何 敏,趙存真,李建柱,趙云煥,吳海港,陳 敏

(1.信陽(yáng)農(nóng)林學(xué)院牧醫(yī)工程學(xué)院信陽(yáng)市獸藥新制劑研究與創(chuàng)制工程技術(shù)中心,河南 信陽(yáng) 464000;2.信陽(yáng)農(nóng)林學(xué)院牧醫(yī)工程學(xué)院河南省大別山區(qū)生態(tài)畜禽健康生產(chǎn)工程研究中心,河南 信陽(yáng) 464000)

天葵子味甘、苦,性寒[1]。具有清熱解毒,消腫散結(jié)之功效。常用于治療乳癰、蛇蟲(chóng)咬傷等。有試驗(yàn)表明,天葵子提取物對(duì)細(xì)菌和真菌具有抑制作用[2]。蒲公英、苦參、白鮮皮具有清熱解毒和消腫消炎的功效,常制作成外用制劑用于治療皮膚疾病。因此將天葵子與這幾種中藥制作成復(fù)方制劑使用,可能會(huì)增強(qiáng)單一藥物治療皮膚疾病的作用。目前在臨床應(yīng)用中未見(jiàn)有報(bào)道將天葵子制成外用制劑使用。治療皮膚炎癥常用的外用制劑有軟膏劑、噴劑等[3]。根據(jù)使用的情況來(lái)看,軟膏劑容易產(chǎn)生涂布不均勻且容易摩擦掉等缺點(diǎn),使用效果不好;噴劑則因?yàn)榱鲃?dòng)性太大容易揮發(fā),而凝膠劑很大程度上克服了以上兩種劑型的缺點(diǎn)。

凝膠劑作為一種新型的外用制劑[4],具有質(zhì)地細(xì)膩、不易流動(dòng)、易于涂布等優(yōu)點(diǎn),并且凝膠劑的制備工藝條件較為簡(jiǎn)單,適合中藥復(fù)方制劑的生產(chǎn)現(xiàn)狀,便于推廣應(yīng)用。因此,為優(yōu)選復(fù)方天葵子的配方、考查其藥效,本試驗(yàn)采用正交試驗(yàn)設(shè)計(jì),以復(fù)合中藥凝膠劑的外觀性狀,黏稠度,涂展性和穩(wěn)定性等指標(biāo)考察中藥、卡波姆-940、甘油、氮酮的用量,選擇復(fù)合天葵子凝膠劑的最佳配比,并對(duì)本試驗(yàn)所選出的最佳復(fù)合天葵子凝膠劑進(jìn)行初步藥效學(xué)探究,以期為應(yīng)用于動(dòng)物皮膚疾病的臨床治療和預(yù)防提供參考。

1 材料

1.1 主要儀器 離心機(jī)(型號(hào)：TGL-16G,沈陽(yáng)理化儀器廠);電子恒溫水浴鍋(型號(hào)：YCX-4,金壇市城西崢嶸試驗(yàn)儀器廠);電子天平(型號(hào)：FA2004,上海蒲春計(jì)量?jī)x器有限公司);冰箱(型號(hào)：BCD-555KWM,合肥美的榮事達(dá)電冰箱有限公司);電熱套(型號(hào)：DZTW,北京市永光明醫(yī)療儀器廠)。

1.2 試驗(yàn)藥品 天葵子、蒲公英、苦參、白鮮皮,購(gòu)自信陽(yáng)張仲景大藥房。甘油、卡波姆-940(CP-940)、羧甲基纖維素鈉(CMC-Na)、氮酮、三乙醇胺,購(gòu)自中國(guó)天津巴斯夫化工有限公司。

1.3 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 家兔5月齡,體重2.0±0.5kg,由信陽(yáng)職業(yè)技術(shù)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。

2 方法

2.1 凝膠劑的制備

2.1.1 中藥有效成分的提取(水提法) 用電子秤稱量天葵子50 g、蒲公英30 g、苦參20 g、白鮮皮20 g。用粉碎機(jī)粉碎藥材,在600 mL蒸餾水中浸泡30 min。煮沸后沸騰30 min,倒出藥液并過(guò)濾。向藥渣中添加蒸餾水進(jìn)行第二煎,方法同第一煎,共3煎。每次600 mL蒸餾水。合并3次所得的濾液并濃縮至120 mL,1∶1(g/mL)濃縮,冷卻。放入4℃冰箱保存待用。

2.1.2 基質(zhì)的選擇 初定基質(zhì)和基礎(chǔ)方配比為：基質(zhì)1%,主藥5%,甘油5%,氮酮2%。以凝膠劑的外觀性狀(顏色、形態(tài)、粘稠度、涂展性)、穩(wěn)定性(55℃、6 h;-20℃、24 h;4 000 r/min離心30 min)為考查指標(biāo),對(duì)卡波姆-940和羧甲基纖維素鈉(CMC-Na)進(jìn)行選擇。

