鞠馥竹 趙文濤 劉元德 竇玉青

摘? 要：為提高我國(guó)晾曬煙資源利用效率，開發(fā)其新的用途，對(duì)來(lái)源于黃淮、西南、東南、東北、長(zhǎng)江中上游等5個(gè)產(chǎn)區(qū)的93份晾曬煙種質(zhì)進(jìn)行了農(nóng)藝性狀調(diào)查、化學(xué)成分測(cè)定以及遺傳多樣性分析。結(jié)果表明，不同種質(zhì)農(nóng)藝性狀及化學(xué)成分含量差異較大。不同性狀變異系數(shù)在7.60%～70.17%，其中，生育期的變異系數(shù)最小，總氯的變異系數(shù)最大。煙堿含量在1.20%～8.63%，鉀含量在0.91%～4.18%。從580對(duì)SSR引物中篩選出43對(duì)擴(kuò)增清晰、重復(fù)性和多態(tài)性好的引物，共擴(kuò)增獲得多態(tài)性條帶146個(gè)，多態(tài)性比例97.99%，Shannon’s指數(shù)為0.9379，Nei’s多樣性指數(shù)為0.5356。聚類分析表明，在相似系數(shù)0.50處可將93份晾曬煙種質(zhì)分為3類。東南煙區(qū)群體與黃淮煙區(qū)群體遺傳相似系數(shù)最大，為0.9580，而西南煙區(qū)群體與東北煙區(qū)群體遺傳相似系數(shù)最小，為0.7820。因此，93份晾曬煙種質(zhì)農(nóng)藝性狀、化學(xué)成分以及分子遺傳多樣性豐富，可為晾曬煙資源新用途的開發(fā)和利用提供物質(zhì)基礎(chǔ)和理論支持。

關(guān)鍵詞：晾曬煙;農(nóng)藝性狀;化學(xué)成分;SSR分子標(biāo)記

中圖分類號(hào)：S572.03????????? 文章編號(hào)：1007-5119（2019）02-0008-08????? DOI：10.13496/j.issn.1007-5119.2019.02.002

Abstract： In order to improve the utilization efficiency and to develop new utilization approaches of air/sun-cured tobacco germplasm resources， we conducted agronomic trait characterization， chemical composition determination and genetic diversity analyses using 93 air/sun-cured tobacco germplasms grown in five tobacco cultivation areas in China. The results showed that the agronomic traits and chemical components of different germplasms varied greatly. The coefficient of variation ranged from 7.60% to 70.17% in different traits. The coefficient of variation of the growth period is the smallest， and that of the total chlorine is the largest. The nicotine content ranged from 1.20% to 8.63%， and potassium content ranged from 0.91% to 4.18%. In addition， 43 pairs of primers with specific amplification were screened from 580 pairs of SSR primers， and 146 polymorphic bands were obtained， of which the polymorphic ratio was 97.99%. The Shannon's index was 0.9379， Nei's diversity index was 0.5356. The 93 tobacco germplasms were clustered into 3 groups with the genetic similarity coefficient of 0.50 by cluster analysis. Germplasms from different cultivation areas in many cases were not clustered? together. The genetic consistency between the population in the southwest cultivation area and the Huanghuai cultivation area was 0.9580， while the genetic consistency between the southwest cultivation area and the northeast cultivation area was 0.7820. These results will provide reference for screening and matching the parental germplasms for breeding of excellent mixed cigarette and oral tobacco.

Keywords： air/sun-cured tobacco; agronomic traits; chemical composition; SSR molecular marker

晾曬煙是指在陰涼通風(fēng)處晾制或利用陽(yáng)光調(diào)制而成的煙葉，主要有淺色晾煙和深色晾煙及曬紅煙和曬黃煙之分[1]。晾曬煙的外觀特征及化學(xué)品質(zhì)與烤煙類似，但含糖量較低，且煙堿含量及蛋白質(zhì)含量較高，煙味濃，勁頭大[1-2]。有研究認(rèn)為，在烤煙型卷煙中添加晾曬煙葉能有效降低焦油及CO含量，增加卷煙濃度、香氣豐富性、透發(fā)性及甜潤(rùn)感[2]。在混合型卷煙中使用適量的曬黃煙，能減弱其生理強(qiáng)度和刺激性，使其吃味醇和，香氣濃郁，味香色更加協(xié)調(diào)。由于晾曬煙葉的含糖量低于烤煙且組織疏松，燃燒性好，使其焦油釋放量低于烤煙，因此可以較好地控制焦油含量[3-4]。鑒于晾曬煙的優(yōu)異特點(diǎn)，還可作為口含煙的主要煙葉原料?？诤瑹煂儆谛滦蜔煵葜袩o(wú)煙氣煙草的一種，瑞典和美國(guó)則是主要消費(fèi)市場(chǎng)，瑞典式口含煙的原料是來(lái)源于世界各地的晾曬煙葉，美式口含煙主要采用深色明火烤煙及深色晾煙為原料[5]，由此可知口含煙最主要的煙葉原料便是晾曬煙。我國(guó)保存有曬晾煙資源共2000余份，且分布廣泛，香味風(fēng)格各異，不僅為優(yōu)質(zhì)的混合型卷煙提供了原料，同時(shí)也為篩選適合我國(guó)口含煙原料的優(yōu)質(zhì)種質(zhì)提供了豐富的物質(zhì)基礎(chǔ)。

