周彬 范瑜潔 聶穎 夏帥帥 張偉 李亮

〔摘要〕 目的 探討補(bǔ)陽(yáng)還五湯（Buyang Huanwu Decoction， BYHWD）聯(lián)合骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞（bone marrow mesenchymal stem cells， BMSCs）移植對(duì)保護(hù)脊髓損傷（sipnal cord injury， SCI）氣虛血瘀證紅核神經(jīng)元是否能產(chǎn)生協(xié)同增效作用。方法 將30只雄性SD大鼠隨機(jī)分為5組：正常組、氣虛血瘀組、BYHWD組、BMSCs組、BYHWD+BMSCs組，每組6只。采用游泳力竭法聯(lián)合紅核脊髓束（rubrospinal tract， RST）橫斷手術(shù)制備氣虛血瘀證大鼠模型，并予以相應(yīng)干預(yù)。通過(guò)斜板實(shí)驗(yàn)觀察運(yùn)動(dòng)功能恢復(fù)情況，尼氏染色觀察紅核神經(jīng)元胞體形態(tài)及數(shù)量，在RST橫斷點(diǎn)上方注射熒光金（FG）進(jìn)行神經(jīng)束路示蹤，觀察紅核神經(jīng)元胞體形態(tài)及數(shù)量。結(jié)果 術(shù)后14 d、28 d，BYHWD+BMSCs組斜板實(shí)驗(yàn)評(píng)分高于氣虛血瘀組、BYHWD組及BMSCs組（P<0.05或P<0.01）。尼氏染色顯示與正常組相比，氣虛血瘀組尼氏體體積及數(shù)量減少，胞漿染色較淺;BYHWD組、BYHWD+BMSCs組的情況優(yōu)于氣虛血瘀組，尤其是BYHWD+BMSCs組。FG逆行示蹤顯示氣虛血瘀組胞體熒光強(qiáng)度減弱、形態(tài)不規(guī)則、邊緣模糊不清，且紅核正常神經(jīng)元數(shù)目較正常組明顯減少（P<0.01），BYHWD 組、BMSCs組、BYHWD+BMSCs組較模型組增加（P<0.01），特別是BYHWD+BMSCs組（P<0.01）。結(jié)論 BYHWD聯(lián)合BMSCs移植對(duì)保護(hù)SCI氣虛血瘀證逆行性潰變的紅核神經(jīng)元能產(chǎn)生協(xié)同增效作用。

〔關(guān)鍵詞〕 補(bǔ)陽(yáng)還五湯;骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞;脊髓損傷;氣虛血瘀證;紅核脊髓束

〔中圖分類(lèi)號(hào)〕R285.5 ? ? ? 〔文獻(xiàn)標(biāo)志碼〕A ? ? ? 〔文章編號(hào)〕doi：10.3969/j.issn.1674-070X.2019.05.002

〔Abstract〕 Objective To observe whether Buyang Huanwu Decoction （BYHWD） combined with bone marrow mesenchymal stem cells （BMSCs） transplantation could be cooperative remarkably for protection to red nucleus neurons in spinal cord injury （SCI） with Qi-deficiency and blood-stasis syndrome. Methods Totally 30 male rats were randomly divided into the following 5 groups： a normal group， a Qi-deficiency and blood-stasis group， a BYHWD group， a BMSCs group， a BYHWD+BMSCs group， with 6 rats in each group. The rat model of Qi-deficiency and blood-stasis syndrome was established by swimming exhaustion combined with the transection of rubrospinal tract （RST）， and giving corresponding intervenes. The recovery of motor function was observed by inclined plate test， and the morphology and number of red nucleus neurons were observed by Nissl staining. The nerve tract was traced by injection of fluorescent gold （FG） above the RST transection point， and the morphology and number of red nucleus neurons were observed. Results At 14 d and 28 d after operation， the oblique plate test scores of the BYHWD + BMSCs group were higher than those of the Qi-deficiency and blood-stasis group， the BYHWD group and the BMSCs group （P<0.05 or P<0.01）. Compared with the normal group， Nissl staining showed that the volume and quantity of Nissl body in the Qi-deficiency and blood-stasis group was decreased， and the cytoplasmic staining was shallow; the situation of the BYHWD group and the BYHWD + BMSCs group was better than that of the Qi-deficiency and blood-stasis group， especially the BYHWD + BMSCs group. FG retrograde tracing showed that the fluorescence intensity was weakened， the shape was irregular and the edge was blurred in the the Qi-deficiency and blood-stasis group， and the number of normal neurons in the red nucleus was significantly decreased compared with the normal group （P<0.01）， while the number of normal neurons in the BYHWD group， the BMSCs group and the BYHWD+BMSCs group was increased compared with the model group （P<0.01）， especially in the BYHWD + BMSCs group （P<0.01）. Conclusions BYHWD combined with BMSCs transplantation can cooperate remarkably to protect red nucleus neurons in retrograde degeneration of SCI with Qi-deficiency and blood-stasis syndrome.

