李焱 陳青龍 朱虹 祝健嬋 鐘彥培 熊小琴

【摘要】 目的：探討miRNA-223在子宮肌瘤組織中的表達(dá)及臨床意義。方法：選取2018年1-6月在本院行子宮肌瘤剔除術(shù)的子宮肌瘤患者60例為子宮肌瘤組，另選同期到本院體檢的30例健康女性為正常對(duì)照組。采用RT-PCR法檢測(cè)兩組血清、子宮肌瘤組織和瘤旁正常組織中miRNA-223的表達(dá)，并分析miRNA-223表達(dá)與子宮肌瘤患者臨床病理特征的關(guān)系。結(jié)果：子宮肌瘤組miRNA-223表達(dá)水平明顯高于正常對(duì)照組（P<0.05）;子宮肌瘤組織miRNA-223表達(dá)水平明顯高于瘤旁正常組織（P<0.05）;子宮肌瘤組織中miRNA-223的表達(dá)水平與年齡、肌瘤大小、肌瘤個(gè)數(shù)、病理類型及月經(jīng)情況均有關(guān)（P<0.05）;由ROC曲線可知，其曲線下面積為0.847，95%CI（0.628，1.395），當(dāng)miRNA-223的截?cái)嘀禐椤?.50時(shí)，其診斷敏感度為91.43%，特異度為80.26%。結(jié)論：miRNA-223在子宮肌瘤組織中呈高表達(dá)，其表達(dá)可能與子宮肌瘤的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)。

【關(guān)鍵詞】 子宮肌瘤; miRNA-223; RT-PCR; 表達(dá)

【Abstract】 Objective：To investigate the expression and clinical significance of miRNA-223 in hysteromyoma.Method：60 patients with hysteromyoma who underwent hysteromyomectomy in our hospital from January to June 2018 were selected as hysteromyoma group，30 healthy women who came to our hospital for physical examination at the same time were selected as normal control group.RT-PCR was used to detect the expression of miRNA-223 in serum of two groups，the expression of miRNA-223 in hysteromyoma and normal tissue adjacent to tumors，the relationship between the expression of miRNA-223 and the clinicopathological characteristics of patients with hysteromyoma were analyzed.Result：The expression level of miRNA-223 in hysteromyoma group was significantly higher than that of normal control group（P<0.05）.The expression level of miRNA-223 in hysteromyoma tissue was significantly higher than that of normal tissue adjacent to tumors（P<0.05）.The expression level of miRNA-223 in hysteromyoma was correlated with age，size of leiomyoma，number of leiomyomas，pathological type and menstruation（P<0.05）.The ROC curve showed that the area under the curve was 0.847，95%CI（0.628，1.395），when the cut-off value≥6.50，the diagnostic sensitivity and specificity were 91.43% and 80.26% respectively.Conclusion：miRNA-223 is highly expressed in uterine fibroids，and its expression may be closely related to the occurrence and development of uterine fibroids.

【Key words】 Hysteromyoma; miRNA-223; RT-PCR; Expression

First-authors address：Jiangmen Peoples Hospital，Jiangmen 529020，China

doi：10.3969/j.issn.1674-4985.2019.13.006

子宮肌瘤是婦科臨床最常見的疾病之一，其是一種良性腫瘤，常見的臨床表現(xiàn)為疼痛、子宮出血、白帶增多、月經(jīng)不調(diào)、不孕、流產(chǎn)、貧血、腹部包塊及壓迫癥狀等，嚴(yán)重影響女性的身心健康[1]。目前，尚不清楚子宮肌瘤的確切病因，以往的研究顯示正常肌層的細(xì)胞突變、性激素及局部細(xì)胞因子間的相互作用與子宮肌瘤的發(fā)生有關(guān)[2-3]。miRNA是一類長(zhǎng)度為18～24個(gè)核苷酸的內(nèi)源性小RNA[4]，近年來(lái)的研究表明，miRNA參與細(xì)胞代謝、增殖、分化及凋亡等的調(diào)控，并與腫瘤的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)[5]。最近研究發(fā)現(xiàn)，miRNA-223在多種女性特發(fā)性腫瘤，如乳腺癌、卵巢癌及子宮內(nèi)膜癌等中發(fā)揮作用[6]，因此，本研究進(jìn)一步探討了miRNA-223在子宮肌瘤組織中的表達(dá)及臨床意義?，F(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2018年1-6月在本院行子宮肌瘤剔除術(shù)的子宮肌瘤患者60例為子宮肌瘤組，另選同期到本院體檢的30例健康女性為正常對(duì)照組。納入標(biāo)準(zhǔn)：根據(jù)《婦產(chǎn)科學(xué)》且術(shù)后病理診斷為子宮肌瘤[7];年齡25～55歲;術(shù)前3個(gè)月內(nèi)未接受激素治療。排除標(biāo)準(zhǔn)：合并嚴(yán)重心肝腎功能不全者，精神疾病者，凝血功能障礙者及其他婦科疾病者。本研究經(jīng)醫(yī)院倫理學(xué)委員會(huì)審批，且研究對(duì)象均知情同意。