目前晾曬煙的研究主要集中在親緣關(guān)系鑒定、農(nóng)藝性狀遺傳以及栽培調(diào)制等方面。張雪廷等[6]利用云南省煙草研究院開發(fā)的3000多對(duì)SSR引物對(duì)38份晾曬煙種質(zhì)進(jìn)行親緣關(guān)系分析，證明SSR分子標(biāo)記對(duì)曬煙種質(zhì)親緣關(guān)系的鑒定具有可行性。劉艷華等[7]利用SSR分子標(biāo)記的方法對(duì)新收集的26份曬黃煙與種質(zhì)庫(kù)6份資源進(jìn)行了遺傳多樣性分析，為曬黃煙資源的高效利用奠定了基礎(chǔ)。戴培剛等[8]利用8個(gè)晾曬煙種質(zhì)配制完全雙列雜交，并對(duì)其6個(gè)主要農(nóng)藝性狀進(jìn)行遺傳分析，結(jié)果表明多數(shù)農(nóng)藝性狀以加性效應(yīng)和顯性效應(yīng)為主，各效應(yīng)在不同農(nóng)藝性狀中所占的比例不同，為曬晾煙農(nóng)藝性狀的改良提供了理論依據(jù)。但晾曬煙應(yīng)用范圍相較烤煙并不廣泛，對(duì)于優(yōu)質(zhì)晾曬煙種質(zhì)的選擇缺乏合理的指導(dǎo)，本研究篩選了來(lái)源于不同產(chǎn)區(qū)的93份晾曬煙種質(zhì)進(jìn)行適應(yīng)性和多樣性的鑒定與評(píng)價(jià)，以期為晾曬煙資源的高效利用，優(yōu)質(zhì)混合型卷煙和新型煙草制品原料篩選以及新品種培育提供物質(zhì)基礎(chǔ)和理論指導(dǎo)。

1? 材料與方法

1.1? 試驗(yàn)材料

從2000余份晾曬煙中隨機(jī)篩選出原產(chǎn)地分別為山東、湖南、貴州、四川、吉林等15個(gè)省的種質(zhì)共93份，根據(jù)產(chǎn)區(qū)分為東北煙區(qū)（Population 1）、黃淮煙區(qū)（Population 2）、長(zhǎng)江中上游煙區(qū)（Population 3）、東南煙區(qū)（Population 4）以及西南煙區(qū)（Population 5）等5個(gè)群體（表1）。

1.2? 試驗(yàn)方法

1.2.1? 農(nóng)藝性狀調(diào)查? 試驗(yàn)于2016、2017年在山東臨沂沂水縣高莊鎮(zhèn)進(jìn)行，選擇肥力均勻、地力條件一致的田塊，93個(gè)品種，編號(hào)為S1—S93，田間種植順序排列，兩邊分別種植4行NC89為保護(hù)行，試驗(yàn)材料在田間順序排列，每個(gè)品種種植3行共60株，株行距110 cm×50 cm。田間管理和調(diào)制按當(dāng)?shù)亟y(tǒng)一模式進(jìn)行。在第一青果期，每個(gè)品種每行選擇有代表性的5株、3行共15株，按照《煙草種質(zhì)資源描述規(guī)范和數(shù)據(jù)標(biāo)準(zhǔn)》[9]進(jìn)行農(nóng)藝性狀調(diào)查。

1.2.2? 化學(xué)成分測(cè)定? 取調(diào)制后的中部煙葉樣品，磨粉，并利用Aataris II FT-NIR 光譜儀（Thermo Fisher 公司）進(jìn)行近紅外化學(xué)成分檢測(cè)。