〔Keywords〕 Buyang Huanwu Decoction; bone marrow mesenchymal stem cells; spinal cord injury; Qi-deficiency and blood-stasis syndrome; red nucleus spinal tract

脊髓損傷（spinal cord injury， SCI）后受損軸突可通過(guò)繼發(fā)逆行性潰變導(dǎo)致神經(jīng)元胞體發(fā)生死亡與萎縮，因此挽救神經(jīng)元胞體，維持其正常生理功能，是軸突修復(fù)與再生的前提[1]。歷代醫(yī)家認(rèn)為補(bǔ)陽(yáng)還五湯（Buyang Huanwu Decoction， BYHWD）可以用來(lái)治療偏癱、截癱或肢體痿軟等癥，中醫(yī)學(xué)認(rèn)為SCI屬于督脈受損，瘀血阻絡(luò)，加之患者元?dú)獯髠揖门P傷氣，多見(jiàn)氣虛血瘀之證[2]。我們前期研究發(fā)現(xiàn)[3-4]，BYHWD不僅提高了SCI大鼠軸突橫斷后紅核神經(jīng)元的存活率，還明顯降低氣虛血瘀型SCI大鼠脊髓冠狀切片傷側(cè)面積比率。有研究發(fā)現(xiàn)，骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞（bone marrow mesenchymal stem cells， BMSCs）分化成神經(jīng)元樣細(xì)胞后，通過(guò)分泌相關(guān)因子等改善中樞神經(jīng)受損區(qū)域的微環(huán)境，促進(jìn)SCI修復(fù)[5]。那么BYHWD聯(lián)合BMSCs移植對(duì)氣虛血瘀型SCI大鼠紅核神經(jīng)元能否發(fā)生協(xié)同效應(yīng)，發(fā)揮神經(jīng)保護(hù)作用？因此，首先建立SCI氣虛血瘀證大鼠的病證結(jié)合模型，在此基礎(chǔ)上，采用行為學(xué)檢測(cè)、神經(jīng)示蹤、尼氏染色方法觀察BYHWD聯(lián)合BMSCs移植對(duì)SCI氣虛血瘀證紅核神經(jīng)元的保護(hù)能否產(chǎn)生協(xié)同增效作用。

1 材料與方法

1.1 ?材料

1.1.1 ?動(dòng)物 ?成年雄性健康Sprague-Dawley大鼠30只，體質(zhì)量200～220 g（合格證編號(hào)：43004700014842），由湖南中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供（許可證編號(hào)：SYXK[湘]2013-0005），自由飲食進(jìn)水，分籠喂養(yǎng)，飼養(yǎng)環(huán)境溫度22～25 ℃，相對(duì)濕度50%～70%。

