1.湖南中醫(yī)藥高等?？茖W?；A醫(yī)學部,湖南 株洲 412012；2.湖南中醫(yī)藥高等?？茖W校附屬第一醫(yī)院，湖南 株洲 412000

大承氣湯由大黃、芒硝、厚樸和枳實4味中藥組成，方中大黃為君藥，行瀉熱通便之效；芒硝為臣藥，行瀉熱軟堅潤燥之效，助大黃通腑實積滯；枳實、厚樸共為佐使藥，有行氣散結，消痞除滿之效，共助大黃、芒硝蕩滌腸中積滯。全方用藥雖少，但其峻下熱結功效顯著，主治陽明腑實證、熱結旁流以及里熱實證之熱厥、痙病或發(fā)狂等。中醫(yī)學中并無膿毒血癥之謂，但究其臨床特點，其病機主要是熱毒積阻，氣血瘀滯，治宜清熱解毒，通腑利氣，活血化瘀。因此，大承氣湯對膿毒血癥有比較好的治療價值[1-2]，并進行了相關的實驗研究。

膿毒血癥是一種由感染引起的全身性炎癥反應，且伴隨感染出現(xiàn)的器官功能性損害的臨床綜合征[3-4]。膿毒血癥發(fā)生過程中，炎癥級聯(lián)反應啟動，刺激誘發(fā)細胞因子風暴，多種促炎性細胞因子和抑炎細胞因子被激活，大量淋巴細胞被誘導凋亡，導致機體的免疫調節(jié)機能紊亂，甚至被抑制[5-6]。在膿毒血癥病理過程中，免疫細胞過度激活和淋巴細胞受抑制的持續(xù)存在，會導致機體的免疫調節(jié)機能和淋巴細胞的分泌和增殖功能受到抑制，持續(xù)造成組織和器官損傷[7]。本次實驗旨在探討大承氣湯對膿毒血癥大鼠的免疫功能影響作用，探討和分析其內在的機理。

1 實驗材料

1.1 動物 SPF級SD大鼠，雌雄各半，體重180～220 g，購自湖南斯萊達景克實驗動物有限公司(許可證號：SCXK(湘) 2014-0003)。

1.2 藥物 大承氣湯藥物按大黃：厚樸：枳實：芒硝體質量比4∶5∶5∶3組成。藥材用蒸餾水清洗3次，再蒸餾水中浸泡30 min，武火將厚樸、枳實武火煮沸20 min后，改用文火煎煮10 min，再加入大黃續(xù)煎10 min后澄取煎液，頭煎和復煎液混勻，芒硝倒入，充分融化，用四層無菌紗布過濾，55 ℃水浴濃縮至含生藥1.0 g/mL，置4 ℃冰箱保存?zhèn)溆谩４姿釢娔崴善?，國藥準字H33021207，批號:150117，浙江仙琚制藥股份有限公司生產(chǎn)。

1.3 儀器和試劑 GHP-9160隔水式恒溫培養(yǎng)箱(上海一恒公司生產(chǎn))，分析天平(湖南湘儀公司)，臺式變頻TGL16M型高速冷凍離心機(長沙科威實業(yè)有限公司)，ELISA 酶標儀(Thermo公司)，IgA、IgG、IgM ELISA試劑盒(上海研謹生物科技有限公司)。

2 方法

2.1 腸源性膿毒癥模型制備[8]參照經(jīng)典的盲腸結扎穿刺法(ceca ligation and puncture，CLP)復制動物模型，2%戊巴比妥鈉腹腔注射麻醉大鼠后，大鼠板固定，手術常規(guī)消毒后，沿腹中線切開，在盲腸遠端結扎盲腸，18G針頭在結扎處遠端垂直于盲腸對穿盲腸2次，輕輕擠出腸內容物，復位，然后縫合。假手術組動物打開腹腔后，不結扎不對穿，鈍性攪動盲腸后縫合，不做其他處理。

2.2 動物分組及干預措施 模型動物按體重隨機分為模型組、大承氣湯5 g/kg組、大承氣湯10 g/kg組和激素組，另設正常組和假手術組，每組動物10只。動物給藥劑量按照體表面積折算法進行，其中正常組、模型組和假手術組動物生理鹽水灌胃，大承氣湯5 /kg組、大承氣湯10 g/kg組、激素組0.5 mg/kg分別灌胃對應藥物，所有動物給藥體積為10 mL/kg，連續(xù)7 d。

2.3 樣本取材和觀察指標 最后一次灌胃給藥結束后8 h，腹主動脈取大鼠外周血，低速冷凍離心分離血清，-70 ℃冰箱凍存?zhèn)錂z測各組動物血清IgA、IgG、IgM水平(ELISA法)；解剖大鼠，分離大鼠脾臟和胸腺，無菌生理鹽水沖洗干凈，分析天平稱重，分別計算脾臟指數(shù)和胸腺指數(shù)，其中脾臟(胸腺)指數(shù)=脾臟(胸腺)重量(g)/體重(kg)。