1.2.3? DNA提取與PCR擴(kuò)增? 以每份種質(zhì)的嫩葉為材料，采用改良的CTAB法提取基因組DNA，利用1.0 %瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)DNA質(zhì)量。試驗(yàn)所用SSR引物來(lái)自BINDLER等[10]及TONG等[11-12]開發(fā)的引物，由上海生物工程有限公司合成。

PCR總反應(yīng)體系為10 μL，其中模板DNA 1.5 μL，2×Dream Taq Green PCR Master Mix 5 μL，正反向引物各0.5 μL，ddH2O 2.5 μL。擴(kuò)增反應(yīng)在T100? Thermal Cycler上進(jìn)行，擴(kuò)增程序?yàn)椋?4 ℃預(yù)變性5 min;94 ℃變性30 s，54 ℃退火30 s，72 ℃延伸1 min，共35個(gè)循環(huán);72 ℃延伸5 min，4 ℃保存。在10%非變性聚丙烯酰胺凝膠上對(duì)擴(kuò)增產(chǎn)物恒電壓150 V電泳1.5 h。用改進(jìn)的NaOH銀染方法進(jìn)行染色顯影。

1.2.4? 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)? 利用Excel計(jì)算農(nóng)藝性狀和化學(xué)成分含量的平均值、極差、標(biāo)準(zhǔn)差及變異系數(shù)。

將電泳圖譜中擴(kuò)增產(chǎn)物在同一位置的條帶賦值為1，弱帶或缺失的賦值為0，形成1、0數(shù)據(jù)矩陣。根據(jù)NEI等[13]和SHANNON等[14]的方法，以PopGene32軟件[15]在假定哈丁-溫伯格平衡條件下計(jì)算Shannon指數(shù)的估計(jì)值，同時(shí)計(jì)算群體內(nèi)遺傳一致度和群體間遺傳距離，并利用NTSYS2.11軟件[16]以UPGMA法進(jìn)行聚類分析。

2? 結(jié)? 果

2.1? 農(nóng)藝性狀分析

對(duì)93份晾曬煙種質(zhì)資源農(nóng)藝性狀進(jìn)行調(diào)查、

分析（表2），兩年試驗(yàn)結(jié)果表明，93份晾曬煙品種間主要農(nóng)藝性狀變異豐富，變異系數(shù)范圍為7.60%～44.27%。除產(chǎn)量以外，其他農(nóng)藝性狀2017年平均值均高于2016年，但年度間的變異系數(shù)差異不顯著。其中，生育期變異系數(shù)最小，為7.60%～8.04%，表明各種質(zhì)資源生態(tài)適應(yīng)性較強(qiáng)，在山東煙草生育期間均可成熟采收。產(chǎn)量變異系數(shù)最大，為38.54%～44.27%，范圍在255.41～2310 kg/hm2。其次是葉數(shù)，為28.92%～29.57%，范圍為8.78～40.4片/株。另外，2016年株高大于170 cm的有8份種質(zhì)，其中S75、S82、S22在2017年株高表現(xiàn)也較高。葉數(shù)大于30的有8份種質(zhì)，其中S27葉數(shù)最多，高達(dá)37～40;S1、S2兩份種質(zhì)葉數(shù)均低于10。

2.2? 化學(xué)成分含量分析

由表3可以看出，2017年煙葉平均鉀、總氮以及總糖含量低于2016年平均值，而煙堿、揮發(fā)堿和氯含量高于2016年平均值，但兩年間變異系數(shù)差異不顯著。化學(xué)成分整體變異系數(shù)范圍在13.34%～70.17%之間，變異豐富。其中總氯變異系數(shù)最高，為69.15%～70.17%，在相同環(huán)境和土壤條件下，品種間差異高達(dá)30.02倍?？偮群吭趦赡曛斜憩F(xiàn)均高于1.8%的有S10，S11以及S12;而S23、S35、S76以及S83含氯量則低于0.3%，且表現(xiàn)穩(wěn)定?？偟蛽]發(fā)堿的變異系數(shù)最小，分別為13.34%～14.45%、18.05%～20.49%。此外，煙堿和總糖含量在不同種質(zhì)間也存在較大差異，范圍分別為1.20%～8.63%、1.34%～7.84%。93份曬煙種質(zhì)平均煙堿、總糖含量分別為5.3%～5.5%、2.94%～3.04%，其中兩年煙堿含量高于4.5%的種質(zhì)幾乎占50%?？偺窃趦赡瓯憩F(xiàn)均低于2%的種質(zhì)有S5、S10、S19、S55以及S78，且所有低糖含量種質(zhì)的煙堿含量均高于4.5%，其中S5、S10、S19煙堿含量均大于7%。