2.1.3 制備方法 稱取處方量的凝膠劑基質(zhì)均勻撒在適量蒸餾水的表面,靜置溶脹24 h。將甘油、氮酮、加入主藥中攪拌均勻后,將其加入凝膠劑基質(zhì)中,混勻。為了避免凝膠劑在處理的過(guò)程中過(guò)酸或過(guò)堿,對(duì)皮膚造成刺激,加入適量三乙醇胺調(diào)節(jié)凝膠劑pH值至7左右,加蒸餾水至足量,攪拌均勻即可。

2.1.4 正交試驗(yàn)設(shè)計(jì) 根據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道,凝膠劑處方中的卡波姆-940用量多在1%。中藥主藥用量多在5% ～15%,甘油用量多在5% ～15%,氮酮用量多在0.5%～1.5%,并結(jié)合預(yù)試驗(yàn)確定的各因素水平,制定因素水平表。因素水平見(jiàn)表1。

表1 因素水平

按照2.1.3的凝膠劑的制備方法和表1進(jìn)行正交試驗(yàn)設(shè)計(jì),正交設(shè)計(jì)見(jiàn)表2,共設(shè)計(jì)9個(gè)處方,分別編號(hào)1～9。

表2 正交設(shè)計(jì)

2.2 質(zhì)量檢測(cè)

2.2.1 穩(wěn)定性檢查 按照正交設(shè)計(jì)確定的凝膠劑配方制備：3份凝膠劑,進(jìn)行穩(wěn)定性檢查。檢查凝膠劑的耐熱、耐寒分層現(xiàn)象,判斷凝膠劑的穩(wěn)定性。(1)耐熱試驗(yàn)：將制備好的凝膠劑置于55℃水浴鍋內(nèi)恒溫放置2 h后取出,恢復(fù)室溫后觀察凝膠有無(wú)分層現(xiàn)象及顏色變化;(2)耐寒試驗(yàn)：將凝膠劑置于-20℃冰箱內(nèi)恒溫放置72 h,恢復(fù)室溫后觀察凝膠有無(wú)分層現(xiàn)象及顏色變化;(3)離心試驗(yàn)：將凝膠劑置于離心機(jī)中,3 000 r/min離心30 min后取出,觀察凝膠有無(wú)分層現(xiàn)象及顏色變化。

2.2.2 刺激性測(cè)定 將制備好的天葵子復(fù)合凝膠劑均勻涂抹于家兔耳朵表面以及背部皮膚表面(除毛,所涂位置家兔不能舔到),2 h后觀察涂布部位有無(wú)發(fā)紅、腫脹等刺激性。

2.2.3 其他檢測(cè) 通過(guò)觀察、涂抹等方法對(duì)復(fù)方天葵子的外觀、黏稠度、延展性等進(jìn)行檢測(cè)。

2.2.4 評(píng)分標(biāo)準(zhǔn) 為了客觀地對(duì)試驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行評(píng)定,優(yōu)化選定復(fù)方天葵子凝膠劑的最佳配比,根據(jù)《中華人民共和國(guó)獸藥典》(2015版)關(guān)于凝膠劑的質(zhì)量要求,參照參考文獻(xiàn)[7]制定凝膠制劑質(zhì)量檢測(cè)評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)。評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)見(jiàn)表3。

2.3 藥效學(xué)試驗(yàn) 準(zhǔn)備5只年齡、體重均相似的家兔,在其背部用鈍行器物(同一人同一力度)擊打,使其呈現(xiàn)紅、腫炎癥表現(xiàn)。擊打3處,一處用云南白藥氣霧劑處理作為對(duì)照組;一處用天葵子復(fù)合凝膠劑涂抹作為試驗(yàn)組;一處用生理鹽水處理作為空白組。1 d 2次,觀察5 d,并給予治療藥效評(píng)分,評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)為紅腫表現(xiàn),1分;稍微紅腫,2分,恢復(fù)良好,3分。

表3 檢測(cè)評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)

3 結(jié)果

3.1 基質(zhì)的選擇 不同基質(zhì)對(duì)凝膠劑的影響見(jiàn)表4。試驗(yàn)結(jié)果顯示,卡波姆-940均勻細(xì)膩,延展性、黏稠度、穩(wěn)定性好,不分層不變色,更適宜作為復(fù)方天葵子的成膠劑,因此本試驗(yàn)采用卡波姆-940為凝膠基質(zhì)。

表4 凝膠劑基質(zhì)的選擇

3.2 正交試驗(yàn)結(jié)果 按照表3評(píng)分標(biāo)準(zhǔn),從外觀、延展性、黏稠度、穩(wěn)定性和刺激性等方面對(duì)制備的1-9號(hào)中藥凝膠劑進(jìn)行打分評(píng)價(jià),評(píng)分結(jié)果見(jiàn)表5。

