趙巍 李琳 張肖潔 何英 蔣萍 龍培濱 柳平平 王丹丹

[摘要]目的 探討RUNX3和p53在結(jié)直腸鋸齒狀病變及結(jié)直腸癌組織中的表達及意義。方法 選擇2012年1月～2018年1月我院病理科確診的262例結(jié)直腸鋸齒狀病變，其中增生性息肉（HP）87例，廣基鋸齒狀息肉/腺瘤（SSA/P）96例，傳統(tǒng)鋸齒狀腺瘤（TSA）79例;另選取60例正常腸黏膜標本以及60例結(jié)直腸癌（CRC）標本。通過免疫組化染色對各標本中RUNX3和p53的表達進行分析和評價。結(jié)果 RUNX3陽性表達率在正常腸黏膜、HP、SSA/P、TSA、CRC中逐漸降低，在SSA/P、TSA及CRC中明顯降低;SSA/P、TSA、CRC與正常腸黏膜及HP的RUNX3陽性率比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。p53陽性表達率在正常腸黏膜、HP、SSA/P、TSA、CRC中逐漸升高，在SSA/P、TSA及CRC中明顯升高;SSA/P、TSA、CRC與正常腸黏膜及HP的p53陽性率比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。結(jié)論 RUNX3和p53在鋸齒狀病變到CRC的發(fā)生過程中起作用，兩者可能是促進鋸齒狀腺瘤惡變的危險因素，對鋸齒狀腺瘤的患者預(yù)測CRC的發(fā)生具有一定的臨床價值。

[關(guān)鍵詞]RUNX3;p53;結(jié)直腸鋸齒狀病變;免疫組化

[中圖分類號] R734.2? ? ? ? ? [文獻標識碼] A? ? ? ? ? [文章編號] 1674-4721（2019）7（b）-0040-03

[Abstract] Objective To investigate the expression and significance of RUNX3 and p53 in colorectal serrated lesions and colorectal cancer. Methods A total of 262 specimens of colorectal serrated lesions diagnosed in the pathology department of our hospital from January 2012 to January 2018 were selected， including 87 cases of hyperplastic polyps （HP）， 96 cases of sessile serrated adenoma/polyp （SSA/P）， and 79 cases of traditional serrated adenoma （TSA）. Another 60 normal intestinal mucosa and 60 colorectal cancer （CRC） specimens were selected. The expression of RUNX3 and p53 in each specimen was analyzed and evaluated by immunohistochemical staining. Results The positive expression rate of RUNX3 gradually decreased in normal intestinal mucosa， HP， SSA/P， TSA， CRC， and significantly decreased in SSA/P， TSA and CRC. The positive rate of RUNX3 between SSA/P， TSA， CRC and normal intestinal mucosa， HP was statistically significant （P<0.05）. The positive expression rate of p53 increased gradually in normal intestinal mucosa， HP， SSA/P， TSA， CRC， and increased significantly in SSA/P， TSA and CRC. The positive rate of p53 between SSA/P， TSA， CRC and normal intestinal mucosa， HP was statistically significant （P<0.05）. Conclusion RUNX3 and p53 play the roles in the occurrence of serrated lesions to CRC. They may be the risk factors of the progress of serrated adenoma to adenocarcinoma. The detection of RUNX3 and p53 in serrated adenoma patients can help to predict the occurrence of CRC.

[Key words] RUNX3; p53; Colorectal serrated lesion; Immunohistochemistry

結(jié)直腸癌（colorectal cancer，CRC）是我國最常見的惡性腫瘤之一。國外有研究顯示大部分的CRC是由“腺瘤-癌”的經(jīng)典途徑發(fā)展而來，約35%的CRC是由鋸齒狀途徑發(fā)展而來[1]。鋸齒狀腺瘤（serrated adenoma，SA）的惡變率較高，發(fā)展迅速，因此引起人們的廣泛關(guān)注。WHO（2010）消化系統(tǒng)腫瘤新分類把鋸齒狀病變分為4類[2]：增生性息肉（hyperplastic polyp，HP）、廣基鋸齒狀息肉/腺瘤（sessile serrated adenoma/polyp，SSA/P）、傳統(tǒng)鋸齒狀腺瘤（traditional serrated adenoma，TSA）、鋸齒狀腺癌（serrated adenocarcinoma，SAC）。這些病變經(jīng)歷了多個階段，有多種因素及多個基因共同參與，引起基因?qū)W及多種細胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的異常，最終導(dǎo)致鋸齒狀病變發(fā)展為CRC[3-7]。