3 結果

3.1 大承氣湯對膿毒癥大鼠胸腺和脾臟指數(shù)的影響 從表1可知，模型組胸腺指數(shù)和脾指數(shù)顯著低于正常組和假手術組，說明膿毒血癥大鼠對免疫器官受到顯著的抑制作用(P< 0.01)；但在大承氣湯治療7 d后，膿毒血癥大鼠的胸腺指數(shù)和脾指數(shù)得到一定提高，和模型組相比有統(tǒng)計學意義(P<0.01或P<0.05)；與激素組相比，大承氣湯10 g/kg組胸腺指數(shù)和脾指數(shù)有一定程度提高(P<0.05)。結果表明大承氣湯可以保護膿毒血癥中免疫器官，對機體的正常免疫應答有正向調節(jié)作用。

組別n胸腺指數(shù)脾臟指數(shù)正常組102.026±0.182??5.492±0.428??模型組100.907±0.0922.617±0.119假手術組101.752±0.137??4.638±0.354??大承氣湯5g/kg組101.523±0.186?4.296±0.385?大承氣湯10g/kg組101.948±0.160??△5.081±0.407??△激素組101.605±0.142?4.335±0.373?

注：與模型組相比，*P<0.05，* *P<0.01；與激素組相比，△P<0.05，△△P<0.01。

3.2 大承氣湯對膿毒癥大鼠血清IgA、IgG、IgM水平的影響 正常組與模型組比較，模型組 IgG、IgA、IgM 含量顯著降低，差異具有統(tǒng)計學意義(P<0.01)，提示模型動物體內炎性因子大量釋放，導致外周血清中免疫細胞數(shù)目顯著減少；大承氣湯干預治療后，血清IgA、IgG、IgM水平能明顯的回升(P<0.01或P<0.05)，說明大承氣湯能促進機體的主動免疫反應；與激素組相比，大承氣湯10 g/kg組也明顯具有優(yōu)勢(P<0.05)。見表2。

組別nIgAIgGIgM正常組100.284±0.023??1.587±0.046??0.507±0.026??模型組100.129±0.0141.034±0.0370.204±0.019假手術組100.246±0.018??1.352±0.026??0.468±0.026??大承氣湯5g/kg組100.197±0.016?1.226±0.028? 0.411±0. 028? 大承氣湯10g/kg組100.255±0.020??△1.441±0.030??△0.482±0.033??△激素組100.224±0.026?1.305±0.029?0.419±0.027?

注：與模型組相比，*P<0.05，**P<0.01；與激素組相比，△P<0.05，△△P<0.01。

4 討論

在膿毒血癥病理過程中，促炎因子大量釋放的同時，也會激發(fā)大量抑炎因子被釋放，導致患者的正常免疫功能受到抑制[9-10]。在CLP復制膿毒血癥小鼠中，Hotchkiss等[11]研究發(fā)現(xiàn)動物體內存在淋巴細胞凋亡，原發(fā)性低免疫反應和T淋巴細胞免疫功能抑制。當膿毒血癥患者進入免疫抑制階段，過渡活化淋巴細胞會發(fā)生大概率凋亡，其增殖能力受到顯著抑制，導致機體自身免疫保護能力降低[12]。

藥理研究證實[13-14]，大承氣湯有攻下瀉熱逐瘀之效，其能降低腸粘膜和腸細胞膜通透性，減輕腸粘膜組織炎癥病理損傷，減少血清內毒素和炎性細胞因子的釋放。另外，大承氣湯能雙向調節(jié)巨噬細胞免疫功能，其適當劑量能促進正常巨噬細胞釋放TNF-α，TNF-α可進而作用于并激活T、B淋巴細胞，最終增強T、B淋巴細胞免疫功能[15]。胸腺和脾臟是機體重要的免疫器官，其體質量是反映免疫器官功能的重要指標，因此選用胸腺指數(shù)和脾臟指數(shù)來評價本實驗研究中膿毒血癥大鼠的免疫水平。研究結果表明：大承氣湯可明顯提高模型動物的胸腺指數(shù)和脾臟指數(shù)(P<0.01或P<0.05)，且呈現(xiàn)一定的劑量正相關性，可見大承氣湯可對抗膿毒血癥大鼠胸腺和脾臟萎縮，提高機體免疫能力。存在于血液、體液、組織液中的免疫球蛋白，是機體具有抗體活性的蛋白，可發(fā)揮抗感染免疫功能。血清中IgA、IgG、IgM水平的變化，能提示膿毒血癥病變進程和治療效果。實驗中，膿毒血癥大鼠血清IgA、IgG、IgM水平較正常組顯著降低(P<0.01)，提示其免疫反應受到抑制，機體免疫反應低下。大承氣湯可有效提高血清IgA、IgG、IgM水平(P<0.01或P<0.05)，說明其可有效調節(jié)漿細胞分泌球蛋白，參與機體體液免疫反應，提高機體免疫能力，從而減緩器官和組織免受損傷。綜合來看，大承氣湯可有效調節(jié)膿毒血癥中抗炎與抑炎失衡所導致的免疫功能紊亂，來發(fā)揮其治療作用，機理值得進一步深入探討。