李星星，顧夢恬，侯慶明，耿 梅*

(1.山東勝利生物工程有限公司，山東濟寧，272000； 2.揚州大學(xué)獸醫(yī)學(xué)院，江蘇揚州，225000)

雞球蟲病是雞常見且危害十分嚴重的寄生蟲病，一旦爆發(fā)，將造成巨大的經(jīng)濟損失。隨著時間推移，抗球蟲藥物開發(fā)應(yīng)用越來越多，但在現(xiàn)實養(yǎng)殖實踐中不斷出現(xiàn)錯誤用藥、泛濫用藥現(xiàn)象，這嚴重加劇了抗球蟲藥(Anticoccidiosis drugs)的抗藥性和交叉耐藥性，給雞群球蟲病的防治造成巨大困難。本試驗采用爆發(fā)球蟲病的雞場分離出的卵囊，進行人工感染健康雞群患得雞球蟲病，對雞群分別飼喂常用五種抗球蟲藥——海南霉素鈉(Hainanmycin sodium)、鹽霉素(Salinomycin)、莫能菌素(Monensin)、尼卡巴嗪(Nicarbazin)、地克珠利(Diclazuril)，對比分析其治療效果，為防治雞球蟲病(Coccidiosis in Chicken)提供參考意見。

1 材料與方法

1.1 試驗動物 試驗AA雞購自江蘇八達畜禽有限公司。將統(tǒng)一時間段孵出的雛雞立即運回揚州大學(xué)，在全面消毒的試驗動物房中飼養(yǎng)至25日齡，經(jīng)糞檢確認無球蟲感染，用于試驗。

1.2 試驗藥物 1%海南霉素鈉預(yù)混劑(Hainanmycin premix)，批號：HNP11702006。推薦給藥方案：混飼，雞每噸飼料，5～7.5 ppm(相當于添加藥品500～750 g/噸)；12%鹽霉素預(yù)混劑(Salamphenicol premix)，批號：201705018。推薦給藥方案：混飼，雞每噸飼料，60 ppm(相當于添加藥品500 g/噸)；20%莫能菌素預(yù)混劑(Monensin premix)，批號：MON20170501。推薦給藥方案：混飼，雞每噸飼料，90～110 ppm(相當于添加藥品450～550 g/噸)；25%尼卡巴嗪預(yù)混劑(Nicarbazin premix)，批號：2018-1-17。推薦給藥方案：雞每噸飼料，100 ppm(相當于添加藥品400g/噸)；0.5%地克珠利預(yù)混劑(Dikzuli premix)，批號：20170504023。推薦給藥方案：雞每噸飼料，1 ppm(相當于添加藥品200 g/噸)。

1.3 蟲種 雞艾美耳球蟲卵囊(Oocysts ofEimeriavulgaris in chickens)：由山東勝利生物工程有限公司從山東省發(fā)生雞球蟲病的雞場中采集新鮮糞便，經(jīng)試驗室分離、純化而得。經(jīng)試驗室檢查鑒定主要為柔嫩艾美耳球蟲，并經(jīng)雞體傳代增殖，收集球蟲卵囊經(jīng)孢子化后保存于4 ℃冰箱備用。

1.4 確定蟲種的感染量 接種前挑選30只20日齡無球蟲感染史的AA雞，隨機分成3組(每組10只)，每組中的每只雞分別經(jīng)嗉囊接種孢子化的球蟲卵囊，接種量分別為8×104、10×104和15×104個。感染后每天觀察雞的發(fā)病及死亡情況，感染后第8天將所有存活雞撲殺剖檢，觀察腸道病變情況。根據(jù)死亡率和腸道病變記分情況，確定藥物正式試驗時的球蟲感染量，即除不感染不給藥組外，感染組接種球蟲量為每只雞經(jīng)嗉囊感染孢子化卵囊約10×104個。

1.5 試驗分組 試驗設(shè)置7個組，各組處理詳見表1。

1.6 給藥途徑 受試藥物均按《2015年獸藥典》或《2017年版獸藥質(zhì)量標準》國家法規(guī)規(guī)定的給藥劑量添加于飼料中混飼給藥。給藥持續(xù)時間為9 d，期間動物均自由采食。所有藥物在給藥前通過逐級稀釋法與飼料充分混勻。具體給藥方案見表1。

1.7 試驗周期 試驗周期9 d，即感染前1 d逐只雞稱重、編號、分組，感染前48小時各藥物試驗組即按規(guī)定劑量和途徑給藥，連續(xù)給藥9 d。感染后第8天試驗結(jié)束。

