呂涵穎

摘要：流行性感冒近年來在全球范圍內(nèi)持續(xù)頻繁爆發(fā)，2009年和2013年，都分別爆發(fā)了全球性的甲型流感和H7N9禽流感，對(duì)于動(dòng)物、人類生存以及社會(huì)的發(fā)展，均造成了十分嚴(yán)重的影響。基于此，本文首先對(duì)流行性感冒病毒基因發(fā)展的趨勢進(jìn)行了探究，提出了各種不同類型流行性感冒病毒基因發(fā)展趨勢；其次，提出了流行性感冒病毒的主要檢測手段，通過此種方式，探究出流行性感冒病毒檢測方法的發(fā)展歷程和研究進(jìn)展。

關(guān)鍵詞：流行性感冒；病毒檢測；檢測方法；分子生物學(xué)

引言：隨著國內(nèi)科學(xué)技術(shù)水平的提升，醫(yī)療技術(shù)也得到了飛速發(fā)展。但是在此過程中，流行性感冒病毒也變得越發(fā)復(fù)雜。流行性感冒病毒簡稱流感病毒，是一種能夠造成動(dòng)物和人類患流行性感冒的病毒類型，主要分為甲型、乙型4和丙型三種不同的類型。在臨床上對(duì)患者是否感染流行性感冒病毒進(jìn)行及時(shí)地診斷和治療，具有十分重要的意義。如何對(duì)流行性感冒病毒進(jìn)行科學(xué)檢測，也成為了相關(guān)工作人員的工作重點(diǎn)之一。

1 流行性感冒病毒基因發(fā)展趨勢

1.1甲型H1N1流感病毒發(fā)展趨勢

1918年，西班牙地區(qū)爆發(fā)了大規(guī)模流感，流行性感冒病毒從歐洲開始，迅速傳播到了美洲、亞洲和澳洲等國家和地區(qū)。根據(jù)調(diào)查統(tǒng)計(jì)顯示，總計(jì)超過兩千萬人死于此次大規(guī)模流感，死亡人數(shù)占了當(dāng)時(shí)世界人口總數(shù)的30%。此后，實(shí)驗(yàn)證明，此次流行性感冒病毒的基因類型為H1N1，主要在鳥類、豬和人類之間傳播。2009年6月，WHO和美國CDC宣布新一輪的流行性感冒病毒爆發(fā)大流行，共計(jì)造成全球范圍內(nèi)1萬8千人死亡。截止到2010年6月，全世界范圍內(nèi)已經(jīng)有超過300例H1N1毒株病例報(bào)告顯示，該病毒對(duì)奧司他韋耐藥。根據(jù)實(shí)驗(yàn)研究證明，此次病毒為甲型H1N1基因型病毒。此次流感病毒與上世紀(jì)出的流感病毒相比，進(jìn)一步與歐亞豬流感病毒相互結(jié)合，形成了一種新型四聯(lián)重配體流感病毒[1]。

1.2甲型H2N2流感病毒發(fā)展趨勢

1956年中國貴州爆發(fā)流行性感冒，之后從我國開始傳入到香港、新加坡和美國等地，造成了全球性的流行性感冒病毒大流行。雖然在此種流行性感冒病毒爆發(fā)一年之后，就已經(jīng)研究出了針對(duì)性的疫苗，但是該疾病大規(guī)模流行，仍舊造成全球超過一百萬的人員死亡。除了1956年亞洲流感大爆發(fā)之外，部分學(xué)者還提出，1889年的俄羅斯流感也是因?yàn)榧仔虷2N2流感病毒所引起的。

1.3甲型H3N2流感病毒發(fā)展趨勢

1968年，香港最先爆發(fā)了甲型H3N2病毒所引起的流行性感冒，隨后造成了全世界范圍內(nèi)的流感大流行。此次流行性感冒共造成了全球一百萬人死亡，甲型H3N2病毒是由甲型H2N2病毒抗原性轉(zhuǎn)變而來。根據(jù)相關(guān)領(lǐng)域的調(diào)查和統(tǒng)計(jì)顯示，進(jìn)入到21世紀(jì)之后，甲型H3N2所造成的季節(jié)性流感占據(jù)了大多數(shù)。

2 流行性感冒病毒主要檢測手段

在對(duì)流行性感冒病毒進(jìn)行檢測的過程中，可以根據(jù)實(shí)際情況，合理地應(yīng)用不同的方法，具體的方法種類如下：

2.1病毒分離培養(yǎng)檢測方法

雖然流行性感冒病毒的檢測方法與手段，都在持續(xù)不斷地發(fā)展和創(chuàng)新，但是流行性感冒病毒培養(yǎng)方法，仍舊是一種有效性較高的檢測手段。此種方法的應(yīng)用，主要是通過對(duì)流行性感冒病毒的易感性神經(jīng)氨酸酶抑制劑進(jìn)行檢測，借助病毒分離培養(yǎng)的手段，還可以進(jìn)行抗病毒疫苗的生產(chǎn)。傳統(tǒng)的病毒分離培養(yǎng)方法，操作方法較為復(fù)雜，并且花費(fèi)的時(shí)間更長。經(jīng)過了長時(shí)間的研究分析，快速病毒分離培養(yǎng)方法，已經(jīng)逐步超過傳統(tǒng)方法，以更加簡便并且省時(shí)的優(yōu)勢，成為了業(yè)內(nèi)發(fā)展的首選方法。根據(jù)研究顯示，快速病毒培養(yǎng)方法的檢測率可以達(dá)到98.6%。