1.1.2 ?藥物及細(xì)胞 ?BYHWD（《醫(yī)林改錯(cuò)》）處方：黃芪120 g，當(dāng)歸尾9 g，赤芍4.5 g，川芎3 g，地龍3 g，桃仁3 g，紅花3 g[6]。中藥飲片購(gòu)于老百姓大藥房連鎖股份有限公司，加水回流提取2次，第一次加10倍水提取2 h，第二次加8倍水提取1.5 h，藥液過(guò)濾、合并濃縮成每克浸膏含生藥2 g，蒸餾水溶解成濃度1 g/mL，置4 ℃冰箱保存?zhèn)溆?。BMSCs購(gòu)于湖南省長(zhǎng)沙市盈潤(rùn)生物技術(shù)有限公司（YRBio PC059），細(xì)胞濃度為1×106/mL。

1.1.3 ?主要試劑及儀器 ?DMEM/F12培養(yǎng)基（美國(guó)Gibco公司），BrdU（美國(guó)SIGMA公司），熒光金（Fluoro-Gold，美國(guó)Fluorochrome公司），ECL發(fā)光試劑盒（美國(guó)Pierce公司），BX43型雙目生物攝像顯微鏡（日本OLYMPUS）。

1.2 ?方法

1.2.1 ?SCI氣虛血瘀證復(fù)合動(dòng)物模型造模 ?氣虛血瘀證負(fù)荷動(dòng)物造模參考文獻(xiàn)[4]，采用“游泳力竭法”，力竭指征為游泳動(dòng)作失調(diào)、水淹沒(méi)鼻尖、身體下沉超過(guò)10 s不能浮出水面。剛從水中撈出的大鼠呈疲憊無(wú)力狀，表現(xiàn)為目微閉，以后肢撐地慢慢抬起前肢以立身，大喘，搖晃甚至后倒，多不動(dòng)或挪步蹣跚，無(wú)力抵抗、一觸即倒，時(shí)間持續(xù)21 d。21 d在脊髓頸椎C3-C4之間橫斷右側(cè)紅核脊髓束（rubrospinal tract， RST），建立局部“血瘀”狀態(tài)。動(dòng)物蘇醒后右側(cè)前肢屈曲，緊貼軀干，運(yùn)動(dòng)不協(xié)調(diào)，右前爪不能張開(kāi)，表明造模成功。

1.2.2 ?動(dòng)物分組及干預(yù) ?將造模成功的24只大鼠隨機(jī)分為4組：氣虛血瘀組、BYHWD組、BMSCs組、BYHWD+BMSCs組，每組6只。另取6只正常大鼠為對(duì)照。BYHWD組、BYHWD+BMSCs組以BYHWD 1 mL灌胃，1次/d，連續(xù)28 d，其余各組均以等容量生理鹽水灌胃。BMSCs組和BYHWD+BMSCs組在造模2 d后在脊髓損傷點(diǎn)注射10 μL被BrdU標(biāo)記的BMSCs，其余3組在相同的部位注射等容量的生理鹽水。藥物干預(yù)28 d處死所有動(dòng)物。

1.2.3 ?肢體行為學(xué)檢測(cè) ?以RST橫斷術(shù)前、術(shù)后1 d、14 d、28 d觀察大鼠前肢功能恢復(fù)情況。運(yùn)用改良的Rivlin和Tator法，行斜板實(shí)驗(yàn)[7]。具體方法是將大鼠身體軸線垂直與斜板縱軸放置，檢測(cè)停留時(shí)間，5 s后增加斜板角度，每次升高5°，以大鼠能夠停留5 s的最大角度為其對(duì)應(yīng)的功能值。每只大鼠測(cè)量3次，記錄分?jǐn)?shù)最高者。