由表5的K值和R值結(jié)果可見(jiàn),各因素影響凝膠劑制劑質(zhì)量大小順序?yàn)榭ú?40＞主藥＞氮酮＞甘油,得出最佳配比組合為A2B3C2D3,即1.5%卡波姆940,15%主藥,10%甘油,1.5%氮酮。隨后按照得出的各因素最佳組合制備凝膠劑,并進(jìn)行質(zhì)量檢測(cè)驗(yàn)證,結(jié)果顯示,此配方制備的凝膠劑外觀細(xì)膩均勻,黏稠性及涂展性佳,穩(wěn)定性好,對(duì)動(dòng)物皮膚無(wú)刺激性,評(píng)分為22.7,評(píng)分最高。

表5 凝膠制劑評(píng)分結(jié)果

3.3 藥效學(xué)結(jié)果 通過(guò)上述試驗(yàn),選定1.5%卡波姆-940,15%主藥,10%甘油,1.5%氮酮的處方為本試驗(yàn)的最佳方案,因此對(duì)最佳配比的復(fù)方天葵子進(jìn)行初步藥效探究,將所制復(fù)方中藥凝膠劑涂抹于已經(jīng)致炎的5只家兔皮膚表面。通過(guò)對(duì)照試驗(yàn)5 d后觀察家兔的恢復(fù)情況表明,以天葵子為主藥的復(fù)合凝膠劑在一定程度上對(duì)治療炎癥有效果。藥物治療效果見(jiàn)表6。

表6 藥物治療效果

4 討論

凝膠劑是一種由藥物與適當(dāng)基質(zhì)混合而成,具有凝膠特性的半固體或黏稠狀液體的制劑[6-7],主要是由成膠劑、保濕劑、透皮促進(jìn)劑、酸堿調(diào)節(jié)劑等組成[8]。在試驗(yàn)中甘油作為保濕劑,且刺激性小,適宜用于皮膚制劑。氮酮是國(guó)內(nèi)廣泛使用的高效皮膚滲透促進(jìn)劑[9],為無(wú)色或淡黃色、透明、無(wú)味、無(wú)毒無(wú)刺激油狀液體,不溶于水,溶于醇、醚、酮、醛、烷、氯仿等大多數(shù)有機(jī)溶劑,對(duì)親水和親油藥物均有很強(qiáng)的透皮作用,通常加入0.2% ～2%即可將透皮吸收效果成倍增加,從而增強(qiáng)藥物療效和化裝品的使用效果,減少主藥和營(yíng)養(yǎng)物的使用,降低成本。

凝膠劑基質(zhì)類(lèi)型可分為親水性凝膠、親脂性凝膠和乳劑型凝膠。其中,在臨床上最為常用的凝膠劑是親水性凝膠劑。目前常用的親水性凝膠劑基質(zhì)有卡波姆-940、羧甲基纖維素鈉等。在選擇凝膠基質(zhì)時(shí)應(yīng)主要考慮以下問(wèn)題,外觀是否光滑透明,質(zhì)地是否均勻細(xì)膩,黏度、稠度是否適宜易于涂布,選擇一個(gè)好的凝膠基質(zhì)是制作凝膠劑的關(guān)鍵。不同的的基質(zhì)具有不同的特性,能夠制備成不同的凝膠制劑,由此產(chǎn)生不同的臨床效果。因此,需要慎重、合理的選擇凝膠基質(zhì)。有資料顯示,卡波姆-940穩(wěn)定性、延展性和涂布效果都很好[10-11],通過(guò)試驗(yàn)對(duì)比,本試驗(yàn)選用卡波姆-940作為為復(fù)方天葵子凝膠劑的基質(zhì)。

藥物制成凝膠劑型,能較長(zhǎng)時(shí)間與作用部位緊密粘附,制法簡(jiǎn)單,使用舒適。中藥凝膠劑將傳統(tǒng)中藥制劑的處方和凝膠劑制備技術(shù)相結(jié)合,在使用上方便,并且易于接受。中藥凝膠劑不僅可以容納中藥提取物,也可以容納中藥材極細(xì)粉,制備工藝也較為簡(jiǎn)單,是一種良好的藥用劑型,有廣泛的發(fā)展前景[4]。天葵子入藥具有清熱解毒、消腫止痛、解毒等功效,臨床常用于治療乳腺炎、扁桃體炎、癰腫等癥。研究發(fā)現(xiàn)天葵子中含有的

內(nèi)酯類(lèi)和氰苷類(lèi)化合物具有一定抗菌抗炎的藥理活性[1],因此,本試驗(yàn)將天葵子與臨床常外用治療皮膚疾病的蒲公英、苦參、白鮮皮制備復(fù)方中藥凝膠制劑,以卡波姆-940、主藥、甘油、氮酮作為正交試驗(yàn)的4個(gè)因素,從凝膠劑的外觀、延展性、黏稠度、穩(wěn)定性、刺激性等進(jìn)行檢測(cè),對(duì)復(fù)方天葵子凝膠劑配方進(jìn)行優(yōu)選,并對(duì)其藥效進(jìn)行初步探究。結(jié)果顯示,復(fù)方天葵子凝膠劑的最佳配比為1.5%卡波姆-940,15%主藥,10%甘油,1.5%氮酮,以天葵子為主藥的復(fù)合中藥凝膠劑在治療皮膚炎癥具有一定效果。