李 萍,汪 平,董藝霖,劉夢(mèng)燕,孫 薇*

（吉林大學(xué)藥學(xué)院·吉林長(zhǎng)春·130021）

氧氣對(duì)人體很重要，特別是身體各個(gè)部分的器官都不能離開(kāi)氧氣的供應(yīng)，其對(duì)氧氣有不同量的需求，比如心臟、肺部、大腦等重要器官，它們一旦缺少氧氣，將不能正常工作。缺氧是對(duì)好氧生物的一種激發(fā)性刺激，當(dāng)生物體內(nèi)氧氣的供應(yīng)量或利用率下降時(shí)，生物便會(huì)出現(xiàn)缺氧的狀況，從而影響生物器官的各種代謝，主要表現(xiàn)為機(jī)體的氧化供能?chē)?yán)重降低。慢性缺氧會(huì)導(dǎo)致多種慢性疾病，甚至可能會(huì)對(duì)生物機(jī)體造成長(zhǎng)期傷害，而急性缺氧可能會(huì)造成好氧生物產(chǎn)生窒息反應(yīng)甚至死亡。

鑒于以上缺氧反應(yīng)對(duì)機(jī)體造成的影響，如何預(yù)防或者減少缺氧造成的傷害也就至關(guān)重要，如何提高缺氧耐受力成為了一個(gè)重要的研究課題。提高缺氧耐受力是指在特定條件下，當(dāng)環(huán)境中的氧氣減少時(shí)，人體各個(gè)器官對(duì)氧氣需求量減少的同時(shí)，又不影響各個(gè)器官的正常工作，保證各個(gè)器官發(fā)揮正常的功能，使機(jī)體保持健康。在當(dāng)今社會(huì)，有一些職業(yè)人員的工作是在比較缺氧的環(huán)境中，比如從事高空作業(yè)以及高原勘察的人員，他們?cè)诠ぷ鲿r(shí)，隨著海拔高度的不斷上升，周?chē)h(huán)境的氣壓也會(huì)呈下降趨勢(shì)，周?chē)h(huán)境的氧氣含量也會(huì)降低，工作人員便很容易出現(xiàn)缺氧的情況，因而提高缺氧耐受力也就有著十分重要的醫(yī)學(xué)和社會(huì)意義。

已報(bào)道能夠提高缺氧耐受性的中藥有很多，比如丹參、麥冬、阿膠等。蜂膠外形呈現(xiàn)膠狀，它具有特殊芳香氣味。主要是由蜜蜂進(jìn)行加工而獲得。蜜蜂一般在特定樹(shù)木上進(jìn)行采集，獲得樹(shù)脂，再將樹(shù)脂混入舌腺、蠟腺等腺體的分泌物中,進(jìn)行一系列的加工，最后獲得蜂膠。蜂膠已被發(fā)現(xiàn)的藥理活性十分廣泛，比如，具有降血糖[1]、抗腦缺血再灌注損傷[2]、抗腫瘤[3]以及抗炎[4]等作用。本實(shí)驗(yàn)旨在研究蜂膠對(duì)小鼠缺氧耐受力的作用。

1 材料和方法

1.1 材料

蜂膠購(gòu)自山東舜生堂中藥飲片有限公司，將蜂膠研磨成細(xì)粉。體重為18～22g的SPF級(jí)ICR雄性小鼠〔生產(chǎn)許可證號(hào)：SCXK-（吉）2011-0004〕、 小鼠基礎(chǔ)飼料〔生產(chǎn)許可證號(hào)：SCXK-（吉）2010-0001〕，長(zhǎng)春市億斯實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)有限責(zé)任公司提供。清潔級(jí)動(dòng)物室環(huán)境設(shè)施合格證號(hào)：吉?jiǎng)釉O(shè)字10-1005號(hào)，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物使用許可證號(hào)：SYXK（吉）2010-0011，溫度 20～22℃，濕度55%～65%。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分組

小鼠灌胃劑量分別按照12.5、25.0、50.0mg/kg設(shè)置蜂膠粉末低劑量組、中劑量組、高劑量組，精密稱(chēng)取蜂膠粉末31.25、62.5、125.0 mg，在各組蜂膠粉末中加入0.5%羧甲基纖維素鈉，每組均加至50mL；陰性對(duì)照組不加蜂膠粉末，而是直接加0.5%羧甲基纖維素鈉50mL。對(duì)各組小鼠采用灌胃方式進(jìn)行給藥，每組灌胃劑量均為 0.02 mL/(g·d)，連續(xù)灌胃 30d。

1.2.2 常壓耐缺氧實(shí)驗(yàn)

連續(xù)經(jīng)口灌胃給予各劑量組受試物30d，對(duì)照組給予同體積0.5%羧甲基纖維素鈉。于最后1次給予受試物1 h后，立即將各組小鼠放入盛有5 g鈉石灰的廣口瓶?jī)?nèi)（1只/瓶），取適量凡士林涂抹瓶口，蓋嚴(yán)，確保密閉之后開(kāi)始計(jì)時(shí)，以呼吸停止為指標(biāo)，觀察并記錄小鼠因缺氧而死亡的時(shí)間，并進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。

1.2.3 急性腦缺血性缺氧實(shí)驗(yàn)

連續(xù)經(jīng)口灌胃給予各劑量組受試物30d，對(duì)照組給予同體積0.5%羧甲基纖維素鈉。于末次給予受試物1 h后，在乙醚淺麻醉下，各組動(dòng)物自頸部斷頭，用秒表記錄小鼠斷頭后張口喘息至停止的時(shí)間。

1.3 實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)

用spss11.5軟件對(duì)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行方差分析，P＜0.05表示有顯著差異，證明該數(shù)據(jù)具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 蜂膠對(duì)小鼠體重的影響：

給予蜂膠粉末30d，各組小鼠體重與陰性對(duì)照組比較無(wú)顯著差異（P＞0.05），結(jié)果見(jiàn)表1.