1.2 研究方法

1.2.1 試劑與設(shè)備 Trizol總RNA提取試劑盒、逆轉(zhuǎn)錄酶試劑盒、miR-223引物購(gòu)自生工生物工程（上海）股份有限公司;qRT-PCR檢測(cè)試劑盒由廣州銳博生物科技有限公司提供;實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀購(gòu)自ABI公司;紫外分光光度計(jì)購(gòu)自賽默飛公司。

1.2.2 樣本采集 于術(shù)后15 min內(nèi)收集患者新鮮子宮肌瘤組織和瘤旁正常組織（距子宮肌瘤組織邊緣≥2 cm）作為檢測(cè)樣本，立即經(jīng)液氮冷凍處理，并于-80 ℃的冰箱中保存待用。兩組均采集晨起空腹外周靜脈血3 mL，3 000 r/min，4 ℃，離心10 min后，分離血清至無(wú)RNA酶EP管中，也于-80 ℃保存待用。

1.2.3 逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)（RT-PCR） （1）組織和血清總RNA的提取：超聲勻漿后按照TRIzol試劑盒說(shuō)明書操作，提取組織和血清中總RNA，DEPC水溶解，檢測(cè)RNA的完整性、純度及濃度。（2）逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)：按照逆轉(zhuǎn)錄試劑盒操作說(shuō)明書操作，將miR-223反轉(zhuǎn)錄為cDNA，反應(yīng)體系為20 μL，依次加入以下試劑：總RNA 1 μL、10×RT buffer 1.5 μL、1 μmol/L逆轉(zhuǎn)錄特異性引物 3μL、50 U/μL反轉(zhuǎn)錄酶（MultiScribeTM Reverse Transcriptase）1.0 μL、20 U/μL RNA酶抑制劑0.19 μL、100 mmol/L dNTPs 0.15 μL，加DEPC水補(bǔ)至20 μL。反應(yīng)條件：16 ℃ 30 min，42 ℃ 30 min，85 ℃ 5 s，產(chǎn)物置于-20℃保存。（3）PCR擴(kuò)增：按照PCR試劑盒操作說(shuō)明書進(jìn)行PCR擴(kuò)增。反應(yīng)體系為20 μL，并依次加入以下試劑：逆轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物cDNA 1 μL、引物1 μL、RT混合液（TaqMan GEx MASTER Mix）10 μL，加雙蒸水補(bǔ)至20 μL。反應(yīng)條件：95 ℃反應(yīng)30 s，95 ℃反應(yīng)15 s，60 ℃反應(yīng)30 s，共30個(gè)循環(huán)。（4）采用ΔCt值法對(duì)PCR結(jié)果進(jìn)行分析，?Ct值=Ct值（miRNA-223）-Ct值（內(nèi)參基因）。

1.3 觀察指標(biāo) 記錄兩組血清miRNA-223的相對(duì)表達(dá)量;記錄子宮肌瘤組織和瘤旁正常組織中miRNA-223的相對(duì)表達(dá)量。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 使用SPSS 19.0軟件對(duì)所得數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，計(jì)量資料用（x±s）表示，組間比較采用t檢驗(yàn)，組內(nèi)比較采用配對(duì)t檢驗(yàn);計(jì)數(shù)資料以率（%）表示，比較采用字2檢驗(yàn)。以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組基線資料比較 子宮肌瘤組年齡25～54歲，平均（35.6±2.5）歲;正常對(duì)照組年齡26～53歲，平均（34.7±2.9）歲。兩組患者年齡比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），具有可比性。

2.2 兩組血清中miRNA-223表達(dá)水平比較 子宮肌瘤組miRNA-223表達(dá)水平為（4.29±0.34），明顯高于正常對(duì)照組的（1.03±0.25），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=51.481，P=0.000），見圖1。

