賈亦兵，陳玥昕，孔令洋

(1.濟(jì)寧市食品藥品檢驗(yàn)檢測(cè)中心，山東 濟(jì)寧 272100 2.長(zhǎng)春精誠(chéng)生物技術(shù)有限公司，吉林 長(zhǎng)春 130000)

氨糖美辛腸溶片為非甾體消炎藥，在進(jìn)入患者體內(nèi)后，通過刺激和恢復(fù)透明質(zhì)酸和蛋白聚糖的生物合成，從而抑制巨噬細(xì)胞產(chǎn)生超氧自由基及對(duì)關(guān)節(jié)軟骨有破壞作用的酶，能夠防止糖皮質(zhì)激素對(duì)軟骨細(xì)胞的損害及由某些非甾體類抗炎藥物對(duì)前列腺素的合成造成的不好的影響，以及可減少損傷細(xì)胞釋放內(nèi)毒性因子。吲哚美辛為消炎鎮(zhèn)痛藥，通過抑制前列腺素合成發(fā)揮解熱、鎮(zhèn)痛和抗炎作用，在體內(nèi)發(fā)揮吲哚美辛和氨基葡萄糖兩種藥物的協(xié)同作用。具有解熱、鎮(zhèn)痛、抗炎的作用，適用于強(qiáng)直性脊柱炎、類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎、肩關(guān)節(jié)周圍炎、風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎頸椎病、風(fēng)濕免疫科和骨科的對(duì)癥治療以及萊特爾綜合征、神經(jīng)痛等[1-2]。

目前，溶出度的測(cè)定方法主要有紫外-可見分光光度(UV)法和高效液相色譜(HPLC)法，近年來，HPLC法測(cè)定溶出度的品種呈現(xiàn)出越來越多的趨勢(shì)。UV法的定量方法有對(duì)照品對(duì)照法、吸光系數(shù)法和自身對(duì)照法等方法。采用UV法測(cè)定溶出度，雖然其方法簡(jiǎn)單方便，易于操作，但是其也有一定的缺陷，比如專一性不強(qiáng)，靈敏度和準(zhǔn)確度不高?，F(xiàn)行標(biāo)準(zhǔn)收載的溶出度使用紫外吸收系數(shù)法測(cè)定，吸收系數(shù)法的優(yōu)點(diǎn)是簡(jiǎn)單方便，常用于制劑的含量測(cè)定，無需配置對(duì)照品溶液。但是缺點(diǎn)是專屬性不強(qiáng)，準(zhǔn)確度不高，有輔料等干擾[3-5],如果雜質(zhì)或輔料在測(cè)定波長(zhǎng)處有吸收，則結(jié)果偏高。

根據(jù)試驗(yàn)的結(jié)果，HPLC法測(cè)定溶出度，能避免上述情況的發(fā)生，有利于藥品質(zhì)量的控制。比紫外法能更真實(shí)地反映藥品的質(zhì)量。

1 儀器和試劑

1.1 儀器 LOGAN UDT-812A-12全自動(dòng)溶出度系統(tǒng)；島津UV2550紫外分光光度計(jì)；安捷倫1200系列高效液相色譜儀(包含有G1310A 低壓四元泵、G1316A TCC柱溫箱、G1329B自動(dòng)進(jìn)樣器、G1314B UWD可變波長(zhǎng)紫外檢測(cè)器)；Mettlor XS205DU電子分析天平；KQ-500VDE型雙頻數(shù)控超聲波清洗器(昆山市超聲設(shè)備公司)。

1.2 試劑 純化水，冰醋酸(分析純)，乙腈(色譜純)，吲哚美辛對(duì)照品(批號(hào)：100258-200904，含量：99.9%，中國(guó)藥品生物制品檢定所)，氨糖美辛腸溶片(浙江惠松制藥有限公司，批號(hào)：171108、180102、180312)。

2 試驗(yàn)方法

2.1 色譜條件 Agilent C18色譜柱(4.6 mm×250 mm，5 μm)， 0.1 mol·L-1的冰醋酸溶液-乙腈(50∶50)為流動(dòng)相，柱溫：35 ℃，流速：1.00 mL·min-1，檢測(cè)波長(zhǎng)為320 nm。

2.2 溶出方法 取氨糖美辛腸溶片6片，照溶出度與釋放度測(cè)定法(通則0931第一法方法2)[6-7]。以0.1 mol·L-1的鹽酸溶液為溶出介質(zhì)，轉(zhuǎn)速為100 rpm，2 h后，立即將轉(zhuǎn)籃升出液面，觀察氨糖美辛腸溶片沒有出現(xiàn)裂縫或者崩解現(xiàn)象。然后再把轉(zhuǎn)籃轉(zhuǎn)移至預(yù)熱至37 ℃的1 000 mL磷酸鹽緩沖液(pH 6.8)中，轉(zhuǎn)速保持100 rpm不變，經(jīng)45 min后，將溶液取出用微孔濾膜過濾，取續(xù)濾液作為供試品溶液。