1.2.4 ?動(dòng)物處理與軸突逆行示蹤 ?藥物干預(yù)25 d，每組大鼠麻醉，用微量注射器將0.5 μL特異性軸突示蹤劑2%熒光金（FG）緩慢注入RST橫斷點(diǎn)上方1 mm處，進(jìn)行RST軸突逆行示蹤。存活3 d后將動(dòng)物再次麻醉，心臟灌注固定，取腦，去首尾兩端，保留中腦和腦橋部分，4 ℃下再用4%多聚甲醛固定2 h，依次使用10%、20%、30%蔗糖梯度浸泡沉底。做連續(xù)冰凍切片，片厚20 μm，倒置熒光顯微鏡下觀察紅核神經(jīng)元形態(tài)，100×鏡下用圖像分析系統(tǒng)計(jì)數(shù)被FG標(biāo)記紅核陽(yáng)性神經(jīng)元的個(gè)數(shù)。熒光淬滅后繼續(xù)將切片用于尼氏染色。

1.2.5 ?尼氏染色 ?上述切片分別用氯仿1 min、90%酒精l min、70%酒精1 min、自來(lái)水洗2 min，10%硫堇染色10 min、自來(lái)水洗3 min，85%乙醇脫水20 s、90%乙醇30 s、95%乙醇1 min×2、100%乙醇2 min×2、二甲苯2 min×2，中性樹(shù)膠封片。顯微鏡下觀察紅核神經(jīng)元的形狀，400×鏡下計(jì)數(shù)每個(gè)視野神經(jīng)元數(shù)目。

1.2.6 ?統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 ?使用SPSS 19.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，實(shí)驗(yàn)結(jié)果以“x±s”表示，采用One-Way ANOVA。所有數(shù)據(jù)均進(jìn)行正態(tài)性、方差齊性檢驗(yàn)，方差齊采用LSD法，若方差不齊采用Dunnett T3。不滿(mǎn)足正態(tài)檢驗(yàn)則使用秩和檢驗(yàn)。以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 ?動(dòng)物一般情況

氣虛血瘀組、BYHWD組、BMSCs組、BYHWD+BMSCs組造模后大鼠出現(xiàn)體質(zhì)量減輕、攝食量減少，毛發(fā)暗淡，倦怠嗜睡，口唇、爪甲顏色淺淡，雙目無(wú)神，喜欠伸等。伴發(fā)右側(cè)前肢屈曲，緊貼軀干，運(yùn)動(dòng)不協(xié)調(diào)，右前爪不能張開(kāi)，說(shuō)明SCI氣虛血瘀證造模成功。在造模及干預(yù)過(guò)程中無(wú)動(dòng)物死亡。

2.2 ?斜板實(shí)驗(yàn)結(jié)果比較

RST術(shù)后1 d，與正常組相比，其它4組評(píng)分大幅下降（P<0.01）。術(shù)后14 d、28 d，BYHWD+BMSCs組評(píng)分高于氣虛血瘀組、BYHWD組、BMSCs組（P<0.05或P<0.01）。見(jiàn)表1。

2.3 ?FG標(biāo)記的紅核神經(jīng)元比較

FG的注射區(qū)為RST橫斷點(diǎn)上方，注射3 d后觀察中腦紅核FG標(biāo)記神經(jīng)元，陽(yáng)性標(biāo)記神經(jīng)元在熒光顯微鏡下通過(guò)紫外激發(fā)呈藍(lán)白色光。正常組紅核處可見(jiàn)大量FG標(biāo)記的陽(yáng)性神經(jīng)元，神經(jīng)元形態(tài)規(guī)則，輪廓清晰，胞體飽滿(mǎn)，突起明顯;氣虛血瘀組紅核僅見(jiàn)少量的陽(yáng)性神經(jīng)元，熒光強(qiáng)度減弱，且細(xì)胞形態(tài)不規(guī)則，邊緣模糊不清，胞體萎縮甚至變性，突起不清晰，與正常組相比有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）;BYHWD組、BMSCs組、BYHWD+BMSCs組陽(yáng)性神經(jīng)元較氣虛血瘀組增多（P<0.01），但前兩組低于正常組（P<0.01）;BYHWD組、BMSCs組陽(yáng)性神經(jīng)元數(shù)明顯低于BYHWD+BMSCs組（P<0.01）。見(jiàn)表2，圖1。

