鄧攀，黃素榮，劉旭海，張細(xì)和，李德安，陳小榮，張欽

(1.江中藥業(yè)股份有限公司，江西 南昌 330096；2.南昌市第九醫(yī)院制劑室，江西 南昌 330002)

世界范圍內(nèi)的金粟蘭科植物有5屬、70余種，分布于我國境內(nèi)的有3屬、16種和5變種，其中草珊瑚屬植物草珊瑚是唯一被收入于《中國藥典》的金粟蘭科植物[1]。草珊瑚，又名九節(jié)花、骨風(fēng)消、九節(jié)蘭等，屬金粟蘭科植物，其干燥地上部分稱之為九節(jié)茶，干燥全草稱之為腫節(jié)風(fēng)[2]。腫節(jié)風(fēng)清熱涼血，活血消斑，祛風(fēng)通絡(luò)，具有抗炎、抗腫瘤等多重功效[3]，有“中藥抗生素”之美譽(yù)[4]，同時(shí)還具有類人參的機(jī)體免疫調(diào)節(jié)功能[5]。腫節(jié)風(fēng)及其制劑毒副作用小，小鼠靜脈注射半數(shù)致死量為7.78 g/kg，腹腔注射最大安全量51.2 g/kg，臨床安全性極佳[6]，可運(yùn)用于急性扁桃體炎、病毒性肝炎、骨折、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎等諸多疾病的治療[7]。

腫節(jié)風(fēng)藥材化學(xué)成分豐富，生物活性多，藥理作用廣泛，在復(fù)方草珊瑚含片、血康口服液、新癀片等多種中藥制劑中均有運(yùn)用[8]，全國以腫節(jié)風(fēng)為原料生產(chǎn)中成藥的廠家已有50余家，產(chǎn)值達(dá)數(shù)億元。近年來，國內(nèi)外對于腫節(jié)風(fēng)的有效成分及其藥理作用進(jìn)行了大量的實(shí)驗(yàn)研究[9-10]，取得了豐碩的研究成果，這也在一定程度上加速了腫節(jié)風(fēng)的產(chǎn)業(yè)化運(yùn)用，但對于腫節(jié)風(fēng)的提取工藝，特別是貼近工業(yè)化大生產(chǎn)的提取工藝研究相對較少。針對腫節(jié)風(fēng)工業(yè)化大生產(chǎn)過程中的提取效率低、藥材利用不充分等一系列問題，分析探究腫節(jié)風(fēng)提取過程中各參數(shù)對提取效果的影響至關(guān)重要。本文將圍繞腫節(jié)風(fēng)提取過程的煎煮和醇沉兩大關(guān)鍵工序展開深入研究，通過單因素試驗(yàn)和正交試驗(yàn)，全面探討腫節(jié)風(fēng)工業(yè)化提取過程的影響因素，為實(shí)現(xiàn)日漸稀缺的腫節(jié)風(fēng)資源[11]的最大化利用奠定基礎(chǔ)。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

Waters e2695高效液相色譜儀(美國Waters公司)；Waters2998二極管陣列檢測器(美國Waters公司)；EV400旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(北京萊伯泰科儀器股份有限公司)；SECURA125-1CN電子天平、SECURA224-1CN電子天平、BSA5201電子天平(賽多利斯科學(xué)儀器北京有限公司)；Millipore Direct-Q3UV超純水機(jī)(美國密理博公司)。

1.2 試藥

腫節(jié)風(fēng)藥材由江中藥業(yè)股份有限公司提供；異嗪皮啶對照品購于中國食品藥品檢定研究院；95%乙醇(分析純)購于廣東光華科技股份有限公司；色譜乙腈購于美國霍尼韋爾公司；甲醇(分析純)、磷酸(分析純)、乙酸乙酯(分析純)均購于西隴科學(xué)股份有限公司。

2 實(shí)驗(yàn)方法

2.1 腫節(jié)風(fēng)水煎濃縮液的制備

腫節(jié)風(fēng)水煎濃縮液的制備：取腫節(jié)風(fēng)藥材100 g，按照藥材重量依次加入17倍、16倍水煎煮2次，一煎2 h，二煎1.5 h，合并煎煮液，過濾后濃縮至相對密度1.15。

2.2 腫節(jié)風(fēng)浸膏的制備

取腫節(jié)風(fēng)水煎濃縮液400 g，按照實(shí)驗(yàn)要求加入指定濃度乙醇，至醇量達(dá)65%，靜置24 h，過濾后濃縮至相對密度1.24～1.26。

2.3 含量測定方法

取本品0.5 g，精密稱定，加水約10 mL定量轉(zhuǎn)移至分液漏斗中，用乙酸乙酯提取5次(10 mL、10 mL、10 mL、10 mL、5 mL)，合并乙酸乙酯提取液，定量轉(zhuǎn)移至50 mL量瓶中，加乙酸乙酯至刻度，搖勻，精密量取5 mL至蒸發(fā)皿中，蒸干，殘?jiān)蛹状既芙猓哭D(zhuǎn)移至25 mL量瓶中，并稀釋至刻度，搖勻。處理后樣品進(jìn)高效液相色譜儀分析。色譜條件：Agilent 5 HC-18(2)(250 mm×4.6 mm，5 μm)，乙腈-0.1%磷酸水溶液(20∶80)為流動(dòng)相；檢測波長為344 nm，柱溫為30℃，進(jìn)樣量20 μL。