表1 蜂膠對(duì)小鼠體重的影響

2.2 蜂膠對(duì)常壓耐缺氧實(shí)驗(yàn)結(jié)果：

低劑量組小鼠常壓缺氧存活時(shí)間與陰性對(duì)照組比較無(wú)差異（P＞0.05），中、高劑量組小鼠常壓缺氧條件下的存活時(shí)間與陰性對(duì)照組有顯著性差異（P＜0.05和P＜0.01）。結(jié)果表明，中、高劑量的蜂膠能延長(zhǎng)小鼠常壓耐缺氧的存活時(shí)間，結(jié)果見(jiàn)表2。

表2 蜂膠對(duì)常壓耐缺氧實(shí)驗(yàn)結(jié)果

2.3 蜂膠對(duì)急性腦缺血性缺氧實(shí)驗(yàn)結(jié)果：

分別給予小鼠3種不同劑量的蜂膠粉末，連續(xù)30d，小鼠斷頭后張口喘息停止時(shí)間，中、高劑量組與陰性對(duì)照組相比較有顯著性差異（P＜0.05）,低劑量組與陰性對(duì)照組比較無(wú)差異（P＞0.05），結(jié)果見(jiàn)表3。

表3 蜂膠對(duì)急性腦缺血性缺氧實(shí)驗(yàn)結(jié)果

2.4 結(jié)論

本實(shí)驗(yàn)中設(shè)置的中劑量組(25.0mg/kg)、高劑量組(50.0mg/kg)的蜂膠粉末可顯著延長(zhǎng)常壓耐缺氧耐受時(shí)間，同樣在急性腦缺血性缺氧實(shí)驗(yàn)中，蜂膠粉末中劑量組(25.0mg/kg)、高劑量組(50.0mg/kg)的小鼠的耐受時(shí)間也相應(yīng)的有所延長(zhǎng)，同時(shí)其對(duì)小鼠的體重?zé)o顯著影響，說(shuō)明蜂膠具有良好的抗缺氧能力。

3 討論

引起缺氧反應(yīng)的原因有很多，比如環(huán)境中氧氣量減少引起的缺氧反應(yīng)、過(guò)度使用人體器官使氧氣消耗速度增加引起的缺氧反應(yīng)、因生病使相應(yīng)器官產(chǎn)生病理作用引起的缺氧反應(yīng)等等。引起缺氧反應(yīng)會(huì)造成循環(huán)血液中氧含量下降，導(dǎo)致機(jī)體細(xì)胞氧供應(yīng)不足，使機(jī)體呈現(xiàn)一種病理狀態(tài)[5]，機(jī)體免疫力也會(huì)相應(yīng)下降。蜂膠含有多種化學(xué)成分，其中主要成分包括黃酮類(lèi)、酚酸類(lèi)和萜烯類(lèi)[6]，蜂膠的功效也十分的廣泛，有研究表明[7]，蜂膠總黃酮可顯著降低丙二醛（MDA）的含量，增強(qiáng)超氧化物歧化酶（SOD）的活力，在改善缺氧耐受力的同時(shí)，可以調(diào)節(jié)自由基水平，改善心肌組織的抗氧化能力。

本研究采用兩種缺氧狀態(tài)的小鼠模型，經(jīng)口灌胃給藥30d，通過(guò)觀察各組小鼠在缺氧狀態(tài)下的存活時(shí)間和體重變化，驗(yàn)證蜂膠的抗缺氧作用。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，蜂膠粉末中劑量組(25.0mg/kg)、高劑量組(50.0mg/kg)能使常壓缺氧和急性腦缺血性缺氧小鼠的存活時(shí)間延長(zhǎng)，同時(shí)蜂膠粉末對(duì)小鼠體重并不會(huì)產(chǎn)生影響，這些都表明蜂膠粉末具有小鼠缺氧耐受力的作用。潘燕[8]等人在研究蜂膠黃酮對(duì)小鼠缺血再灌注后心肌線粒體自由基損傷時(shí)發(fā)現(xiàn)，與力竭對(duì)照組相比，力竭給藥組的SOD、GSH-Px、T-AOC在力竭后的不同時(shí)刻均明顯升高，MDA含量明顯下降，其原因可能與增強(qiáng)機(jī)體缺氧耐受力、提高抗氧化能力有關(guān)。而本實(shí)驗(yàn)結(jié)果提示，提高缺氧耐受力可能與減輕腦缺血再灌注損傷有關(guān)，其作用機(jī)理有待進(jìn)一步研究取證。