2.4 ?中腦紅核尼氏染色比較

正常組可見(jiàn)中腦紅核區(qū)細(xì)胞密集，細(xì)胞形態(tài)正常，胞體和突起輪廓清晰，尼氏體較大而多，胞漿染色深，著色均一，呈現(xiàn)虎斑樣;氣虛血瘀組細(xì)胞密度稀疏，細(xì)胞皺縮明顯，部分細(xì)胞胞漿空泡樣改變，尼氏體模糊，胞漿染色淺;BYHWD組、BMSCs組、BYHWD+BMSCs組細(xì)胞較氣虛血瘀組密集，許多細(xì)胞均有明顯的突起，偶見(jiàn)細(xì)胞皺縮，尼氏體體積及數(shù)量減少，胞漿染色較淺，而B(niǎo)YHWD+BMSCs組優(yōu)于BYHWD組、BMSCs組。氣虛血瘀組紅核神經(jīng)元數(shù)目低于正常組（P<0.01）。BYHWD、BYHWD+BMSCs組紅核神經(jīng)元數(shù)目增多，與氣虛血瘀組相比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01），但仍低于正常組（P<0.01），BYHWD+BMSCs組紅核神經(jīng)元數(shù)量高于BMSCs組（P<0.01）。見(jiàn)表2，圖2。

3 討論

大鼠RST起自中腦紅核，RST纖維交叉到對(duì)側(cè)，脊髓外側(cè)索后部下行，投射到V-Ⅶ板層的中間神經(jīng)元，負(fù)責(zé)支配前肢的精細(xì)運(yùn)動(dòng)[8]。因RST束路清晰，造模簡(jiǎn)便易行，創(chuàng)傷小，故RST橫斷模型常用于SCI修復(fù)的研究。本研究在病證結(jié)合的研究指導(dǎo)思想下，首先以氣虛為切入點(diǎn)，根據(jù)中醫(yī)學(xué)“勞則氣耗”理論，采用“游泳力竭法”，通過(guò)強(qiáng)迫游泳使大鼠達(dá)到力竭程度，持續(xù)力竭導(dǎo)致氣虛，久之“因虛致瘀”達(dá)到全身性氣虛血瘀狀態(tài)[9];隨后聯(lián)合RST橫斷手術(shù)損傷脊髓局部，造成明確的局部血瘀狀態(tài)，成功復(fù)制了SCI氣虛血瘀證復(fù)合模型。

研究發(fā)現(xiàn)，SCI后軸突的再生情況并不樂(lè)觀，因?yàn)檩S突的損傷可能通過(guò)逆行性潰變，導(dǎo)致遠(yuǎn)處的神經(jīng)元胞體發(fā)生死亡與萎縮[10]。我們前期研究已證實(shí)黃芪注射液可改善軸漿運(yùn)輸能力，提高胞體的存活率，對(duì)逆行潰變的紅核神經(jīng)元具有保護(hù)作用[11]; BYHWD拮抗SCI大鼠運(yùn)動(dòng)區(qū)皮質(zhì)神經(jīng)元凋亡改善SCI 大鼠后肢運(yùn)動(dòng)作用[12]。目前BMSCs移植成為治療SCI的理想選擇，但移植的BMSCs活力低，在體內(nèi)不容易存活、增殖和分化。故本研究運(yùn)用BYHWD+BMSCs對(duì)氣虛血瘀型SCI大鼠進(jìn)行干預(yù)，發(fā)現(xiàn)斜板實(shí)驗(yàn)評(píng)分明顯高于氣虛血瘀組、BYHWD組、BMSCs組，證明BYHWD+BMSCs可以改善其運(yùn)動(dòng)功能。

