王素紅,夏 楠,馬秀亮,劉桂芹,劉文強(qiáng)

(1.山東省聊城市畜牧站,山東 聊城 252000;2.聊城大學(xué)農(nóng)學(xué)院,山東 聊城 252059)

引起動(dòng)物關(guān)節(jié)疾病的原因很多,當(dāng)家畜在不良道路上過度用力或運(yùn)動(dòng),致使關(guān)節(jié)過度屈伸而發(fā)病,造成不同程度的關(guān)節(jié)損傷,副傷寒沙門菌或鏈球菌感染也容易發(fā)生本病。除非發(fā)生嚴(yán)重的病原菌感染,關(guān)節(jié)炎大多數(shù)屬于散發(fā)病例,但是在規(guī)?；B(yǎng)驢場,為了排水便利或美觀,經(jīng)常會(huì)對運(yùn)動(dòng)場進(jìn)行硬化改造。而且由于品種改良,種公驢大型化趨勢造成關(guān)節(jié)負(fù)重增加,從而造成了比較嚴(yán)重的關(guān)節(jié)損傷,發(fā)病率較高。驢的關(guān)節(jié)損傷或挫傷會(huì)造成疼痛、跛行、不愿運(yùn)動(dòng)和關(guān)節(jié)腫脹等,繼發(fā)漿液性關(guān)節(jié)炎,嚴(yán)重影響動(dòng)物的利用價(jià)值。2016-2017年,在山東省規(guī)模化驢場,種公驢發(fā)生了較多的關(guān)節(jié)損傷病例,對此進(jìn)行了診斷,報(bào)告如下。

1 發(fā)病情況調(diào)查

2016年7月-2017年9月,來自山東省某地市的一家繁育驢場,共有54頭患有不同程度關(guān)節(jié)炎癥狀的成年種公驢(德州驢),動(dòng)物長期處于硬質(zhì)磚鋪地面的驢舍和運(yùn)動(dòng)場,關(guān)節(jié)疾病發(fā)病率為67.5%：驢兩側(cè)膝關(guān)節(jié)有明顯水腫、組織增生或腫大等情況(25.9%,14/54),輕度水腫(35.2%,19/54),大部分表現(xiàn)為不愿觸碰和運(yùn)動(dòng)、走路跛行(66.7%,36/54),參考AAEP跛行分級標(biāo)準(zhǔn)達(dá)到3級混合跛行。體溫38.5℃,心率45次/min,食欲無明顯變化。

1.1 樣品采集與處理 隨機(jī)選取8頭發(fā)病驢進(jìn)行常規(guī)采血,檢測血液常規(guī)指標(biāo)和血清生化指標(biāo)。無菌穿刺采集膝關(guān)節(jié)腔組織液,在1 h內(nèi)(10 000 r/min離心15 min),收集上清液,-80℃保存?zhèn)溆?。選取8頭健康成年種公驢作為對照。

1.2 細(xì)菌分離和鑒定 將關(guān)節(jié)液病料涂片、染色鏡檢,然后劃線接種于腦心浸液肉湯、血瓊脂培養(yǎng)基、麥康凱培養(yǎng)基、TSI培養(yǎng)基和S.S.瓊脂平板上,置于37℃培養(yǎng)24 h,觀察細(xì)菌生長狀況。同時(shí)接種于改良Thiaucourts氏PPLO固體培養(yǎng)基上,37℃培養(yǎng)5～7 d。

1.3 測定項(xiàng)目及方法 采血后進(jìn)行血液常規(guī)指標(biāo)(普朗公司)和血清生化指標(biāo)(全自動(dòng)生化分析儀TBA-120)的測定。使用ELISA試劑盒(上海賽默生物科技發(fā)展有限公司)對血清和關(guān)節(jié)液中的IL-1β、TNF-α和PGE2的含量進(jìn)行檢測[1-2]。

1.4 數(shù)據(jù)的統(tǒng)計(jì)分析 采用SPSS 17.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析處理。

2 結(jié)果與分析

2.1 細(xì)菌分離和鑒定結(jié)果 病料經(jīng)培養(yǎng)48 h后,增菌培養(yǎng)基和鑒別培養(yǎng)基上均無細(xì)菌生長,經(jīng)培養(yǎng)7 d后無支原體生長。表明細(xì)菌和支原體分離鑒定結(jié)果為陰性。

2.2 血液常規(guī)指標(biāo)測定 對發(fā)病動(dòng)物和健康動(dòng)物的血常規(guī)平均指標(biāo)的比較可知,發(fā)生關(guān)節(jié)炎的動(dòng)物嗜中性粒細(xì)胞數(shù)值顯著升高,而其中的分葉核含量極顯著升高(P＜0.01),單核細(xì)胞和白細(xì)胞數(shù)值顯著升高(P＜0.05)。提示發(fā)生明顯炎癥。如表1所示。