1.8 觀察指標 試驗期間，每天觀察記錄雞的精神、食欲、飲水、排糞、發(fā)病雞及死亡數(shù)。死亡雞稱重后剖檢，以確定病死雞是否死于球蟲病。感染后第6、7、8天，每天計數(shù)糞便中的卵囊數(shù)。感染后第8天全部試驗雞稱重剖檢，觀察腸道病變，取腸道內(nèi)容物，計算腸道內(nèi)的卵囊數(shù)。

1.9 數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析 用Duncan氏新復(fù)極差法對各試驗組雞的平均增重與平均病變記分進行顯著性分析。

2.0 藥效判定標準 按抗球蟲指數(shù)(ACI)，在180以上為高效，在160～180之間為中效，在120～160之間為低效。ACI按默克公司[1]的方法計算，即：ACI=(存活率+相對增重率)-(病變值+卵囊值)。其中：

(1)存活率(Survival rate)(%)：存活雞數(shù)÷開始雞數(shù)×100 %。(2)相對增重率(Relative weight gain rate)(%)：用藥組或感染不用藥組雞的平均增重÷不感染不用藥組雞的平均增重×100%。不感染不用藥組雞的相對增重率為100 %。(3)病變值(Lesion value)：每組的平均病變記分×10。(4)每雞平均卵囊數(shù)(Average number of oocysts per chicken)：為糞便與腸道中卵囊數(shù)之和，其中糞便卵囊數(shù)按Norton等(1976)[2]的方法計算，腸道卵囊數(shù)按蔣金書等(1992)[3]的方法計算。(5)卵囊值(Oocyst value)：按角田清(1983)[4]的方法計算。

2 結(jié)果與分析

2.1 臨床癥狀 在試驗期間，健康對照組雞的精神、食欲、飲欲、糞便都正常。其余各試驗組雞均出現(xiàn)不同程度的臨床癥狀，如精神不振、羽毛聳立、頭蜷縮、呆立一隅、食欲減退、腹瀉、消瘦等。在感染后第五天，陽性對照組開始排出血便并一直持續(xù)到試驗結(jié)束，其中陽性對照組在第6天排出血便數(shù)量最多。各給藥組試驗雞癥狀減輕，精神、食欲、飲欲等情況好于陽性對照組，血便減少，死亡率降低，海南霉素鈉(Hainanmycin sodium)組的存活率為100%。

2.2 存活率、平均增重與相對增重率 由表2可知，受藥5組的平均增重均要高于陽性對照組，但差異不顯著(P>0.05)。在相對增重率方面，受藥5組的相對增重率均大于92%，高于陽性對照組。

表2 試驗結(jié)束時各組存活率(%)、平均增重與相對增重率(%)Tab 2 Survival rate (%), average weight gain and relative weight gain rate (%) of each group at the end of the experiment

2.3 卵囊產(chǎn)量與卵囊值 由表3可知，試驗中，陽性對照組的每雞平均卵囊產(chǎn)量最高，達133.2×106個卵囊，卵囊值為40；各用藥組的卵囊產(chǎn)量明顯低于陽性對照組，卵囊值為5～10。

表3 試驗結(jié)束后各試驗組每雞的平均卵囊產(chǎn)量與卵囊值Tab 3 Average oocyst yield and oocyst value per chicken per test group after the end of the experiment

2.4 病變記分與病變值 人工感染球蟲后病變部位主要在盲腸，盲腸上皮顯示增厚，一側(cè)或兩側(cè)盲腸顯著腫大，腸道內(nèi)充滿血液、血凝塊。由表4可知，十二指腸和中段腸道的病變不明顯。陽性對照組的平均病變記分最高，顯著高于海南霉素(Hainanmycin sodium)組(P< 0.05)。其他藥物組、陽性對照組均出現(xiàn)病變，但各個藥物組的病變較輕。

表4 試驗結(jié)束后各組平均病變記分與病變值Tab 4 Average lesion scores and lesion values of each group after the end of the trial

注：各組初始體重間差異均不顯著(P> 0.05)；同列右上角具有不同小寫字母者表示差異顯著(P< 0.05)。

2.5 抗球蟲指數(shù)(ACI) 由表5可知，受試藥物中， 海南霉素鈉(Hainanmycin sodium)組的抗球蟲指數(shù)(ACI)最高；莫能菌素(Monensin)組、尼卡巴嗪(Nicarbazin)組也處于160～180，具有抗球蟲中效水平。

表5 各組的抗球蟲指數(shù)計算結(jié)果Tab 5 Calculation results of anti-coccidial index of each group