RUNX3（runt-related transcription factor 3）是一種抑癌基因，國外研究顯示[7]，其在人類腸道腫瘤中表達異常。RUNX3能指導(dǎo)TGF-β信號通路過程，通過抑制細胞增生、促進細胞凋亡，在CRC的發(fā)生發(fā)展過程中扮演著重要角色。p53基因是另一種抑癌基因，其能維持細胞的正常增殖，當發(fā)生突變時，抑制癌細胞的功能就會喪失，從而導(dǎo)致細胞出現(xiàn)惡性轉(zhuǎn)化最終發(fā)展為CRC。本研究旨在探討RUNX3和p53在結(jié)直腸鋸齒狀病變及CRC中的表達情況，為CRC的預(yù)防提供臨床依據(jù)，現(xiàn)報道如下。

1資料與方法

1.1一般資料

收集2012年1月～2018年1月我院病理科確診為息肉的2814例標本，進行回顧性閱片。根據(jù)WHO（2010）消化系統(tǒng)腫瘤分類標準，由3名病理科醫(yī)師從上述標本中篩選出鋸齒狀病變262例，其中HP 87例，SSA/P 96例，TSA 79例。另選取正常腸黏膜及CRC各60例，進行免疫組化染色。HP病理診斷標準[8]：①膨脹細長的隱窩，表淺1/3～1/2為鋸齒狀結(jié)構(gòu)，基底1/2為非鋸齒狀結(jié)構(gòu);②細胞核小并且一致，細胞形態(tài)規(guī)整，靠近基底側(cè)排列規(guī)則;③被覆成熟的、結(jié)構(gòu)正常的柱狀細胞及杯狀上皮細胞。SSA/P病理診斷標準[9]：①鋸齒狀隱窩結(jié)構(gòu)明顯異常，腺體扭曲擴張;隱窩基底部呈分枝狀、L型或倒置T型;②多累及下1/3隱窩，上皮/間質(zhì)>50%，底部的隱窩可見成熟的杯狀細胞;③整個隱窩扭曲變形，增殖區(qū)位于隱窩側(cè)壁，呈不對稱分布。TSA病理診斷標準[10]：①腺體呈明顯彌漫的鋸齒狀輪廓，具有明顯異型增生，細胞質(zhì)呈彌漫嗜酸性;②可見異位、擴張的隱窩。排除標準：病理切片不完整或不能完全符合上述診斷標準。本研究經(jīng)醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會批準，符合醫(yī)學(xué)倫理學(xué)規(guī)定。

1.2主要試劑

RUNX3抗體購于日本MBL公司;p53抗體購于北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司。

1.3方法

標本經(jīng)4%中性甲醛固定，常規(guī)石蠟包埋，免疫組化染色采用Envision法，實驗步驟按照試劑盒說明書進行，以PBS代替一抗設(shè)陰性對照，已知陽性結(jié)直腸腺體組織為陽性。

1.4評價標準

RUNX3和p53的陽性表達均定位于細胞核。3名病理科醫(yī)師負責判讀各免疫組化結(jié)果，陽性的標準定為棕褐色、棕黃色及黃色。以組織切片中細胞的染色程度和陽性細胞的比率進行評分。規(guī)定細胞染色用分數(shù)計算，細胞核的顏色越深則分數(shù)越高，棕褐色為3分，棕黃色為2分，黃色為1分，未著色為0分。在400倍顯微鏡下，隨機觀察5個高倍視野，每個高倍視野中計數(shù)100個陽性細胞，若陽性細胞所占比例為0%～9%，計為0分;10%～25%，計為1分，26%～50%，計為2分，51%～75%，計為3分，76%～100%，計為4分。將兩種評分的結(jié)果相加，若最終得分為1～3分判定為陰性，4～7分判定為陽性。

1.5統(tǒng)計學(xué)方法

采用SPSS 22.0統(tǒng)計學(xué)軟件進行數(shù)據(jù)分析，計數(shù)資料采用率表示，組間比較采用χ2檢驗，以P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2結(jié)果

2.1 RUNX3在正常腸黏膜、鋸齒狀病變及CRC組織中的表達

RUNX3的陽性表達定位于細胞核。RUNX3在正常腸黏膜中陽性率為80.0%（48/60）;在鋸齒狀病變中陽性率降低，HP、SSA/P、TSA中RUNX3陽性率分別為74.7%（65/87）、49.0%（47/96）、40.5%（32/79）;在CRC中RUNX3表達明顯減少，僅為35.0%（21/60）。RUNX3陽性表達率在正常腸黏膜、HP、SSA/P、TSA、CRC中逐漸降低，在SSA/P、TSA及CRC中明顯降低。SSA/P、TSA、CRC與正常腸黏膜及HP的RUNX3陽性率比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）;HP與正常腸黏膜的RUNX3陽性率比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）;SSA/P、TSA與CRC的RUNX3陽性率比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）。