2.2血清學(xué)檢測方法

血清檢驗(yàn)方法同樣具有操作簡單且耗時(shí)較短的優(yōu)勢和特點(diǎn)。此種方法目前已經(jīng)成為了流行性感冒病毒檢測工作中，最為常見的一種方法。血清學(xué)檢測方法主要是根據(jù)抗原抗體反應(yīng)原理，通過對(duì)核蛋白、血凝素、膜蛋白以及神經(jīng)氨酸酶蛋白等進(jìn)行檢驗(yàn)，可以提高檢測的有效性。比如，在病毒中和試驗(yàn)中，可以通過抑制病毒進(jìn)入到細(xì)胞以及阻斷病毒復(fù)制抗體的方法，進(jìn)行檢驗(yàn)。此種方法具有較高的特異度與敏感度。瓊脂凝膠擴(kuò)散試驗(yàn)，主要可以用于對(duì)甲型流感病毒的HA進(jìn)行檢驗(yàn)和鑒別，根據(jù)抗體在含有流感病毒結(jié)合的紅細(xì)胞瓊脂膠上擴(kuò)散，可以形成抗原抗體的沉淀線，以此對(duì)流行性感冒病毒感染產(chǎn)生的血清抗體進(jìn)行檢驗(yàn)[2]。

2.3基因芯片技術(shù)檢測方法

基因芯片技術(shù)檢測方法，主要是在同一時(shí)間，將大量的探針固定到支持物上方，同時(shí)對(duì)大量的序列和樣品進(jìn)行檢驗(yàn)與分析，進(jìn)而解決傳統(tǒng)核酸印跡雜交技術(shù)存在的自動(dòng)化水平較低、操作復(fù)雜、序列數(shù)量較少一級(jí)檢測效率較低等方面的問題。此種技術(shù)的合理化應(yīng)用，可以對(duì)基因表達(dá)的突變檢測、圖譜鑒定、基因組文庫、多態(tài)性分析和雜交測序等進(jìn)行檢測。該項(xiàng)技術(shù)的合理應(yīng)用，可以為流行性感冒病毒的檢驗(yàn)工作，提供更為科學(xué)和精準(zhǔn)的檢驗(yàn)結(jié)果和分析數(shù)據(jù)。但是，該項(xiàng)技術(shù)在實(shí)際的應(yīng)用中，也會(huì)面臨著成本過高、操作條件要求較高以及后期結(jié)果分析復(fù)雜等方面的問題，因此不適合一般實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行操作。

2.4金標(biāo)快速檢測方法

除了上述幾種方法以外，還可以使用金標(biāo)快速檢測方法進(jìn)行檢驗(yàn)。與其他方法不同，此種方法可以通過直接檢測的方式，采集到的樣本進(jìn)行檢驗(yàn)，并對(duì)流感病毒的A型和B型進(jìn)行區(qū)分。根據(jù)臨床使用情況可以看出，此種方法在對(duì)流行性感冒病毒進(jìn)行檢驗(yàn)的過程中，全程耗時(shí)約為20min，并且具有較高的特異性。但是，此種方法的敏感度相對(duì)較低，僅適合對(duì)群體性的流行性感冒病毒爆發(fā)進(jìn)行判斷與排除。在這一方法的基礎(chǔ)上，聯(lián)合使用實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測方法，可以對(duì)流感病毒中的病毒核酸進(jìn)行檢測。該方法具有重復(fù)性好、直觀和特異性強(qiáng)的優(yōu)勢特征，能夠通過動(dòng)態(tài)檢測的方式，獲取動(dòng)態(tài)檢測結(jié)果，并且不需要經(jīng)過后續(xù)的加工和處理，有效地防止了出現(xiàn)增產(chǎn)物污染問題。以PCR檢測方法為基礎(chǔ)發(fā)展的依賴核算序列擴(kuò)增方法，也被廣泛地應(yīng)用與流感病毒檢測工作中。該項(xiàng)技術(shù)能夠通過核苷酸序列等溫?cái)U(kuò)增，完成酶促反應(yīng)，只需要4h至6h就可以完成基本的檢測。

3 結(jié)論

綜上所述，流行性感冒作為一種遍布全世界的傳染性疾病，在近幾年的發(fā)病率顯著提升。作為一種易傳播、易變異的疾病類型，流行性感冒需要被建立快速、準(zhǔn)確且有效的流感病毒檢測方法。通過本文的研究可以得出，病毒分子培養(yǎng)檢測方法、血清學(xué)檢測方法、基因芯片技術(shù)檢測方法和金標(biāo)快速檢測方法，均具有不同的優(yōu)勢和特征，針對(duì)實(shí)際情況選取合理的方法，可以提高檢測工作有效性。

參考文獻(xiàn)：

[1]羅鵬，楊永耀，呂沁風(fēng).流行性感冒病毒監(jiān)測及檢測技術(shù)的研究進(jìn)展[J].現(xiàn)代生物醫(yī)學(xué)進(jìn)展，2014，14（33）：6597- 6600.

[2]蘇文哲，柯昌文.流行性感冒病毒的耐藥性相關(guān)研究進(jìn)展[J].中國病毒病雜志，2011，1（03）：171-176.