3 討論與結(jié)論

雞球蟲病(Coccidiosis in Chicken)是由艾美耳屬(Eimeria)的多種單細胞寄生蟲引起的嚴重危害雞生長發(fā)育的一種疾病。集約化養(yǎng)雞廠是球蟲病爆發(fā)的最適場所, 其發(fā)病率50%～70%, 死亡率20%～30%,嚴重時高達80%[5]。球蟲病的主要特征是患雞消瘦、食欲下降、貧血和血痢，病愈后雞生長發(fā)育受阻，成年雞多為帶蟲者，增重和產(chǎn)蛋均會受到影響，經(jīng)濟效益降低[6]。在各種雞病中，球蟲病發(fā)生率最高, 占 1/6～ 1/5[7]，據(jù)報道，全世界每年因雞球蟲病(Coccidiosis in Chicken)造成高達30億美元經(jīng)濟損失，在美國每年因球蟲病造成的直接和間接經(jīng)濟損失約為6.4億美元[8]。據(jù)統(tǒng)計，中國每年用于防治雞球蟲病(Coccidiosis in Chicken)的藥物費用達數(shù)億元人民幣，占雞病全部防制費用的近1/3[9]。自 Levine P P[10]發(fā)現(xiàn)磺胺類藥物具有抗球蟲作用以來，已先后有 50 多種藥物投入臨床應(yīng)用， 為養(yǎng)雞業(yè)的發(fā)展做出了貢獻。雖然人們對雞球蟲病(Coccidiosis in Chicken)的免疫預(yù)防進行了一些研究， 但目前及今后相當長的一段時間內(nèi)，藥物防治仍是控制雞球蟲病(Coccidiosis in Chicken)的主要手段。

3.1 存活率(Survival rate)、平均增重(Average weight gain)、相對增重率(Relative weight gain rate) 由表2可以看出，存活率方面海南霉素組(Hainanmycin sodium)、尼卡巴嗪(Nicarbazin)組100%，高于受藥組平均值(97)的3.1%。另外，海南霉素(Hainanmycin sodium)組相對增重率97.2%，高于受藥組平均值(95.8%)的1.5%，優(yōu)于其他受藥組。表明在雞只感染球蟲后，海南霉素(Hainanmycin sodium)可以很好的提高雞的存活率和雞只增重。這與范江坤[11]等，海南霉素(Hainanmycin sodium)可以提高雞群成活率和飼料利用率，對增加雞群日增重效果顯著的研究一致。

3.2 平均產(chǎn)卵量(Average egg production)、卵囊值(Oocyst value) 由表3可以看出，海南霉素(Hainanmycin sodium)組平均產(chǎn)卵量合計32.4，低于受藥組平均值(42.1)的23.0%。另外海南霉素(Hainanmycin sodium)組卵囊值5，低于受藥組平均值(9)的44.4%。充分說明海南霉素(Hainanmycin sodium)可以很好的抑制球蟲增值，降低球蟲產(chǎn)卵量。

3.3 平均病變積分與病變值(Mean lesion score and lesion value) 由表4可以看出，海南霉素(Hainanmycin sodium)組優(yōu)于鹽霉素(Salinomycin)組、莫能菌素(Monensin)組、地克珠利(Diclazuril)組，但差異不顯著(P > 0.05)，顯著優(yōu)于尼卡巴嗪(Nicarbazin)組(P < 0.05)。另外，海南霉素(Hainanmycin sodium)組病變值16，低于受藥組平均值(19.4)的17.5%。聶奎等[12]認為海南霉素(Hainanmycin sodium)對雞柔嫩艾美耳球蟲病(Eimeriatenella Infection in Chicken)有很高療效，這與本研究結(jié)果一致。

3.4 抗球蟲指數(shù)(ACI) 由表5可以看出，海南霉素(Hainanmycin sodium)組176.2，高于受藥組平均值(164.4)的7.2%，海南霉素(Hainanmycin sodium)的抗球蟲指數(shù)屬于中效抗球蟲藥，優(yōu)于其他球蟲藥。這與鄭月華[13]等研究的7.5 ppm 海南霉素(Hainanmycin sodium)對雞柔嫩艾美耳球蟲(Eimeriatenella Infection in Chicken)有很強的作用，其ACI均在184以上，屬高效抗球蟲藥(Anticoccidial)，結(jié)果基本一致。

3.5 結(jié)論 綜合考慮海南霉素鈉預(yù)混劑(Hainanmycin premix)對雞人工感染艾美耳球蟲(Eimeria)的臨床癥狀(排血便)、病變損害和卵囊的控制及增重等的影響，海南霉素鈉預(yù)混劑(Hainanmycin premix)按推薦劑量750 mg/kg連續(xù)使用9 d，對來自山東省某雞場分離的艾美爾球蟲(Eimeria)臨床株有較好的療效。