周凱旋,李麗靜，孫桂媛，朱志杰*

（通化金馬藥業(yè)集團股份有限公司·吉林 通化·134003）

在當(dāng)今社會，由于不良飲食作息等生活習(xí)慣，以及人口的老齡化，使便秘的發(fā)生率逐漸上升[1]，而常用的以酚酞片為首的西藥治療副作用較大，且療效并不理想[2]。近年來，有研究顯示，腸道菌群的失調(diào)與便秘的發(fā)生密切相關(guān)，功能性便秘患者的腸道菌群組成在種類和數(shù)量上較健康人群有著顯著差異[3]。為進一步研究益生菌對腸道的作用以及對比益生菌制劑與常用西藥對便秘的作用差異，作者對便秘小鼠進行研究，探究益生菌對便秘的治療作用。

1 材料

1.1 實驗動物

健康成年SPF級昆明種小鼠48只，雌雄各半，體質(zhì)量22～25 g，由遼寧長生生物技術(shù)股份有限公司提供，許可證號：SCXK（遼）2015-0001。飼養(yǎng)于長春中醫(yī)藥大學(xué)SPF級動物房中，自由攝入食物和水。

1.2 實驗主要試劑及儀器

復(fù)方地芬諾酯片（產(chǎn)品批號1810020）購自常州康普藥業(yè)有限公司；復(fù)方嗜酸乳桿菌片 （產(chǎn)品批號20190512）購自通化金馬藥業(yè)集團股份有限公司；酚酞片（產(chǎn)品批號180610）購自山西亨瑞達制藥有限公司；伊紅美藍瓊脂（產(chǎn)品批號20190311）、LBS瓊脂（產(chǎn)品批號 20180831）、BBL瓊脂 （產(chǎn)品批號 20190516）、糞腸球菌瓊脂（20180831）均購自于青島高科園海博生物技術(shù)有限公司；革蘭氏染色液（產(chǎn)品批號20190327）購自北京索萊寶科技有限公司；厭氧罐及厭氧袋均購于日本MGC；生理鹽水（產(chǎn)品批號1805290514）購于吉林省都邦藥業(yè)股份有限公司。

2 方法

2.1 造模與給藥

地芬諾酯便秘造模采用10mg/kg的劑量[4]，空白組灌胃同等量的蒸餾水，以0.1ml/10g的體重每天定時給小鼠灌胃，造模0.5h后，正常組、模型組給蒸餾水，給藥組給藥劑量為0.04g/ml的復(fù)方嗜酸乳桿菌片，酚酞片陽性對照組給藥劑量為1.4mg/ml。

2.2 指標(biāo)檢測

2.2.1 糞便含水量的測定

給藥第8天收集各組小鼠新鮮糞便，稱量糞便的質(zhì)量，烘干后再次稱重，測定糞便含水量。糞便含水量＝(糞便濕質(zhì)量－糞便干質(zhì)量)/糞便濕質(zhì)量

2.2.2 小鼠糞便菌落數(shù)

實驗的第14天采集新鮮糞便，裝于事先滅菌稱重的10 mL離心管中，再次稱重記錄；加入生理鹽水，玻璃棒攪碎，使徹底勻漿化，稀釋并選擇合適的稀釋度接種。

2.2.3 糞便菌群觀察

取100倍糞便稀釋液，涂抹于載玻片，進行革蘭氏染色，觀察糞便菌群變化。

2.2.4 小腸運動實驗

灌胃16天后，各組造模0.5 h后，分別灌胃含墨汁藥物。25 min后，將小鼠脫頸處死。將腸系膜與腹腔分離，將腸道從幽門切下。小腸拉直，放于倒有生理鹽水試驗臺，使其自然伸展，測量小腸的總長度。從幽門到墨水前端為墨水推進長度，計算墨汁推進率。

3 結(jié)果

3.1 復(fù)方嗜酸乳桿菌片對小鼠糞便含水量的影響

與模型組相比，正常組的小鼠糞便含水量較高（P<0.05），而給藥組和陽性組糞便含水量均有所提高（P<0.05 和 P<0.01）結(jié)果見表 1。

表1 復(fù)方嗜酸乳桿菌片對小鼠糞便含水量的影響（X±s，n=12）

3.2 復(fù)方嗜酸乳桿菌片對小鼠糞便菌群的影響

將小鼠糞便進行革蘭氏染色后，置于1000倍油鏡下觀察，發(fā)現(xiàn)相對于正常組，模型組細菌菌群中桿菌數(shù)量明顯減少，表明小鼠腸道菌群失調(diào)，而給予復(fù)方地芬諾酯片后，小鼠的腸道菌群有所改善，給予酚酞片干預(yù)便秘發(fā)現(xiàn)小鼠糞便中菌群較模型組有著進一步的失調(diào)，結(jié)果見圖1。

在進行菌群培養(yǎng)后發(fā)現(xiàn)，相對于正常組，模型組糞便中大腸桿菌、糞腸球菌、雙岐桿菌、乳桿菌均具有下降的趨勢，表明便秘對腸道菌群有損傷作用，給藥組中各菌群都有著不同程度的上升，然而給予酚酞片的糞便菌群進一步發(fā)生失調(diào)，結(jié)果見圖2。

3.3 復(fù)方嗜酸乳桿菌片對小鼠小腸運動的影響

與正常組相比，便秘模型組小鼠小腸碳墨推進率顯著下降（P＜0.001），與模型組相比，給予復(fù)方嗜酸乳桿菌片和酚酞片的兩組推進率有著不同程度的升高（*P＜0.05），促進小腸的蠕動（表 2）。

表2 復(fù)方嗜酸乳桿菌片對小鼠小腸運動的影響（X±s，n=12）

4 討論

復(fù)方嗜酸乳桿菌片可提高糞便的含水量，促進腸道的蠕動，對于便秘，具有一定的治療作用，對于便秘所導(dǎo)致的腸道菌群的紊亂具有一定的改善作用，常用治療便秘的酚酞片，在長期使用后，易產(chǎn)生藥物的依賴性，藥物過量或長期濫用時可造成電解質(zhì)紊亂，誘發(fā)心律失常、神志不清、肌痙攣以及倦怠無力等癥狀，且臨床有出現(xiàn)皮疹、瘙癢、發(fā)熱等癥狀[5]。此次實驗顯示，長期使用酚酞片對腸道菌群的平衡具有一定的損傷。而使用益生菌制劑復(fù)方嗜酸乳桿菌片后，便秘有所緩解，并且對腸道菌群具有一定的保護作用，如今益生菌在生活中應(yīng)用非常廣泛,醫(yī)學(xué)方面對其研究也越來越火熱[6]。腸道菌群與機體互相影響，紊亂的腸道菌群結(jié)構(gòu)會通過代謝產(chǎn)物等途徑影響機體正常的生理功能，機體新陳代謝、飲食等異常也會影響腸道的菌群結(jié)構(gòu)[7]，使用益生菌制劑代替常用化學(xué)藥物來治療腸道相關(guān)疾病在未來或有較大的發(fā)展前景。