試劑盒。

1.2 方法

收集宮頸刮取物中宮頸脫落細(xì)胞，-20 ℃保存；將保存液里的標(biāo)本充分混勻，取1 mL置于離心管中，12 000 r/min離心5 min，去掉上清，生理鹽水清洗后用核酸提取盒提取核酸，使用HPV核酸擴(kuò)增分型檢測試劑盒進(jìn)行反應(yīng)，再經(jīng)Luminex 200流式熒光儀檢測后進(jìn)行基因分型。本實(shí)驗(yàn)共鑒定27種HPV的基因型，包括高危型17種(16、18、31、33、35、39、45、51、52、56、58、59、66、68、26、53和82型) ，低危型10種(6、11、40、42、43、44、55、61、81和83型) 。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

2 結(jié)果

2.1 HPV感染情況

共檢出21種HPV基因亞型，其中高危型15種(HPV-16、52、18、58、39、33、66、68、35、56、53、31、45、51、26型)、低危型6種(HPV-6、40、42、43、44、81型)。505例體檢女性中HPV感染69例，感染率為13.7%，其中單一感染及多重感染分別占HPV感染者的79.7%(55/69)及20.3%(14/69)。HPV單一感染者中以高危亞型為主，占81.8%(45/55)，而最常見的2種高危型HPV分別是HPV-16、52型，感染率分別為2.2%(11/505)、1.0%(5/505)。此外，HPV單一感染者中低危亞型占18.2%(10/55)，低危亞型感染者中81型的感染率也較高，為 0.6%(3/505)。在14例 HPV多重感染者中，雙重感染占92.9%(13/14)，四重感染占7.1%(1/14)。在多重感染者中最常見的高危型HPV類型分別為HPV-53和16型，感染率分別為 0.8%(4/505)、0.6%(3/505)，低危型HPV中HPV-44感染率較高，為0.6%(3/505)，各型HPV感染率之間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=59.9，P<0.01)。見表1。

表1 69例體檢女性HPV感染類型分布Tab.1 Distribution of HPV infection types in 69 female undergoing physical examination

2.2 不同年齡女性HPV感染情況

505例研究對象中67例沒有年齡信息，其余438例體檢女性年齡20～70歲,平均(42.95±9.27)歲，<20歲、20～<30歲、30～<40歲、40～<50歲及≥50歲年齡組HPV感染率分別為0、20.0%、13.1%、12.6%及16.6%，除<20歲組外，其余各年齡組之間HPV感染率比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=2.11，P>0.05)，見表2。各年齡段均以高危型感染為主，其中20～<30歲年齡組的高危型感染率和多重感染率均最高，分別為12.5%和5.0%；其余各年齡段人群中，高危感染率最高的是40～<50歲年齡組(10.4%)，多重感染率最高的為≥50歲年齡組(4.6%)，見表3。

表2 不同年齡段體檢女性HPV感染率Tab.2 HPV infection rates of women in different age groups

表3 不同年齡段體檢女性HPV感染亞型檢出情況Tab.3 Detection of HPV infection subtypes in women of different ages

2.3 不同年齡組女性HPV-16、18和52亞型檢出情況

分析感染率較高的HPV-16、52亞型及與癌癥關(guān)聯(lián)最密切的HPV-18亞型的年齡分布特征，3型中各有1例共3例年齡信息缺失，20～<30歲、40～<50歲年齡組以HPV-16基因型感染為主，感染率分別為5.0%和3.3%，20～<30歲和≥50年齡組HPV-16及52基因型感染率無明顯差異。見表4。

表4 不同年齡組女性HPV-16、18和52基因型的檢出情況Tab.4 The detection of HPV genotypes 16, 18 and 52 in women of different age groups

3 討論

HPV屬于乳多空病毒科的乳頭瘤空泡病毒A屬，是球形DNA病毒，能引起人體皮膚黏膜的鱗狀上皮增殖[7-8]。隨著女性宮頸癌發(fā)病率的增高，其病因HPV感染也漸漸引起人們的注意。由于每個(gè)地區(qū)生活環(huán)境及人們生活習(xí)慣的不同，導(dǎo)致HPV 基因亞型在不同人群中分布也有較大差異[9-10]。有研究表明，宮頸病變程度與HPV亞型息息相關(guān)[11-12]。據(jù)調(diào)查統(tǒng)計(jì)，全球女性中最常見的HPV感染亞型前3名分別是16、18及31型，而在中國女性中最常見的HPV感染亞型前3名分別為 HPV-16、52及18型[13]。本研究對長春地區(qū)某一批次505例體檢女性的宮頸脫落細(xì)胞進(jìn)行HPV基因分型檢測，感染率最高的前2名HPV亞型為HPV-16及52型，與岑堯等[14]前期統(tǒng)計(jì)得出的數(shù)據(jù)基本一致。

有研究顯示，HPV感染率在各年齡階段差異沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義[15]，也有調(diào)查顯示，年齡≥61歲組HPV感染率最高(33.7%)，其次為≤20歲組(33%)，最低的是31～40歲組(16.4%)[16]。而在本研究中，HPV感染率最高的是20～<30歲組(20.0%)，最低的是<20歲組(0.0%)，但HPV感染率在20～<30歲、30～<40歲、40～<50歲、≥50歲年齡組中差異沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，各年齡組均以高危型HPV感染為主。提示，在不同年齡階段，都存在一定的HPV感染概率，因此每個(gè)年齡階段的女性進(jìn)行HPV基因型的檢測和HPV感染的預(yù)防都是很有必要的。

當(dāng)前已有3種HPV疫苗面世，分別是二價(jià)疫苗、四價(jià)疫苗和九價(jià)疫苗。二價(jià)疫苗針對HPV-16和18型，四價(jià)針對HPV-6、11、16和18型，九價(jià)針對HPV-6、11、16、18、31、33、45、52和58型。本研究結(jié)果顯示，此次HPV單一感染者中最常見為HPV-16和52型，多重感染者中HPV-53型也較常見，并不能被二價(jià)和四價(jià)疫苗所涵蓋，建議將HPV-52、53納入到HPV疫苗篩選評估中。在本研究中，多重HPV感染者占總感染者的20.3%，與新疆(15.5%)、云南(18.0%)相比較高，與山西(24.3%)、北京(27.7%)等相比較低，存在地區(qū)差異[17-18]。

綜上所述，隨著宮頸癌發(fā)病率的逐年升高，有必要持續(xù)推進(jìn)并全面加強(qiáng)HPV感染的預(yù)防與檢測，深入調(diào)查HPV在長春地區(qū)普通體檢人群中的感染及流行變化趨勢，是很有意義的。本研究提示，長春地區(qū)不同年齡段女性均存在一定的HPV感染概率，因此需要相關(guān)部門加強(qiáng)該地區(qū)HPV篩查工作，制定有效的預(yù)防控制措施，降低HPV感染風(fēng)險(xiǎn)，進(jìn)而降低宮頸癌的發(fā)病率。