韋林洪, 張 軍, 劉 俊

(揚州職業(yè)大學(xué), 江蘇 揚州 225009)

氯霉素滴眼液主要用來治療由大腸桿菌、流感嗜血桿菌、克雷伯菌、金黃色葡萄球菌、溶血性鏈球菌等敏感細(xì)菌引起沙眼、結(jié)膜炎、眼瞼緣炎、角膜炎等。其主要成分為氯霉素,輔料為硼酸、硼砂、醋酸苯汞、注射用水等,其含量測定的主要方法有微生物檢定法[1]、紫外分光光度法[2]、高效液相色譜法[3-4]等。微生物檢定法的測定原理與臨床應(yīng)用的要求一致,利用氯霉素能夠抑制細(xì)菌生長的特點來進(jìn)行含量測定,具有靈敏度高、樣品用量少、測定結(jié)果直觀等優(yōu)點,但存在操作繁瑣、測定時間長、對實驗操作人員的操作技能要求較高、實驗誤差大等缺點，限制了其應(yīng)用[5]。2010版和2015版《中國藥典》均采用高效液相色譜法測定其含量,在系統(tǒng)適用性試驗符合要求后,采用梯度洗脫法測定樣品中氯霉素的含量,該法分離效果好、準(zhǔn)確度高,但實驗操作繁瑣,需要熟練的操作人員,且難以滿足醫(yī)院和藥廠快速測定其含量的需要。文獻(xiàn)報道的紫外分光光度法未進(jìn)行方法學(xué)考察,本文采用紫外分光光度法測定氯霉素滴眼液的含量,并對分析方法的準(zhǔn)確度、精密度和專屬性等質(zhì)量指標(biāo)進(jìn)行考察。

1 儀器、試劑和溶液的制備

1.1 主要儀器

T6紫外分光光度計,北京普析通用儀器有限責(zé)任公司;AR2140電子天平,上海梅特勒公司。

1.2 主要試劑

氯霉素對照品(批號17010720,純度≥98.0%),江蘇綠葉生物科技有限公司;氯霉素滴眼液(8mL∶20mg,批號20171101、20171104、20171108),長春迪瑞制藥有限公司;95%乙醇、硼酸、硼砂、醋酸苯汞、庚烷磺酸鈉、磷酸二氫鉀、三乙胺、磷酸(以上均為分析純),國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司;純化水,Milli-Q凈化系統(tǒng)(美國Millipore公司)。

1.3 溶液的制備

1.3.1 對照品溶液的制備

用分析天平精確稱取于105℃干燥至恒重的氯霉素對照品0.2502g,置于100mL容量瓶中,加入95%乙醇10mL,振搖使其完全溶解,然后用純化水稀釋至刻度線,搖勻,得到濃度為2.502mg·mL-1的氯霉素對照品溶液,備用。

1.3.2 供試品溶液的制備

準(zhǔn)確吸取氯霉素滴眼液0.5mL于100mL的容量瓶中,用純化水稀釋至刻度線,搖勻,得到供試品溶液,備用。

1.3.3 空白輔料溶液的制備

根據(jù)氯霉素滴眼液處方規(guī)定,分別稱取7.5g硼酸、1.5g硼砂和0.01g醋酸苯汞于1000mL容量瓶中,用純化水稀釋至刻度線,搖勻。精密量取0.5mL置于100mL的容量瓶中,用純化水定容,搖勻,得到空白輔料溶液,備用。

2 方法與結(jié)果

2.1 測定波長的選擇

精密量取0.6mL濃度為2.502mg·mL-1的氯霉素對照品溶液和0.5mL氯霉素滴眼液分別置于100mL的容量瓶中,用純化水稀釋至刻度線,搖勻。以純化水為空白,分別將氯霉素對照品溶液、供試品溶液和空白輔料溶液在200～400nm波長范圍內(nèi)掃描,氯霉素對照品溶液和供試品溶液在278nm處有最大吸收,而空白輔料溶液在該波長處的吸光度趨于零,因此,選擇278nm作為測定波長。

2.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線的測繪

精密量取濃度為2.502mg·mL-1的氯霉素對照品溶液0.1、0.2、0.4、0.6、0.8mL分別置于100mL容量瓶中,用純化水稀釋至刻度線,搖勻,得到濃度分別為2.5、5、10、15、20μg·mL-1的系列對照品溶液。以純化水為空白,在278nm波長處測定吸光度,以氯霉素對照品溶液濃度C(μg·mL-1)為橫坐標(biāo),以吸光度A為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,見圖1。

圖1 氯霉素的標(biāo)準(zhǔn)曲線

氯霉素濃度在2.5～20μg·mL-1與吸光度線性關(guān)系良好,符合朗伯-比爾定律。其線性回歸方程為A=0.03108C+0.05051,相關(guān)系數(shù)為0.9996。

2.3 供試品的含量測定

取3批供試品,分別按1.3.2的方法制備供試品溶液。以純化水為空白,在278nm處分別測定供試品溶液的吸光度,重復(fù)3次。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計算樣品中氯霉素的含量,按下列公式計算氯霉素滴眼液標(biāo)示量的百分含量,測定結(jié)果見表1。

式中：C供為供試品溶液的濃度,μg·mL-1;100為供試品定容體積,mL;S為標(biāo)示量,8mL∶20mg;0.5為供試品取樣量,mL;1000為濃度換算系數(shù)。

2.4 加樣回收率測定

在200mL容量瓶中分別加入0.5mL氯霉素滴眼液,然后分別加入濃度為2.502mg·mL-1的氯霉素對照品溶液0.4、0.5、0.6mL(每個添加水平重復(fù)3次),用純化水稀釋至刻度線,搖勻。以純化水為空白,在278nm波長處測定吸光度,計算加樣回收率。試驗結(jié)果見表2。

表1 氯霉素滴眼液的含量測定結(jié)果(n=3)

表2 加樣回收率(n=3)

由表2可知:加樣回收率在98.0%～101.0%范圍內(nèi),表明該方法的準(zhǔn)確度好。

2.5 重復(fù)性試驗

在100mL容量瓶中分別加入0.4、0.5、0.6mL氯霉素滴眼液,用純化水稀釋至刻度線,搖勻,得到濃度分別為10、12.5、15μg·mL-1的樣品溶液。以純化水為空白,分別在278nm的波長處測定吸光度,考察方法的精密度。每個濃度重復(fù)3次,試驗結(jié)果見表3。

由表3可知:該方法的重復(fù)性在可接受范圍內(nèi),精密度符合要求。

2.6 穩(wěn)定性試驗

精密量取0.6mL氯霉素滴眼液置于100mL容量瓶中,用純化水稀釋至刻度線,搖勻,在室溫下放置0、1、2、3、4、5、6h后,以純化水為空白,分別在278nm波長處測定其吸光度,吸光度為0.526±0.05,該結(jié)果表明供試品溶液在6h內(nèi)穩(wěn)定性好。

表3 重復(fù)性試驗結(jié)果(n=3)

3 結(jié)論

本文采用紫外分光光度法測定氯霉素滴眼液的含量并考察了分析方法的準(zhǔn)確度、精密度、專屬性和穩(wěn)定性等質(zhì)量指標(biāo)。試驗結(jié)果表明:采用紫外分光光度法測定氯霉素滴眼液的含量具有較高的準(zhǔn)確度和精密度,該法操作簡單、快速、專屬性強(qiáng)、分析成本低。