2.3 線性關(guān)系考察 取吲哚美辛對(duì)照品0.010 29 g，用流動(dòng)相溶解并稀釋成0.1 mg·mL-1的溶液，作為對(duì)照品儲(chǔ)備液。精密量取1、2、3、5、7.5、10 mL，置100 mL容量瓶中，加流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻。分別取20 μL進(jìn)入色譜儀檢測(cè)。以吲哚美辛峰面積為縱坐標(biāo)，以濃度為橫坐標(biāo)，得回歸方程為Y= 76 959.7X+2 269.7，r=0.999 9(n=6)。吲哚美辛濃度在1.03～10.3 μg·mL-1濃度范圍內(nèi)，濃度與峰面積呈良好的線性關(guān)系。

2.4 輔料干擾試驗(yàn) 取相當(dāng)于一粒樣品的輔料的量的輔料，置100 mL的容量瓶中，用溶出介質(zhì)稀釋到刻度，搖勻。用微孔濾膜過濾，取續(xù)濾液。照“2.1”項(xiàng)下的色譜條件，在吲哚美辛主峰保留時(shí)間±10%處未檢測(cè)到干擾峰。說明在該色譜條件下，輔料對(duì)其溶出量無影響(見圖1)。

2.5 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取“2.2”項(xiàng)下的供試品溶液，精密量取20 μL，注入液相色譜儀，每小時(shí)進(jìn)樣1次，測(cè)定吲哚美辛的峰面積，共考察12 h，峰面積RSD為0.4%。結(jié)果表明，在12 h內(nèi)供試品溶液的性質(zhì)穩(wěn)定(見圖1)。

圖1 輔料空白色譜圖

2.6 回收率試驗(yàn) 分別精密稱取樣品與對(duì)照品及 3 份處方配比量的輔料，制成相當(dāng)于標(biāo)示量的80%、100%、120% 的模擬片各3份，置于轉(zhuǎn)籃中，轉(zhuǎn)移至預(yù)熱至37 ℃的1 000 mL磷酸鹽緩沖液(pH 6.8)中，轉(zhuǎn)速為100 rpm，經(jīng)過45 min，取溶液濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液。另精密稱取25 mg吲哚美辛對(duì)照品，置100 mL量瓶中，加50 mL甲醇溶解(必要時(shí)可加熱促其溶解，放冷后)，加入 pH 6.8 磷酸鹽緩沖液稀釋至刻度，搖勻。量取 5.00 mL，置于 50 mL 量瓶中，加溶出介質(zhì)將其稀釋至刻度，搖勻，作為對(duì)照品溶液。取對(duì)照品溶液和供試品溶液20 μL，注入液相色譜儀，按“2.1”項(xiàng)下條件測(cè)定，計(jì)算回收率，結(jié)果見表1。試驗(yàn)結(jié)果表明：回收率良好，平均回收率為99.9%(RSD=0.3%，n=9)。

表1 回收率試驗(yàn)測(cè)定結(jié)果

2.7 供試品溶出度測(cè)定 紫外分光光度法：取微孔濾膜過濾后的續(xù)濾液作為供試品溶液，在(320±3)nm 的波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)所規(guī)定的吸收系數(shù)為196，計(jì)算氨糖美辛腸溶片中吲哚美辛的溶出量。

高效液相色譜法：取過濾后的續(xù)濾液作為供試品溶液，精密量取20 μL，注入液相色譜儀，照含量測(cè)定法進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果見圖2、表2。

3 討論

3.1 與原標(biāo)準(zhǔn)相比，新的溶出度測(cè)定方法靈敏度高，專屬性高，準(zhǔn)確度高。如表3所示，紫外法的溶出結(jié)果明顯較高，關(guān)鍵因素很可能是輔料在該波長(zhǎng)下有吸收度，高效液相色譜法可以很好地避免這一現(xiàn)象，賦形劑的質(zhì)量不同，紫外吸收影響的程度也不同。

3.2 測(cè)得3批樣品的含量為97.6%、97.2%、96.8%，用HPLC和紫外法測(cè)得的溶出度如上表3，發(fā)現(xiàn)溶出度結(jié)果與自身含量差異過大的情況逐漸增多，尤其是膠囊劑、片劑等劑型的品種。推測(cè)為藥品輔料的質(zhì)量參差不齊，從而對(duì)藥品檢驗(yàn)產(chǎn)生一定的干擾，此點(diǎn)應(yīng)當(dāng)給以重視。

3.3 本文對(duì)氨糖美辛腸溶片中吲哚美辛的溶出度的進(jìn)行直接測(cè)定，可在同一色譜條件下與含量同時(shí)進(jìn)行測(cè)定，準(zhǔn)確簡(jiǎn)單，節(jié)省了人力物力，提高了工作效率[8]。

4 結(jié)論

該方法準(zhǔn)確、靈敏，可以為氨糖美辛腸溶片的質(zhì)量控制提供依據(jù)。