2.3? 遺傳多樣性分析

2.3.1? 多態(tài)性SSR引物篩選? 從93份種質(zhì)中選取來(lái)自不同產(chǎn)地的12份材料進(jìn)行引物篩選，從580對(duì)引物中篩選出43對(duì)條帶清晰且多態(tài)性好的SSR引物。利用這43對(duì)引物對(duì)93份晾曬煙種質(zhì)資源進(jìn)行多態(tài)性擴(kuò)增，共獲得146個(gè)多態(tài)性條帶，多態(tài)性比率為97.99%（圖1）。

2.3.2? 群體內(nèi)遺傳多樣性分析? 根據(jù)原產(chǎn)地將93份種質(zhì)資源分為5個(gè)群體。群體1包括原產(chǎn)于吉林、遼寧、黑龍江的16份種質(zhì)，群體2包括原產(chǎn)于河南、山東的10份種質(zhì)，群體3包括原產(chǎn)于湖南的33份種質(zhì)，群體4包括原產(chǎn)于廣東、江蘇、浙江等省份的10份種質(zhì)，群體5包括原產(chǎn)于貴州、云南和四川的24份種質(zhì)。群體內(nèi)遺傳多樣性分析（表4）表明，群體3的遺傳多樣性指數(shù)為0.5359，其遺傳多樣性最高，向下依次是群體1、群體2和群體4，遺傳多樣性指數(shù)分別為0.5150、0.4804和0.4677。群體5的遺傳多樣性最小為0.4492。

2.3.3? 群體間遺傳多樣性分析? 利用PopGene32 軟件對(duì)5個(gè)群體的遺傳相似性進(jìn)行計(jì)算（表5）。群體2和群體4的遺傳相似性系數(shù)最高，為0.9580，遺傳距離最近，為0.0429。群體2與群體5遺傳相似系數(shù)次之，為0.8884。群體1與群體5遺傳相似系數(shù)最小，為0.7820，遺傳距離最遠(yuǎn)，為0.2460。

2.3.4? 聚類分析? 聚類分析結(jié)果表明（圖2），93份晾曬煙種質(zhì)的遺傳相似性系數(shù)在0.50～0.94之間。在相似系數(shù)為0.50時(shí)，可將93份種質(zhì)材料分成3大類群，第1類群有S2、S4、S17、S18、S67、S3、S81、S86、S6、S7、S19共11份種質(zhì)，這些種質(zhì)全部來(lái)自于吉林、黑龍江等東北地區(qū)及山東地區(qū)。第2類群包括S35、S53、S43、S74、S82、S83、S84、S88、S93、S64、S71、S65共12份種質(zhì)，這些種質(zhì)分別來(lái)自5個(gè)產(chǎn)區(qū)。第3類群包括兩個(gè)亞類，共70份種質(zhì)，其中第一個(gè)亞類有S23、S87、S70共3份種質(zhì)，其中S23和S87來(lái)自黃淮煙區(qū)，S70來(lái)自東南煙區(qū);第2亞類包括來(lái)源于5個(gè)產(chǎn)區(qū)的67份種質(zhì)。另外，SSR引物PT30215和PT20286可將同名種質(zhì)S82、S83、S84、S85、S87、S92區(qū)分開，其中分別來(lái)自安徽和遼寧的S82、S83遺傳距離最近;而來(lái)自山東的S92與其他同名資源遺傳距離最遠(yuǎn)。

3? 討? 論

3.1? 晾曬煙農(nóng)藝性狀評(píng)價(jià)