Li C等[13]認(rèn)為有足夠數(shù)量的神經(jīng)元存活，是SCI后軸突修復(fù)的先決條件，因?yàn)檩S突再生所需的物質(zhì)只能在神經(jīng)元胞體內(nèi)合成，一旦神經(jīng)元胞體死亡，軸突就難以再生，即神經(jīng)元胞體存活越多，軸突再生的希望也就越大[14]。本實(shí)驗(yàn)中通過(guò)FG逆行示蹤標(biāo)記神經(jīng)元及尼氏染色反映神經(jīng)元胞體恢復(fù)情況。FG是一種特異性軸突逆行示蹤劑，當(dāng)被注射到軸突周?chē)?，可被軸突緩慢攝取，通過(guò)軸漿運(yùn)輸逐漸流向胞體，因而可以在胞體檢測(cè)到FG的存在。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，正常組可見(jiàn)大量FG標(biāo)記的紅核陽(yáng)性神經(jīng)元，形態(tài)規(guī)則，輪廓清晰，胞體飽滿(mǎn)，突起明顯，說(shuō)明正常組軸突的軸漿運(yùn)輸能力正常，可將大量FG運(yùn)輸?shù)桨w;氣虛血瘀組紅核僅見(jiàn)少量的陽(yáng)性神經(jīng)元，熒光強(qiáng)度減弱，且細(xì)胞形態(tài)不規(guī)則，邊緣模糊不清，說(shuō)明RST橫斷后軸突發(fā)生了一定程度的崩解，影響軸漿運(yùn)輸能力，使得僅有少量FG被輸送到胞體，而細(xì)胞形態(tài)的不規(guī)則又進(jìn)一步說(shuō)明胞體發(fā)生了逆行性潰變，出現(xiàn)萎縮或壞死;BYHWD組、BMSCs組、BYHWD+BMSCs組的情況優(yōu)于氣虛血瘀組，尤其是BYHWD+BMSCs組，這說(shuō)明BYHWD或BMSCs的單獨(dú)使用可以改善軸突的軸漿運(yùn)輸能力，挽救逆行性潰變的紅核神經(jīng)元胞體，而二者的聯(lián)合使用則產(chǎn)生了一定的協(xié)同增效作用。

尼氏體是神經(jīng)元內(nèi)特有的物質(zhì)之一，分布在核周體和樹(shù)突內(nèi)，是細(xì)胞內(nèi)一種呈斑塊狀或顆粒狀的噬堿性物質(zhì)，能與堿性染液結(jié)合并染色。尼氏體的主要功能是合成蛋白質(zhì)。在正常情況下，尼氏體體積大且數(shù)量多，這反應(yīng)神經(jīng)元合成蛋白質(zhì)的功能較強(qiáng)。一旦神經(jīng)元受損，其體積縮小，數(shù)量可減少甚至消失[15]。因此尼氏體的形態(tài)及數(shù)量可以提示神經(jīng)元功能正常與否。尼氏染色結(jié)果顯示，正常組可見(jiàn)中腦紅核區(qū)細(xì)胞密集，細(xì)胞形態(tài)正常，胞體和突起輪廓清晰，尼氏體較大而多，胞漿染色深，著色均一，呈現(xiàn)虎斑樣，說(shuō)明紅核神經(jīng)元胞體的形態(tài)和功能均正常;氣虛血瘀組細(xì)胞密度稀疏，細(xì)胞皺縮明顯，部分細(xì)胞胞漿空泡樣改變，尼氏體模糊，胞漿染色淺，說(shuō)明神經(jīng)元胞體形態(tài)和功能受損嚴(yán)重;BYHWD組、BYHWD+BMSCs組的情況優(yōu)于氣虛血瘀組，特別是BYHWD+BMSCs組，說(shuō)明BYHWD或BMSCs的單獨(dú)使用能保護(hù)RST橫斷后的紅核神經(jīng)元胞體，維持其正常功能，而二者的聯(lián)合使用則產(chǎn)生了一定的協(xié)同增效作用。

由此可見(jiàn)，BYHWD聯(lián)合BMSCs移植對(duì)保護(hù)SCI氣虛血瘀證逆行性潰變的紅核神經(jīng)元能產(chǎn)生協(xié)同增效作用，其更深層次的機(jī)制還需進(jìn)一步深入研究。

參考文獻(xiàn)

[1] MAZZONE G L， VEERARAGHAVAN P， GONZALEZ-INCHAUSPE C， et al. ASIC channel inhibition enhances excitotoxic neuronal death in an in vitro model of spinal cord injury[J]. Neuroscience， 2017，

343：398-410.