2.2 p53在正常腸黏膜、鋸齒狀病變及CRC組織中的表達

p53的陽性表達也定位于細胞核。p53在正常腸黏膜中陽性率較低，為21.7%（13/60）;在鋸齒狀病變中陽性率升高，HP、SSA/P、TSA中p53陽性率分別為24.1%（21/87）、47.9%（46/96）、51.9%（41/79）;在CRC中，p53表達明顯升高，為60.0%（36/60）。p53陽性表達率在正常腸黏膜、HP、SSA/P、TSA、CRC中逐漸升高，在SSA/P、TSA及CRC中明顯升高。SSA/P、TSA、CRC與正常腸黏膜及HP的p53陽性率比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）;HP與正常腸黏膜的p53陽性率比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）;SSA/P、TSA與CRC的p53陽性率比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）。

3討論

CRC是嚴重危害人類健康的惡性腫瘤，發(fā)病率位居惡性腫瘤的第3位，死亡率位居第4位[11]。目前我國的CRC發(fā)病率呈現(xiàn)上升趨勢[12]。研究表明，CRC發(fā)病率增長的主要原因之一是由HP轉(zhuǎn)變?yōu)镾SA，最終發(fā)展為SAC[3]，該通路涉及一系列基因?qū)W及多種細胞信號通路的異常。

RUNX3基因是近些年來發(fā)現(xiàn)的一種抑癌基因，其定位于人類染色體1號短臂1p36.1，在轉(zhuǎn)化生長因子β（transforming growth factor beta，TGF-β）介導(dǎo)的細胞周期調(diào)控、細胞分化和細胞凋亡過程中發(fā)揮著重要作用[13-14]。Fainaru等[15]研究發(fā)現(xiàn)，在CRC的分子靶點中，TGF-β信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路及其下游的信號分子是結(jié)直腸腺瘤轉(zhuǎn)變?yōu)镃RC的主要原因。RUNX3基因是一個調(diào)節(jié)TGF-β信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路下游的重要因子，極可能是TGF-β信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的靶點，一旦RUNX3出現(xiàn)異常，就會引起TGF-β信號通路異常發(fā)生腫瘤[16]。Subramaniam等[17]研究發(fā)現(xiàn)，HP、TSA中RUNX3的陽性表達與正常腸組織及管狀腺瘤相比有所下降。本研究結(jié)果顯示，HP、SSA/P及TSA中RUNX3陽性表達率分別為74.7%、49.0%、40.5%，在CRC中僅有35.0%。SSA/P、TSA及CRC中RUNX3陽性表達率明顯低于正常腸黏膜及HP，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05），提示RUNX3基因作為TGF-β細胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路下游的一個重要因子，其參與了TGF-β對上皮細胞生長的負性調(diào)控，RUNX3基因的表達下調(diào)可能是鋸齒狀病變發(fā)展為CRC的原因之一。

p53基因是一種抑癌基因，定位于17號染色體的短臂上。p53基因的主要功能是監(jiān)視細胞基因組的完整性，維持細胞的正常增殖，一旦細胞的基因被破壞，p53就能修復(fù)被破壞的基因。但是，如果p53自身發(fā)生突變，它的這種抑制癌細胞的功能就會喪失，從而導(dǎo)致細胞發(fā)生惡性轉(zhuǎn)化[18-19]。p53分為野生型和突變型，由于野生型p53的半衰期非常短，用免疫組化的方法無法檢測，而突變型p53的半衰期比較長，因此，本研究檢測的是突變型的p53[20]。本研究結(jié)果顯示，突變的p53在正常腸黏膜中表達陽性率為21.7%，而SSA/P及TSA的陽性表達率逐漸升高，達47.9%、51.9%，在CRC中陽性率達到60.0%，提示突變型p53可能發(fā)生在CRC的早期，與CRC的發(fā)生相關(guān)。

綜上所述，RUNX3和p53在結(jié)直腸鋸齒狀病變到CRC的發(fā)生過程中起作用，兩者可能是促進SA惡變的危險因素，對SA的患者預(yù)測CRC的發(fā)生具有一定的臨床價值。

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（收稿日期：2019-02-19? 本文編輯：任秀蘭）