煙草品種的農(nóng)藝性狀、產(chǎn)量以及適應(yīng)性鑒定是優(yōu)異種質(zhì)篩選和優(yōu)良品種選育的必要程序。雷麗萍等[17]對(duì)12份云南曬煙品種進(jìn)行外觀質(zhì)量評(píng)價(jià)和化學(xué)成分分析，篩選出了綜合性狀較好的Virginia 309、朝刀煙和Virginia 331 三個(gè)品種。劉岱松等[18]對(duì)32份曬晾煙種質(zhì)的農(nóng)藝性狀和化學(xué)成分?jǐn)?shù)據(jù)進(jìn)行聚類分析，篩選出綜合性狀優(yōu)良的湖南寧鄉(xiāng)曬煙、公會(huì)曬黃煙（深色）、公會(huì)曬黃煙。本研究對(duì)93份晾曬煙種質(zhì)進(jìn)行了適應(yīng)性和農(nóng)藝性狀鑒定與評(píng)價(jià)，發(fā)現(xiàn)來(lái)自不同產(chǎn)區(qū)的晾曬煙種質(zhì)適應(yīng)性較強(qiáng)，在山東均能正常成熟;葉數(shù)、產(chǎn)量等農(nóng)藝性狀變異范圍廣泛，其中葉數(shù)大于30的種質(zhì)占10.26%，供試種質(zhì)葉數(shù)較多可能與測(cè)量參考標(biāo)準(zhǔn)有關(guān)，生產(chǎn)上品種葉數(shù)是指打頂后的有效葉數(shù)量，一般比按《煙草種質(zhì)資源描述規(guī)范和數(shù)據(jù)標(biāo)準(zhǔn)》測(cè)定的每株葉數(shù)少5片左右。S27、S82、S53等可作為多葉型材料進(jìn)行利用;另外，雖然S1、S4葉數(shù)較少，但其生育期短，在生產(chǎn)和生物學(xué)研究中可作為早熟遺傳材料加以利用。而對(duì)于產(chǎn)量中等或高產(chǎn)種質(zhì)，可結(jié)合其化學(xué)成分進(jìn)行綜合評(píng)價(jià)。

3.2? 晾曬煙化學(xué)成分評(píng)價(jià)

化學(xué)成分是影響煙葉品質(zhì)的重要因素，其含量及其協(xié)調(diào)性決定了煙葉的質(zhì)量。王允白等[19]研究表明，糖堿比與香氣、吃味、雜氣及評(píng)吸總分呈極顯著（顯著）正相關(guān)，而與刺激性呈極顯著負(fù)相關(guān)。于建軍等[20]對(duì)會(huì)理煙區(qū)的煙葉分析表明，煙葉鉀含量對(duì)香氣質(zhì)、香氣量以及評(píng)吸總分均有較大的正面影響，而氯含量則對(duì)這3個(gè)評(píng)吸指標(biāo)有較大的負(fù)面影響。本研究對(duì)93份晾曬煙資源化學(xué)成分鑒定表明，煙堿含量范圍為1.20%～8.63%，平均為5.30%～5.50%，遠(yuǎn)高于我國(guó)烤煙煙堿含量[21];總糖含量范圍1.34%～7.84%，平均為2.94%～3.04%，遠(yuǎn)低于我國(guó)烤煙總糖含量，研究結(jié)果與楊春元等[22]、何川生等[23]的結(jié)果一致，但變異范圍更大。另外，93份晾曬煙資源氯含量變異系數(shù)最高，鉀含量大于3%的種質(zhì)占供試資源的四分之一。其中高煙堿低糖、高鉀種質(zhì)可為口含煙原料和低焦油種質(zhì)的篩選和新品種培育提供豐富的物質(zhì)基礎(chǔ)。

3.3? 基于SSR分子標(biāo)記的多樣性分析

對(duì)煙草種質(zhì)進(jìn)行農(nóng)藝性狀及化學(xué)成分鑒定是資源鑒定中的必要步驟，但利用表型鑒定進(jìn)行種質(zhì)篩選仍存在一定的局限性。隨著煙草SSR分子標(biāo)記技術(shù)的發(fā)展，利用SSR分子標(biāo)記進(jìn)行種質(zhì)資源的遺傳多樣性和親緣關(guān)系的分析得到了廣泛的應(yīng)用。葉蘭欽等[24]利用SSR分子標(biāo)記研究了云南煙區(qū)13個(gè)煙草主栽品種的遺傳多樣性。徐軍等[25]利用8對(duì)SSR引物可將80份煙草種質(zhì)完全區(qū)分開。本研究聚類結(jié)果顯示，93份種質(zhì)之間遺傳相似系數(shù)在0.50～0.94之間，遺傳多樣性大于王曼[26]和劉艷華等[7]的報(bào)道，表明本研究篩選的93份曬煙種質(zhì)代表性更廣泛，遺傳多樣性更豐富。而來(lái)自貴州的兩份種質(zhì)S11和S12遺傳相似系數(shù)最高，為0.97，這可能是因?yàn)樵谔囟ǖ沫h(huán)境條件下，由于育種目標(biāo)相同，選育種質(zhì)遺傳基礎(chǔ)也趨于相同的緣故。