2.3 子宮肌瘤組織、瘤旁正常組織中miRNA-223表達(dá)水平比較 子宮肌瘤組織miRNA-223表達(dá)水平為（6.94±0.76），明顯高于瘤旁正常組織的（1.54±0.37），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=49.484，P=0.000），見圖2。

2.4 子宮肌瘤患者miRNA-223表達(dá)與臨床病理特征的關(guān)系分析 子宮肌瘤組織中miRNA-223的表達(dá)水平與年齡、肌瘤大小、肌瘤個(gè)數(shù)、病理類型、及月經(jīng)情況均有關(guān)（P<0.05），見表1。

2.5 瘤組織中miRNA-223對(duì)子宮肌瘤的診斷效

能 由ROC曲線可知，其曲線下面積為0.847，95%CI（0.628，1.395），當(dāng)miRNA-223的截?cái)嘀禐椤?.50時(shí)，其診斷敏感度為91.43%，特異度為80.26%，見圖3。

3 討論

子宮肌瘤是育齡期女性多發(fā)的一種良性腫瘤，研究顯示，我國(guó)子宮肌瘤的發(fā)病率呈逐年增多和年輕化的趨勢(shì)[8]。普遍認(rèn)為，子宮肌瘤的發(fā)生發(fā)展是由多因素、多環(huán)節(jié)共同作用所決定[9]。以往的研究顯示正常肌層的細(xì)胞突變、性激素及局部細(xì)胞因子間的相互作用與子宮肌瘤的形成和生長(zhǎng)有關(guān)[10-11]，此外，子宮肌瘤的發(fā)病還可能與年齡、妊娠史、流產(chǎn)史、遺傳因素等因素有關(guān)[12]。然而，目前尚不十分清楚子宮肌瘤的確切病因[13]。

miRNA是一類長(zhǎng)度為18～24個(gè)核苷酸的內(nèi)源性小RNA，在正常生理狀態(tài)下，機(jī)體內(nèi)miRNA的表達(dá)具有嚴(yán)格的組織時(shí)序特異性，但在腫瘤環(huán)境下miRNA往往表達(dá)異常，發(fā)揮類似抑癌基因作用[14-16]。

有研究顯示，miRNA參與細(xì)胞代謝、增殖、分化及凋亡等的調(diào)控，并與腫瘤的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)[17-18]。最近的研究發(fā)現(xiàn)，miRNA-223在多種女性特發(fā)性腫瘤，如乳腺癌、卵巢癌及子宮內(nèi)膜癌等中發(fā)揮作用[19]，然而miRNA-223在子宮肌瘤中的表達(dá)情況報(bào)道較少，因此，本研究探討了miRNA-223在子宮肌瘤組織中的表達(dá)及臨床意義。

本研究結(jié)果顯示，子宮肌瘤組miRNA-223表達(dá)水平明顯高于正常對(duì)照組（P<0.05）;子宮肌瘤組織miRNA-223表達(dá)水平明顯高于瘤旁正常組織（P<0.05），這提示miRNA-223的高表達(dá)可能在子宮肌瘤的發(fā)生發(fā)展過(guò)程中起到促進(jìn)作用，這與miRNA-223在其他女性特發(fā)性腫瘤組織中的表達(dá)情況相似[20-21]。進(jìn)一步采用ROC曲線分析發(fā)現(xiàn)，瘤組織中miRNA-223對(duì)子宮肌瘤的診斷敏感性和特異性均較高。本研究結(jié)果還顯示，子宮肌瘤組織中miRNA-223的表達(dá)水平與年齡、肌瘤大小、肌瘤個(gè)數(shù)、病理類型及月經(jīng)情況均有關(guān)（P<0.05），這進(jìn)一步提示miRNA-223可能參與子宮肌瘤的發(fā)生發(fā)展。

綜上所述，miRNA-223在子宮肌瘤組織中呈高表達(dá)，其表達(dá)可能與子宮肌瘤的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)。存在的不足之處，本次研究納入的樣本量較少，今后會(huì)加大樣本量的收集，對(duì)miRNA-223與子宮肌瘤的發(fā)生發(fā)展領(lǐng)域進(jìn)行深入研究，以期為子宮肌瘤的臨床診治提供更有價(jià)值的參考依據(jù)。

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（收稿日期：2018-09-29） （本文編輯：董悅）