劉 亞 余志斌

（重慶天府礦務(wù)局職工總醫(yī)院檢驗科，重慶 400700）

特發(fā)性血小板減少性紫癜（idiopathic thrombocytopenic purpura，ITP）屬于臨床治療中一種具有較高發(fā)生率的出血性疾病，多數(shù)研究者均認為疾病的發(fā)生與免疫因素、病毒感染存在密切相關(guān)性[1]?？剐牧字贵w（ACA）為屬于一種抗磷脂抗體，其結(jié)合在磷脂抗原中，是自身免疫性抗體，與諸多自身免疫性疾病的發(fā)生均存在密切關(guān)系。既往研究顯示，ACA通過與血小板中的膜磷脂抗生素原相互結(jié)合，破壞血小板，導(dǎo)致血小板出現(xiàn)消耗性減少[2]。本研究主要探討血清ANA、ACA水平與ITP存在的相關(guān)性，報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料：選取48例2016年4月至2018年6月在本院接受診治的ITP患者作為研究對象。其中男16例，女32例，年齡14～58歲，平均（38.9±4.8）歲。選擇相同時間段在本院接受健康體檢，且體檢結(jié)果為良好的48名健康者作為參照組，所有入選者均簽署知情同意書，自愿加入研究。納入者男18名，女30名；年齡15～59歲，平均（38.7±4.6）歲；在納入者相關(guān)基線資料（年齡、性別等）對比上，兩組間差異無顯著性（P＞0.05），具有可比性。

1.2 病例納入及排除標準：納入標準：①符合ITP相關(guān)臨床診斷標準[3]；②血小板計數(shù)≤50×109/mL；③簽署相關(guān)知情文件，自愿參與研究；④臨床檢驗資料齊全。排除標準：①伴有系統(tǒng)性紅斑狼瘡；②伴有其他結(jié)締組織病。

1.3 方法：抗核抗體、抗心磷脂抗體試劑均為德國EUROIMMUN公司提供。應(yīng)用到儀器主要為 BC5800 全自動細胞分析儀（深圳邁瑞）、全自動酶標分析儀（上海訊達儀器公司）。在受檢者空腹狀態(tài)下采集其2 mL靜脈血作為標本，靜置使血清分離，該分離過程控制在3 h內(nèi)結(jié)束，然后將樣本放置于-20 ℃環(huán)境中待測。檢驗過程中相關(guān)操作均嚴格按照儀器及試劑說明書規(guī)范進行。

1.3.1 ACA檢測：通過酶聯(lián)免疫吸附試驗法行ACA含量檢測。使用稀釋液按照1∶201比例將待測血清樣本稀釋，然后再與質(zhì)控、標準血清同時加至包被微孔中。經(jīng)過孵育洗滌流程之后再將酶標記抗體加入。完成孵育洗滌流程后再將顯色劑加入，通過酶標儀進行比色。以標準曲線為根據(jù)將標本中抗心磷脂抗體含量計算出來。

1.3.2 ANA檢測：抗原基質(zhì)為猴肝片、Hep-2細胞。通過間接免疫熒光法實施ANA含量檢測。以猴肝片以及Hep-2細胞細胞核是否有特異性熒光產(chǎn)生作為根據(jù)判斷檢測標本中是否存在ANA。

1.3.3 ENA檢測：選用免疫印跡法進行ANA含量檢測。先將皮膚敏感抗原、將親和層析純化核抗原核糖核蛋白、Scl-70、Jo-1、平滑肌抗原轉(zhuǎn)印至硝酸纖維薄膜上，再將血清、酶標記抗體加入。以硝酸纖維薄膜為根據(jù)判斷是否顯現(xiàn)顏色。以滴度是否＞1∶100作為根據(jù)，判斷是否存在某種抗ENA抗體。具體操作按照試劑盒說明書規(guī)范實施。給予患者7 d治療后，再抽取其靜脈血送檢，行血小板計數(shù)復(fù)查。治療方法為給予患者免疫球蛋白、糖皮質(zhì)激素、止血藥等。

1.4 觀察指標及檢驗結(jié)果判斷：觀察ACA、ANA以及ENA檢測結(jié)果，ACA含量＞12 IU/mL判定為陽性；抗核抗體滴度＞1∶100判斷為ANA陽性；觀察研究組患者治療前、后血小板計數(shù)。

1.5 統(tǒng)計學(xué)方法：以SPSS 22.0軟件為工具行數(shù)據(jù)統(tǒng)計學(xué)分析。計數(shù)資料（檢測陽性率等）采用例數(shù)和百分比（%）表示，比較行χ2檢驗；計量資料（血小板計數(shù)）采用均數(shù)±標準差（±s）表示，比較行t檢驗。P＜0.05表示差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。

表1 兩組ACA、ANA檢測結(jié)果對比[n（%）]

表2 兩組抗ENA抗體檢測結(jié)果對比[n（%）]

