游德平，姜芳燕，韓冰冰，陳攀，馬軍，楊寧

(1.海南熱帶海洋學院，熱帶海洋生物資源利用與保護教育部重點實驗室，海南省熱帶海洋漁業(yè)資源保護與利用重點實驗室，海南 三亞572022；2.海南大學三亞南繁研究院,海南 三亞572000)

腰斑寶螺也稱眼球貝，屬于軟體動物門、腹足綱、中腹足目、寶螺科、寶螺屬，主要分布于亞熱帶和熱帶的潮間帶、珊瑚礁或泥沙海底。本次研究主要為從產卵到卵囊破裂結束過程中的胚胎發(fā)育變化以及規(guī)律。

一、材料與方法

1.材料

腰斑寶螺采集時間為2021年5月30日，地點在海南三亞市小東海區(qū)域(109.498864°E、18.211454°N)，采集到的3只腰斑寶螺中有1只產卵，其殼長3.21厘米、殼寬1.99厘米、個體重8.1克(產卵后)，見圖1。腰斑寶螺從海區(qū)采集回來后，放在總體積110升的海水水族缸中暫養(yǎng)，并用體積0.8升的隔離盒與其他養(yǎng)殖生物隔開。隔離盒和串聯(lián)的水族缸的水流交換速度約170升/時，缸體上方照明時長約8時/天。

圖1 腰斑寶螺腹面(左)和側面(右)

2.觀察和記錄方法

每天早、中、晚(早上8點、中午12點、晚上8點)3次觀察記錄腰斑寶螺的活動狀態(tài)，使用小型顯微鏡(型號：STV-120M WSA)進行觀察，同時肉眼直接近距離觀察表面活動特點。

在觀察的同時讀取缸內兩支溫度計數(shù)值并取平均值，每天記錄3次。

二、結果

1.卵數(shù)統(tǒng)計

腰斑寶螺于6月1日，即采集后的第3天開始產卵，產卵持續(xù)時間約16小時，產卵時以最初產的幾十個卵囊為中心，逐漸向四周擴散呈輻射狀排列，最終近似圓形，共產出193個卵囊，每個卵囊內約有200個胚胎(圖2)。受精的胚胎為乳白色，未受精的幾乎透明。胚胎發(fā)育到后期，發(fā)現(xiàn)有4個卵囊逐漸渾濁，變?yōu)樵旗F狀、半透明、白色，沒有任何生命現(xiàn)象，使用紫外線燈照射發(fā)現(xiàn)有熒光反射(圖3)，而其他的正常發(fā)育的胚胎所在卵囊沒有熒光反射。

圖2 產卵初期(左)和后期(右)

圖3 壞死的卵囊

2.胚胎發(fā)育情況

6月1日開始產卵，計為第1天。卵囊飽滿，內部卵粒分布均勻，24小時后開始有生命活動跡象。此時親螺已停止繼續(xù)產卵，用腹足覆蓋、趴在卵囊塊上進行護卵，卵囊周邊的雜物會被親螺清理干凈。

隨著時間的推移，卵囊內的胚胎不斷發(fā)育，外觀上的顆粒感越來越明顯。

第5天，胚胎發(fā)育至擔輪幼蟲期，在卵囊內部無規(guī)則游動，游泳速度較慢。個體外表有一層透明膜包裹，兩邊、中間部位有凸起。胚胎個體全身無明顯的組織結構，見圖4。

第8天，觀察有2個黑色的點在胚胎的一端，根據(jù)相關資料推斷這是頭端正在發(fā)育中的眼，同時觀察到胚殼結構的出現(xiàn)，但還沒有出現(xiàn)明顯的螺塔，游泳速度非?？欤妶D4。最后發(fā)現(xiàn)卵囊中心位置胚胎的游泳速度較卵囊邊緣胚胎的游泳速度慢一些，而胚胎密度大小相反。

圖4 胚胎發(fā)育第5天(左)和第8天(右)

第9天，胚胎色素積累明顯、背部顏色加深，胚殼輪廓更明顯(圖5)，用于游泳的頭部二片翼足活動明顯。

第12天，整體卵囊顏色轉深，胚胎背部色素加深，胚殼仍為白色、有變大的現(xiàn)象。幼體擁擠在一起，卵囊隨時可能破裂，見圖5。

圖5 胚胎發(fā)育第9天(左)和第12天(右)

第14天，部分卵囊破裂；第15天，親螺開始離開卵囊塊。幼螺開始進入浮游生活階段。

三、總結

由于實驗樣本數(shù)量有限，本次實驗只是對腰斑寶螺胚胎的外部形態(tài)做了初步研究，未對卵裂期、囊胚期、原腸期、擔輪幼蟲期、仔螺等具體時期做細致的研究。本實驗中的溫度對腰斑寶螺卵囊內胚胎發(fā)育也起到重要作用，孵化期間每天的水溫為23～25℃，最適孵化溫度還有待進一步探索。

在本實驗中后期，水中的原生動物對卵囊會造成一定的干擾，它們附著于卵囊表面，有的會鉆進卵囊吞噬胚胎幼體。另外，胚胎脫離卵囊之后的浮游生活階段，開口餌料直接影響孵化率。有關寶螺科貝類胚胎的研究較少，蒲利云等(2014)曾對虎斑寶貝(Cypraea tigris)成功開展了野生馴化和不同生物餌料馴化實驗，對本實驗具有重要借鑒和指導作用。