不同群體間遺傳相似性結(jié)果表明，群體2和群體4遺傳相似系數(shù)最大，群體1和群體5遺傳相似系數(shù)最小;聚類分析結(jié)果亦表明，來(lái)自于黃淮煙區(qū)的S23、S87與來(lái)自于東南煙區(qū)的S70可聚在相同的亞類中，而來(lái)自西南煙區(qū)的S15與來(lái)自東北煙區(qū)的S19遺傳距離較遠(yuǎn)。這可能是因?yàn)辄S淮煙區(qū)和東南煙區(qū)地理位置最近，而東北煙區(qū)和西南煙區(qū)地理位置最遠(yuǎn)的緣故，因此，遺傳相似性與地理位置存在一定的相關(guān)性。另外，一些來(lái)自不同產(chǎn)地的同名

種質(zhì)S82、S83、S85及S92遺傳差異卻較大，這可能是因?yàn)椴煌a(chǎn)區(qū)引進(jìn)了同一品種，根據(jù)育種目標(biāo)的不同，經(jīng)過長(zhǎng)期的人為選擇，在特定的地理環(huán)境條件下，造成遺傳漂移或漂變，從而表現(xiàn)出一定的遺傳差異[27]。另外，來(lái)自不同產(chǎn)區(qū)的S35、S74、S82、S71以及S88等12份煙草資源卻聚為一類，這可能是由于產(chǎn)區(qū)間互相引種造成的，此結(jié)果與劉國(guó)祥等[28]的研究結(jié)果較一致。綜上所述，利用SSR分子標(biāo)記技術(shù)不僅可對(duì)晾曬煙種質(zhì)資源進(jìn)行遺傳多樣性分析，并且可對(duì)其親緣關(guān)系以及同名異種資源進(jìn)行鑒定。

4? 結(jié)? 論

研究結(jié)果表明，來(lái)自不同產(chǎn)區(qū)的晾曬煙資源生態(tài)適應(yīng)性較強(qiáng)，在山東均能正常成熟采收。不同產(chǎn)區(qū)、種質(zhì)間農(nóng)藝性狀、化學(xué)成分差異均較大，種質(zhì)遺傳基礎(chǔ)較豐富。東北煙區(qū)晾曬煙資源在山東的株高表現(xiàn)最矮，莖圍最細(xì)。東南煙區(qū)晾曬煙資源在山東平均生育期最長(zhǎng)，株高最高，節(jié)距最短，單株平均葉數(shù)最多。其中來(lái)自東北煙區(qū)的S1、S2生育期最短，單株葉數(shù)最少，分別來(lái)自于長(zhǎng)江中上游煙區(qū)和東南煙區(qū)的S27、S82單株葉片數(shù)最多，生育期最長(zhǎng)。另外，東北煙區(qū)晾曬煙資源煙堿含量最高，西南煙區(qū)總糖含量最低，其他3個(gè)產(chǎn)區(qū)化學(xué)成分差異不顯著，但種質(zhì)間差異較大，其中S19調(diào)制后煙葉煙堿含量是S84的近8倍，S82糖含量是S55的7倍多，S73氧化鉀含量是S34的3倍多。綜合評(píng)價(jià)優(yōu)異的有S3、S10、S19、S33、S66、S73、S82以及S84等8份曬晾煙資源，且他們的遺傳距離相對(duì)較遠(yuǎn)，代表的遺傳基礎(chǔ)比較豐富。本研究結(jié)果可為晾曬煙資源產(chǎn)區(qū)間的引種、新品種培育以及新用途的開發(fā)提供理論依據(jù)和物質(zhì)基礎(chǔ)。

參考文獻(xiàn)

[1]中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院煙草研究所. 中國(guó)煙草栽培學(xué)[M]. 上海：上?？茖W(xué)技術(shù)出版社，2005：6-7.Tobacco Research Institute of China Academy of Agricultural Sciences. Chinese tobacco cultivation[M]. Shanghai： Shanghai Scientific & Technical Publishers， 2005： 6-7.

[2]顏克亮，曾曉鷹，胡巍耀，等. 晾曬煙葉模塊在烤煙型卷煙中的應(yīng)用[J]. 中國(guó)煙草學(xué)報(bào)，2012，18（1）：19-25.YAN K L， ZENG X Y， HU W Y， et al. Application of air-cured tobacco leaf's module in virginia type cigarette[J]. Acta Tabacaria Sinica， 2012， 18（1）： 19-25.

[3]朱貴明. 論曬黃煙的品質(zhì)特點(diǎn)及其開發(fā)利用[J]. 中國(guó)煙草科學(xué)，1996（4）：34-38.ZHU G M. On the quality characteristics and development and utilization of sun-cured tobacco[J]. Chinese Tobacco Science， 1996（4）： 34-38.