表1 血液常規(guī)指標(biāo)的檢測結(jié)果

2.3 血清生化值測定結(jié)果 對發(fā)病動(dòng)物和健康動(dòng)物的血清生化平均指標(biāo)的比較可知,發(fā)生關(guān)節(jié)炎的動(dòng)物血清中的ALP值為322.6±9.52 U/L,與對照相比212.28±5.67 U/L,極顯著升高(P＜0.01),提示有骨的疾病或損傷。CK(關(guān)節(jié)炎組448.15±9.54 U/L,對照組308.10±2.54 U/L)和AST(關(guān)節(jié)炎組521.85±6.24 U/L,對照組352.62±7.34 U/L)的值顯著升高(P＜0.05),如中插彩版圖1所示。其他指標(biāo)未見明顯變化,提示發(fā)生骨骼肌損傷。使用ELISA試劑盒對關(guān)節(jié)液中相關(guān)炎性因子的檢測表明,IL-1β(關(guān)節(jié)炎組95.56±8.64 pg/L,對照組89.25±6.58 pg/L)、TNF-α(關(guān)節(jié)炎組 75.61 ±4.59 pg/L,對照組62.89± 6.11 pg/L)和PGE2(關(guān)節(jié)炎組402.26±26.17 pg/L,對照組359.44±22.58 pg/L)的檢測表明,這些炎性因子數(shù)值發(fā)生顯著升高,如中插彩版圖2所示。

圖1 部分血清生化指標(biāo)的測定結(jié)果

圖2 炎性因子的測定結(jié)果

3 討論

關(guān)節(jié)疾病是馬屬動(dòng)物的常見病,包括關(guān)節(jié)扭傷、挫傷、漿液性關(guān)節(jié)炎和化膿性關(guān)節(jié)炎等,大部分都是由于各種外力作用、機(jī)械性損傷、不良道路或各種病原體感染等因素有關(guān),以散發(fā)居多。文獻(xiàn)[3-4]表明在骨關(guān)節(jié)炎模型中,負(fù)重和過度運(yùn)動(dòng)可以加快造成兔、鼠的關(guān)節(jié)損傷。在規(guī)模化驢場,由于種公驢長期處于驢舍和運(yùn)動(dòng)場等硬質(zhì)地面活動(dòng),加之種公驢的自身體重較大,各關(guān)節(jié)尤其是膝關(guān)節(jié)的長期負(fù)重明顯,過度勞損,造成了疼痛、跛行和不愿運(yùn)動(dòng)為臨診特征的關(guān)節(jié)疾病,并且出現(xiàn)了較多病例。

文獻(xiàn)[5-6]報(bào)道了新疆零星發(fā)生的約80匹馬由于沙門菌引起的副傷寒性關(guān)節(jié)炎病例。本次觀察的病例關(guān)節(jié)液中沒有化膿性表現(xiàn),也沒有分離到沙門菌、鏈球菌和支原體等常見病原體,表明不屬于感染性炎癥。發(fā)生關(guān)節(jié)炎組的中性粒細(xì)胞、單核細(xì)胞和白細(xì)胞數(shù)值顯著升高。提示發(fā)生明顯炎癥過程。血液中時(shí)間性粒細(xì)胞沒有顯著變化,提示未發(fā)生風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎等變態(tài)反應(yīng)性疾病。關(guān)節(jié)炎患病動(dòng)物血清生化指標(biāo)中,ALP、CK和AST的值顯著升高,其他指標(biāo)未見明顯變化,提示發(fā)生關(guān)節(jié)或肌肉損傷等炎癥過程。文獻(xiàn)[7]建立的蒙古馬骨關(guān)節(jié)炎模型,TNF-α和PGE2的含量有顯著上升趨勢,而且促進(jìn)了蛋白酶的分泌和軟骨的降解,可以作為關(guān)節(jié)炎的檢測指標(biāo)進(jìn)行參考。而關(guān)節(jié)液中的生物標(biāo)志物IL-1β、TNF-α和PGE2等促炎因子的檢測結(jié)果同時(shí)表明,這些種公驢發(fā)生了非感染性炎癥過程。

建議消除地面硬化,擴(kuò)大公驢活動(dòng)場地。臨床治療措施包括制止溢血,促進(jìn)吸收(溫敷或穿刺放液等),鎮(zhèn)痛消炎,舒筋活血,防止結(jié)締組織增生,避免遺留關(guān)節(jié)機(jī)能障礙。選擇消炎止痛的治療藥物,包括吲哚美辛、雙氯酚酸鈉等進(jìn)行對癥治療。