3 結(jié)果與討論

腫節(jié)風(fēng)的提取過程主要包括煎煮、濃縮、醇沉、乙醇回收這4個(gè)工序，而其中最為關(guān)鍵的是煎煮和醇沉兩個(gè)工序。煎煮工序是腫節(jié)風(fēng)提取過程的起始階段，煎煮工序各工藝參數(shù)直接影響到腫節(jié)風(fēng)藥材的利用率，高效的藥材煎煮過程是保證腫節(jié)風(fēng)提取全過程得率的前提條件。醇沉工序可視為腫節(jié)風(fēng)水煎濃縮液的純化過程，適度的醇沉對于確保藥效至關(guān)重要。

3.1 煎煮工藝參數(shù)研究

3.1.1 不同部位腫節(jié)風(fēng)藥材煎煮結(jié)果

表1 不同部位腫節(jié)風(fēng)藥材煎煮結(jié)果

注:①“水膏”代指腫節(jié)風(fēng)水煎濃縮液

有研究表明，不同部位腫節(jié)風(fēng)藥材中關(guān)鍵有效成分異嗪皮啶含量存在差異，腫節(jié)風(fēng)藥材根中異嗪皮啶成分含量最高[12]。為進(jìn)一步探討不同部位腫節(jié)風(fēng)藥材對提取過程的影響，分別選用同批次來源的腫節(jié)風(fēng)全草、腫節(jié)風(fēng)根莖、腫節(jié)風(fēng)葉制備腫節(jié)風(fēng)水煎濃縮液。數(shù)據(jù)顯示(如表1)，不同部位腫節(jié)風(fēng)藥材制備的腫節(jié)風(fēng)水煎濃縮液中異嗪皮啶含量差異顯著，腫節(jié)風(fēng)根莖制備的水煎濃縮液含量達(dá)0.902 mg/g，遠(yuǎn)高于腫節(jié)風(fēng)葉制備的水煎濃縮液(0.402 mg/g)。特別值得注意的是，使用腫節(jié)風(fēng)葉進(jìn)行煎煮所得的水煎濃縮液得率最高。與使用腫節(jié)風(fēng)根莖相比，腫節(jié)風(fēng)葉制備的水煎濃縮液得率要高出4.50%。使用腫節(jié)風(fēng)藥材制備飲片的前處理過程通常都會損失部分的腫節(jié)風(fēng)根莖和腫節(jié)風(fēng)葉，而如果前處理過程中各部位的腫節(jié)風(fēng)藥材損失嚴(yán)重失衡，將直接影響后工序的提取得率及關(guān)鍵有效成分含量。

3.1.2 腫節(jié)風(fēng)煎煮正交試驗(yàn)

為保證藥材中有效成分充分溶出，傳統(tǒng)中藥熬制過程通常會在起始階段進(jìn)行藥材的溫浸。同時(shí)，考慮到腫節(jié)風(fēng)內(nèi)含有大量的有機(jī)酸類物質(zhì)[13]，有必要對腫節(jié)風(fēng)煎煮過程的煎煮用水pH、浸泡溫度及浸泡時(shí)間開展深入研究。為考察各因素對腫節(jié)風(fēng)提取效率的影響，以異嗪皮啶轉(zhuǎn)移率為評價(jià)指標(biāo)，采用L9(34)正交試驗(yàn)法對上述因素進(jìn)行考察，正交試驗(yàn)因素與水平表見表2。

表2 L9(34)正交試驗(yàn)因素與水平

表3 正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)及結(jié)果

以極差分析法對比結(jié)果顯示(如表3)，對異嗪皮啶轉(zhuǎn)移率影響最大的因素是浸泡時(shí)間，這說明煎煮前對藥材的適當(dāng)浸泡對于確保提取過程異嗪皮啶轉(zhuǎn)移率至關(guān)重要。單從異嗪皮啶轉(zhuǎn)移率看，其最佳組合是提取pH 6.0、浸泡溫度60℃、浸泡時(shí)間60 min。

3.1.3 腫節(jié)風(fēng)中試實(shí)驗(yàn)