表3 兩組ANA及ACA陽性、陰性ITP治療前后血小板計數(shù)比較（±s）

表3 兩組ANA及ACA陽性、陰性ITP治療前后血小板計數(shù)比較（±s）

組別 例數(shù) 治療前(×10/L) 治療后(×10/L) t P 99 ANA陽性組 14 19.28±11.35 202.45±119.25 5.694 0.000 ANA陰性組 34 19.90±10.63 221.35±142.35 5.788 0.000 t-0.087 0.756 - -P-0.926 0.355 - -ACA陽性組 20 18.26±11.36 203.42±115.62 7.111 0.000 ACA陰性組 28 18.82±10.47 240.46±108.94 8.241 0.000 t-0.059 2.875 - -P-0.950 0.032 - -

2 結(jié) 果

2.1 兩組ACA、ANA檢測結(jié)果比較：研究組ACA/ANA陽性率均顯著高于參照組（P＜0.05），見表1。

2.2 兩組抗ENA抗體檢測結(jié)果比較：在研究組患者中，有10例ANA為陽性的標本中出現(xiàn)≥1種ENA抗體，抗SSA、nRNP陽性最高，見表2。2.3 兩組治療前后血小板計數(shù)比較：治療后，所有患者血小板計數(shù)均有顯著提高，但ACA陽性組顯著低于ACA陰性組（P＜0.05），見表3。

3 討 論

ACA是一種自身抗體，其靶抗原為內(nèi)皮細胞膜上帶負電荷心磷脂以及血小板。ACA能夠與帶負電荷磷脂、狼瘡樣抗凝物質(zhì)發(fā)生交叉反應(yīng)。臨床研究顯示，ACA與習(xí)慣性流產(chǎn)、血栓形成、神經(jīng)系統(tǒng)疾病發(fā)生、血小板減少均存在密切相關(guān)性[4]。本研究分析結(jié)果顯示，研究組ACA陽性率高達70.83%，而健康者陽性率則為0。張文蘭文獻指出，與ACA陰性者相比，ACA陽性者出現(xiàn)血小板減少的概率要高出3倍。曹新春等[5]文獻指出，帶負電荷的磷脂以及其他靶抗原均有可能是ACA的靶抗原。本次研究分析結(jié)果顯示，ACA陽性組患者治療后血小板計數(shù)顯著低于ACA陰性組。該結(jié)果表明，ACA陽性可能是導(dǎo)致ITP患者血小板計數(shù)明顯減少的一個重要原因，具體機制可能如下：①ACA可對血小板活化產(chǎn)生促進作用，血小板活化后構(gòu)成內(nèi)膜的負電荷磷脂能夠翻轉(zhuǎn)到表面，轉(zhuǎn)變能夠與ACA發(fā)生反應(yīng)的狀態(tài)，血小板、ACA二者相互作用，導(dǎo)致巨噬細胞系統(tǒng)對血小板產(chǎn)生的破壞、吞噬作用不斷增加，進而使血小板出現(xiàn)消耗性減少；②血小板在ACA促進下活化后，血小板內(nèi)容物花生四烯酸的釋放明顯減少，對內(nèi)皮細胞釋放前列環(huán)素產(chǎn)生明顯抑制作用，進而引發(fā)血小板聚集，導(dǎo)致血栓形成，進一步減少血小板計數(shù)[6-7]。由此可知，行ACA測定在一定程度上能夠反映ITP患者血清血小板遭受損傷情況，對ITP臨床診斷具有一定意義。

ANA是一種自身抗體的總體，其靶抗原為細胞核內(nèi)各種蛋白質(zhì)分子以及蛋白質(zhì)分子的復(fù)合物[8]。在類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、系統(tǒng)性紅斑狼瘡、血小板減少性紫癜等多種自身免疫性疾病中，細胞核的核內(nèi)染色質(zhì)、核仁、非組蛋白、由相關(guān)蛋白與RNA構(gòu)成的各種核糖核蛋白粒子均能夠成為機體自身免疫反應(yīng)攻擊靶子，最終形成ANA[9]。周蓮等[10]報道指出，在機體其他細胞的細胞核、血小板二者無交叉抗原情況下，ANA陽性可能與血小板減少性紫癜的發(fā)生和進展無關(guān)聯(lián)，但二者存在交叉抗原情況下，ANA則可能是導(dǎo)致血液中血小板計數(shù)減少的一個重要因素。本次研究分析結(jié)果顯示，ITP患者ANA陽性率顯著高于健康者，ANA陽性、陰性組治療后血小板計數(shù)比較無顯著差異。該結(jié)果表明，ITP患者血清中雖然含有抗血小板抗體，但因該抗體、機體其他細胞細胞核二者間未存在交叉抗原，因此ANA產(chǎn)生有可能只是該疾病患者的一種伴隨癥狀，因此該項指標無法作為ITP臨床診斷的輔助性指標。但是當(dāng)ITP患者出現(xiàn)ANA陽性時必須高度警惕，加強隨訪，仔細觀察患者病情是否會發(fā)展成為其他自身免疫性疾病。綜上所述，ACA陽性可能是導(dǎo)致血清血小板含量減少的一個重要影響因素，同時還可反映血小板損傷情況，對ITP診斷及療效、預(yù)后評估均具有重要意義。