[4]閆克玉，趙銘欽. 煙草原料學(xué)[M]. 北京：科學(xué)出版社，2008：46-48.YAN K Y， ZHAO M Q. Tobacco raw materials[M]. Beijing： Science Press， 2008： 46-48.

[5]孫學(xué)輝，趙樂，王宜鵬，等. 無(wú)煙氣煙草制品的發(fā)展現(xiàn)狀和趨勢(shì)[J]. 煙草科技，2015，48（11）：83-90.SUN X H， ZHAO L， WANG Y P， et al. Status quo and development trend of smokeless tobacco products[J]. Tobacco Science & Technology， 2015， 48（11）： 83-90.

[6]張雪廷，童治軍，焦芳嬋，等. 38份晾曬煙種質(zhì)資源遺傳關(guān)系的SSR分析[J]. 植物遺傳資源學(xué)報(bào)，2013，14（4）：653-658.ZHANG X T， TONG Z J， JIAO F C， et al. Genetic relationship analysis of thirty-eight sun/air-cured tobacco germplasms based on simple sequence repeat （SSR） markers[J]. Journal of Plant Genetic Resources， 2013， 14（4）： 653-658.

[7]劉艷華，向德虎，閆寧，等. 曬黃煙種質(zhì)資源遺傳多樣性分析與評(píng)價(jià)[J]. 植物遺傳資源學(xué)報(bào)，2016，17（2）：252-256.LIU Y H， XIANG D H， YAN N， et al. Analysis on genetic diversity of yellow sun-cured tobacco germplasm resources[J]. Journal of Plant Genetic Resources， 2016， 17（2）： 252-256.

[8]戴培剛，羅成剛，唐義芝，等. 曬晾煙重要農(nóng)藝性狀遺傳分析[J]. 植物遺傳資源學(xué)報(bào)，2014，15（2）：441-446.DAI P G， LUO C G， TANG Y Z， et al. The genetic analysis of important agronomic traits in sun-cured tobacco[J]. Journal of Plant Genetic Resources， 2014， 15（2）： 441-446.

[9]王志德，王元英，牟建民. 煙草種質(zhì)資源描述規(guī)范和數(shù)據(jù)標(biāo)準(zhǔn)[M]. 北京：中國(guó)農(nóng)業(yè)出版社，2006.WANG Z D， WANG Y Y， MOU J M. Descriptors and data standard for tobacco germplasm[M]. Beijing： China Agriculture Press， 2006.

[10]BINDLER G， PLIESKE J， BAKAHER N， et al. A high density genetic map of tobacco （Nicotiana tobacum L.） obtained from large scale microsatellite marker development[J]. Theoretical and Applied Genetics， 2011， 123（2）： 219-230.

[11]TONG Z J， JIAO T L， WANG F Q， et al. Mapping of quantitative trait loci conferring resistance to brown spotin flue-cured tobacco （Nicotiana tabacum L.）[J]. Plant Breeding， 2012， 131： 335-339.

[12]TONG Z J， YANG Z M， CHEN X J， et al. Large-scale development of microsatellite markers in Nicotiana tabacum and construction of a genetic map of flue-cured tobacco[J]. Plant Breeding， 2012， 131： 674-680.

[13]NEI M. Analysis of gene diversity in subdivided populations[J]. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America， 1973， 76： 5269-5273.

[14]SHANNON C， WEAVE E. The mathematical theory of communication[M]. Urbana： University of Illinois Press， 1949.

[15]YEH F C， YANG R C， BOYLE T B. POPGENE， version 1.31： Microsoft window-based freeware for population genetic analysis quick user guide[M]. Edmonton： University of Alberta， 1999.

[16]ROHLF F J. NRSYSpc numerical taxonomy and multivariate analysis system（version 2.0）[M]. New York： Applied Biostatics Inc， 1988.

[17]雷麗萍，柴加榮. 曬煙品種農(nóng)藝性狀及煙葉質(zhì)量鑒定[J]. 安徽農(nóng)業(yè)科學(xué)，2015，43（12）：68-71，116.LEI L P， CHAI J R. Identification of agronomic characters and quality of sun-cured tobacco[J]. Journal of Anhui Agricultural Sciences， 2015， 43（12）： 68-71， 116.