表4 腫節(jié)風(fēng)中試實(shí)驗(yàn)結(jié)果

注:①“水膏”代指腫節(jié)風(fēng)水煎濃縮液

為進(jìn)一步驗(yàn)證煎煮前浸泡時(shí)間對腫節(jié)風(fēng)提取效率的影響，本次實(shí)驗(yàn)在煎煮開始前采用60℃溫水分別對藥材進(jìn)行0 min、30 min和60 min浸泡。結(jié)果顯示(如表4)，浸泡60 min的腫節(jié)風(fēng)提取水膏得率及異嗪皮啶含量均高于浸泡0 min和30 min腫節(jié)風(fēng)提取過程，其中水膏得率比浸泡0 min腫節(jié)風(fēng)提取過程高出約6.67%。這充分說明適當(dāng)?shù)募逯笄敖輹r(shí)間有利于提升腫節(jié)風(fēng)提取效率，與正交試驗(yàn)結(jié)果一致。需要指出的是，中藥大生產(chǎn)過程綜合成本的控制尤為重要，增加煎煮前浸泡時(shí)間勢必延長產(chǎn)品生產(chǎn)周期，從而導(dǎo)致人力、物耗等方面成本的增加，所以腫節(jié)風(fēng)提取過程是否進(jìn)行煎煮前浸泡以及浸泡的時(shí)間的選取，必須進(jìn)行系統(tǒng)的綜合成本考量，以確保生產(chǎn)效益最大化。

3.2 醇沉工藝參數(shù)研究

3.2.1 醇沉溫度研究

溫度是影響液體中物質(zhì)溶出的關(guān)鍵指標(biāo)。結(jié)合大生產(chǎn)過程實(shí)際可控溫度范圍，本文選取4℃和25℃這兩個(gè)溫度指標(biāo)，深入探討了醇沉溫度對腫節(jié)風(fēng)水煎濃縮液醇沉效果的影響。與4℃醇沉過程相比較(如表5)，25℃醇沉后的腫節(jié)風(fēng)浸膏重量相對較高，醇沉藥渣重量較低，且腫節(jié)風(fēng)浸膏異嗪皮啶總量較大。這表明，保持醇沉過程的相對高溫(25℃)，有利于提升腫節(jié)風(fēng)浸膏的醇沉過程得率，同時(shí)減少醇沉過程異嗪皮啶的損耗，進(jìn)而保證產(chǎn)品療效。

表5 醇沉溫度研究結(jié)果

注:①“水膏”代指腫節(jié)風(fēng)水煎濃縮液

3.2.2 添加乙醇濃度研究

乙醇是腫節(jié)風(fēng)醇沉過程的關(guān)鍵性物料，醇沉過程所添加的乙醇濃度對于腫節(jié)風(fēng)醇沉效果有著重大影響。濃度梯度乙醇添加實(shí)驗(yàn)顯示(如圖1)，隨著添加乙醇濃度逐步升高，醇沉后腫節(jié)風(fēng)浸膏中異嗪皮啶總量呈拋物線分布，其中使用85%乙醇所得腫節(jié)風(fēng)浸膏的異嗪皮啶總量最低。因此，在腫節(jié)風(fēng)工業(yè)化大生產(chǎn)過程中，適當(dāng)添加乙醇濃度的選取對于確保腫節(jié)風(fēng)有效成分提取效率至關(guān)重要。

注:“添加乙醇濃度”指的是向腫節(jié)風(fēng)水煎濃縮液中添加的，使其醇量達(dá)65%，所使用的乙醇濃度圖1 添加乙醇濃度研究結(jié)果

4 結(jié)論

中藥是中華民族傳承千年的歷史瑰寶，獨(dú)具特色的中藥理論在防病治病等方面的特殊功效受到越來越多的關(guān)注。然而，多年來國內(nèi)大多數(shù)中藥產(chǎn)品均以廉價(jià)的中藥材及其飲片形式出口，龐大且不斷拓展的國際天然藥物市場長期為日本、韓國等國家所占據(jù)，排除貿(mào)易壁壘等多方面因素，這一現(xiàn)狀與我國落后的中藥生產(chǎn)水平也是密切相關(guān)的。為充分利用優(yōu)質(zhì)的腫節(jié)風(fēng)資源，提升腫節(jié)風(fēng)提取技術(shù)水平，本文對腫節(jié)風(fēng)工業(yè)化提取工藝展開了深入研究。結(jié)果表明，不同部位腫節(jié)風(fēng)藥材對提取得率和異嗪皮啶含量均有重大影響，腫節(jié)風(fēng)藥材前處理過程應(yīng)盡可能減少物料損耗，特別是物料的不平衡損耗。此外，煎煮前對藥材的適當(dāng)浸泡對于確保提取過程異嗪皮啶轉(zhuǎn)移率至關(guān)重要。值得注意的是，醇沉溫度越高，腫節(jié)風(fēng)浸膏的醇沉過程得率越高，而醇沉后腫節(jié)風(fēng)浸膏中異嗪皮啶總量與添加乙醇濃度呈拋物線分布，其中使用85%乙醇所得腫節(jié)風(fēng)浸膏的異嗪皮啶總量最低。中藥工業(yè)化大生產(chǎn)工藝源于基礎(chǔ)研究，而又不完全等同于基礎(chǔ)研究，大生產(chǎn)工藝的成型與優(yōu)化應(yīng)當(dāng)是給予質(zhì)量、成本、安全以及可操作性等方面的綜合考量。本實(shí)驗(yàn)關(guān)于腫節(jié)風(fēng)煎煮和醇沉兩工序的工藝研究成果，對于腫節(jié)風(fēng)工業(yè)化提取過程意義重大。