[2] 宋漢秋.補(bǔ)陽(yáng)還五湯治療急性缺血性腦梗塞46例[J].陜西中醫(yī)， 2013，34（2）：158-160.

[3] 陳 ?安，王 ?慧，伍校瓊，等.補(bǔ)陽(yáng)還五湯對(duì)大鼠脊髓損傷后紅核脊髓束再生及功能修復(fù)的影響[J].神經(jīng)解剖學(xué)雜志，2007，23（6）：587-590.

[4] LIANG LI， FENG LI， JIAN YIN， et al. Establishment and evaluation of a rat model of spinal cord injury with the pathopattern of Qi-deficiency and blood-stasisin traditional chinese medicine[J]. Digital Chinese Medicine， 2018，1（1）：102-112.

[5] 孫經(jīng)淞，周雪穎，曲淑賢，等.骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞移植對(duì)脊髓損傷的修復(fù)作用[J].中國(guó)組織工程研究，2018，22（1）： 59-64.

[6] YU P， GUAN L， ZHOU L， et al. Upregulation of glutamate metabolism by BYHWD in cultured astrocytes following oxygen-glucose deprivation/reoxygenation in part depends on the activation of p38 MAPK[J]. Experimental and Therapeutic Medicine， 2017，13（6）： 3089-3096.

[7] 陳 ?萌，馬 ?泉，鄭小影，等.大鼠脊髓橫斷模型的建立及米諾環(huán)素對(duì)膠質(zhì)纖維酸性蛋白表達(dá)的影響[J].解剖學(xué)雜志，2014，37（3）：352-355.

[8] MARTINEZ-LOPEZ J E， MORENO-BRAVO J A， MADRIGAL MP， et al. Red nucleus and rubrospinal tract disorganization in the absence of Pou4f1[J]. Frontiers in Neuroanatomy， 2015，9：8.

[9] 扈新剛，張?jiān)蕩X，柳洪勝，等.氣虛血瘀大鼠模型表征及血液流變學(xué)研究[J].天津中醫(yī)藥，2007，24（2）：138-141.

[10] ZANGERL B， WHATHAM A， KIM J， et al. Reconciling visual field defects and retinal nerve fibre layer asymmetric patterns in retrograde degeneration： an extended case series[J]. Clinical and Experimental Optometry， 2017，100（3）： 214-226.

[11] 李 ?亮，楊 ?萍，張 ?薇，等.黃芪注射液對(duì)大鼠紅核神經(jīng)元逆行潰變的影響[J].臨床神經(jīng)病學(xué)雜志，2014，27（6）：446-449.

[12] 黃 ?勝，袁 ?莉，陳 ?安，等.補(bǔ)陽(yáng)還五湯及其四類(lèi)有效部位對(duì)脊髓損傷大鼠大腦運(yùn)動(dòng)皮質(zhì)的神經(jīng)保護(hù)作用[J].湖南中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)，2016，36（9）：36-39.

[13] LI C， ZHANG X， CAO R， et al. Allografts of the acellular sciatic nerve and brain-derived neurotrophic factor repair spinal cord injury in adult rats[J]. PLoS ONE， 2012，7（8）：e42813.

[14] 王亞康，朱 ?超，羅卓荊.NRG-1參與髓鞘再生及修復(fù)的研究進(jìn)展[J].神經(jīng)解剖學(xué)雜志，2015，31（3）：382-386.

[15] JING L， WANG J G， ZHANG J Z， et al. Upregulation of ICAM-1 in diabetic rats after transient forebrain ischemia and reperfusion injury[J]. Journal of Inflammation （London），2014，11（1）：35.