[18]劉岱松，黃凱，吳自友，等. 32個(gè)曬晾煙品種資源的聚類分析[J]. 湖北農(nóng)業(yè)科學(xué)，2013，52（23）：5785-5787.LIU D S， HUANG K， WU Z Y， et al. Clusteral analysis of 32 sun-cured tobacco germplasm in china[J]. Hubei Agricultural Sciences， 2013， 52（23）： 5785-5787.

[19]王允白，王寶華，郭承芳，等. 影響烤煙評(píng)吸質(zhì)量的主要化學(xué)成分研究[J]. 中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)，1998，31（1）：89-91.WANG Y B， WANG B H， GUO C F， et al. Study on the main chemical components related to smoking quality in flue-curred tobacco[J]. Scientia Agricultura Siniea， 1998， 31（1）： 89-91.

[20]于建軍，董高峰，楊寒文，等. 四川會(huì)理煙區(qū)烤煙礦質(zhì)元素含量與評(píng)吸結(jié)果的關(guān)系分析[J]. 中國(guó)煙草學(xué)報(bào)，2009，15（6）：36-40.YU J J， DONG G F， YANG H W， et al. Analysis on relationship between mineral elements content and smoking quality in flue-cured tobacco grown in Huili area[J]. Acta Tabacaria Sinica， 2009， 15（6）： 36-40.

[21]黃新杰，李章海，王能如，等. 中國(guó)主要煙區(qū)煙葉煙堿含量差異分析[J]. 湖南農(nóng)業(yè)科學(xué)，2006（5）：33-36.HUANG X J， LI Z H， WANG N R， et al. Analysis on nicotine content diversity of flue-cured tobacco in major tobacco-planting areas in China[J]. Hunan Agricultural Sciences， 2006（5）： 33-36.

[22]楊春元，曾吉凡，吳春，等. 晾曬煙資源煙葉化學(xué)成分和吸食品質(zhì)的初步分析[J]. 中國(guó)種業(yè)，2004（8）：29-30.YANG C Y， ZENG J F， WU C， et al. Preliminary analysis of chemical composition and food quality of tobacco leaves in sun-cured tobacco resources[J]. Chinese Seed Industry， 2004（8）： 29-30.

[23]何川生，黃學(xué)躍，趙麗宏. 云南優(yōu)異地方晾曬煙品種資源評(píng)價(jià)[J]. 作物品種資源，1998（4）：24-26.HE C S， HUANG X Y， ZHAO L H. Evaluation on the variety resources of sun-cured tobacco in excellent places in Yunnan[J]. Crop Germplasm Resources， 1998（4）： 24-26.

[24]葉蘭欽，辛明明，杜金坤，等. SSR標(biāo)記應(yīng)用于煙草品種遺傳多樣性研究[J]. 中國(guó)農(nóng)學(xué)通報(bào)，2009，25（1）：56-62.YE L Q， XIN M M， DU J K， et al. Genetic diversity revealed by SSR markers of the tobacco cultivars[J]. Chinese Agricultural Science Buletin， 2009， 25（1）： 56-62.

[25]徐軍，劉艷華，任民，等. 普通煙草種質(zhì)資源的SSR標(biāo)記和指紋圖譜分析[J]. 中國(guó)煙草科學(xué)，2011，32（2）：62-65.XU J， LIU Y H， REN M， et al. SSR fingerprint map analysis of tobacco germplasms[J]. Chinese Tobacco Science， 2011， 32（2）： 62-65.

[26]王曼. 吉林省23份曬煙種質(zhì)資源多樣性與親緣關(guān)系的研[D]. 延邊：延邊大學(xué)，2013.WANG M. Study of genetic diversity and phylogenetic relationship for 23 sun-cured tobacco germplasm resources in Jilin Province[D]. Yanbian： Yanbian University， 2013.

[27]肖軍治，李小湘，黎用朝，等. 水稻核心種質(zhì)和同名異種資源的研究進(jìn)展[J]. 雜交水稻，2011，26（3）：1-6. XIAO J Z， LI X X， LI Y C， et al. Progress in research of core collections and namesakes of rice genetic resources[J]. Hybrid Rice， 2011， 26（3）： 1-6.

[28]劉國(guó)祥，鄒坤宴，任民，等. 33份曬煙種質(zhì)資源 SSR 標(biāo)記的指紋圖譜構(gòu)建[J]. 中國(guó)煙草學(xué)報(bào)，2017，23（5）：57-64.LIU G X， ZOU K Y， REN M， et al. Construction of SSR markers’ fingerprints of 33 sun-cured tobacco germplasm resources[J]. Acta Tabacaria Sinica， 2017， 23（5）： 57-64.