蘇勝杰,馬立峰,戴曉光,申 捷,薩茹拉,郭少平,趙心力

(1.內(nèi)蒙古自治區(qū)動物疫病預(yù)防控制中心,內(nèi)蒙古 呼和浩特 010010;2.內(nèi)蒙古阿拉善盟動物疫病預(yù)防控制中心,內(nèi)蒙古 阿拉善 750306)

布魯菌病,是由布魯菌引起人、家畜和多種野生動物共患的一種慢性細菌性傳染病,簡稱布病。本病呈全球流行具有重要的公共衛(wèi)生意義,給世界經(jīng)濟造成巨大損失[1]。布魯菌是該病病原,該病主要經(jīng)過消化道、皮膚黏膜和呼吸道等途徑侵入機體而發(fā)生感染和發(fā)病,該病主要對動物生殖系統(tǒng)造成嚴重損害,也會對神經(jīng)系統(tǒng)和骨骼系統(tǒng)造成損害。布魯菌主要寄生于網(wǎng)狀淋巴組織,造成免疫系統(tǒng)病理進程。對于布病流行嚴重地區(qū),疫苗接種是控制該病的重要手段,目前,國內(nèi)主要用布魯菌活疫苗S2、A19、M5對易感動物進行免疫[2]。其中使用最為廣泛的是S2疫苗。但這些疫苗免疫均存在一個共同弊端,均不能通過血清學(xué)方法區(qū)分自然感染和疫苗免疫抗體,從而影響對該病的診斷和防控。為探究布病S2疫苗免疫綿羊和山羊抗體長期消長規(guī)律,我中心對S2疫苗免疫羊監(jiān)測一年的基礎(chǔ)上,又進行了兩年的免疫抗體監(jiān)測結(jié)果研究,為布病疫苗臨床應(yīng)用、布病實驗室檢測和科學(xué)防控提供參考。

1 材料與方法

1.1 試驗疫苗 布魯菌病活疫苗(S2株),購自中牧實業(yè)股份有限公司。

1.2 檢測試劑 布魯菌虎紅平板凝集抗原、布魯菌試管凝集抗原及布魯菌陰、陽性血清,均購自中國獸醫(yī)藥品監(jiān)察所。

1.3 實驗動物 選取非免疫區(qū)阿拉善盟阿拉善左旗經(jīng)布魯菌虎紅平板凝集試驗、布魯菌試管凝集試驗檢測均為陰性試驗羊,分組情況見表1。

表1 試驗羊分組

1.4 免疫方法 灌服免疫,免疫劑量100億CFU組綿羊、山羊在一免后360 d、720 d分別進行1次加強免疫,口服免疫劑量200億CFU組綿羊、山羊只免疫1次。

1.5 免疫抗體檢測 在免疫前、一免、二免、三免后對所有試驗羊進行采血分離血清,采用虎紅平板凝集試驗、試管凝集試驗檢測免疫抗體水平。實驗操作按照GB/T18646-2002進行。

1.6 選取試驗過程中抗體 一直陽性或抗體轉(zhuǎn)陽后轉(zhuǎn)陰又轉(zhuǎn)陽持續(xù)2個月以上羊只進行剖檢,觀察病理變化,并進行細菌培養(yǎng)。

2 結(jié)果

2.1 100 億CFU免疫劑量組綿羊、山羊檢測結(jié)果

100 億CFU免疫劑量組綿羊一免后20 d時血清抗體陽性率達到最高峰,之后呈下降趨勢,一免后150 d血清抗體陽性率降至0%,一免后180 d～360 d抗體陽性率處在較低水平(0% ～4%);二免后30 d血清抗體陽性率達到最高峰,之后呈下降趨勢,二免后150 d血清抗體陽性率降至2.8%,二免后180 d～330 d抗體陽性率有高有低,二免后360 d抗體陽性率降至2.5%;三免后60 d血清抗體陽性率又達到最高峰,之后一直呈現(xiàn)下降趨勢,三免后360 d抗體陽性率降至2.6%,空白對照組抗體檢測均為陰性;100億CFU免疫劑量組山羊一免后20 d時血清抗體陽性率達到最高峰,之后呈下降趨勢,一免后90 d～三免后360 d抗體陽性率時高時低,規(guī)律不明顯,空白對照組抗體檢測均為陰性,檢測結(jié)果見圖1。

圖1 100億CFU免疫劑量組綿羊、山羊抗體消長曲線

2.2 200 億CFU免疫劑量組綿羊、山羊檢測結(jié)果200億CFU免疫劑量組綿羊免疫后20 d時血清抗體陽性率達到最高峰,之后呈下降趨勢,免疫后150 d血清抗體陽性率降至0%,免疫后180 d～1 080 d抗體陽性率有高有低?？瞻讓φ战M抗體檢測均為陰性;200億CFU免疫劑量組山羊一免后20 d時血清抗體陽性率達到最高峰,之后呈下降趨勢,免疫后90 d～免疫后360 d抗體陽性率時高時低,規(guī)律不明顯,空白對照組抗體檢測均為陰性,檢測結(jié)果見圖2。

圖2 200億CFU免疫劑量組綿羊、山羊抗體消長曲線

3 討論

3.1 100 億CFU免疫劑量組綿羊在一免后20 d時,血清抗體陽性率達到最高峰為82%,之后呈下降趨勢,免疫后150 d,抗體陽性率降至0%,此后,直到免疫360 d抗體陽性率維持在0% ～4%之間;二免疫后30 d血清抗體陽性率達到最高峰為47.5%,直到二免后150 d血清抗體陽性率降至3%,二免后180 d～330 d血清抗體陽性率時高時低,陽性率維持在14%～30%之間,二免后360 d抗體陽性率又降至3%;三免后60 d血清抗體陽性率又達到最高峰為87.2%,三免后90 d～360 d抗體陽性率呈現(xiàn)下降趨勢;100億CFU免疫劑量組山羊在免疫后20 d時,抗體陽性率達到最高峰為100%,免疫后90 d～330 d抗體陽陽性率時高時低,處于10% ～25%之間,免疫后360 d抗體陽性率降至5%,二免后和三免后抗體消長規(guī)律基本與一免后抗體消長規(guī)律一致;200億CFU免疫劑量組綿羊在免疫后20 d時,血清抗體陽性率達到最高峰為92%,免疫后150 d,抗體陽性率降至0%,免疫180 d～360 d抗體陽性率處于0%～8%之間;200億CFU免疫劑量組山羊在免疫后20 d時,抗體陽性率達到最高峰為100%,免疫后90 d～360 d抗體陽陽性率時高時低,處于18% ～35%之間。田素梅研究表明,綿羊經(jīng)S2疫苗免疫,免疫15 d抗體達到最高值,至9個月仍然可以檢測到凝集抗體[3],高紅霞研究表明,羊經(jīng)S2疫苗免疫后,一個月時凝集抗體達到最高峰[4],黨富德研究表明,奶山羊經(jīng)S2疫苗免疫后25 d,抗體陽性率達到最高峰,在以后不同時間段抗體陽性率也出現(xiàn)時高時低現(xiàn)象[5],通過本研究證實,無論是多次免疫或一次免疫綿羊組和山羊組,在免疫后30 d左右,抗體陽性率均達到最高峰,之后在不同時間段均出現(xiàn)抗體陽性率時高時低的現(xiàn)象。

3.2 通過100億CFU、200億CFU免疫劑量組試驗羊抗體陽性率來看,兩組試驗羊陽性率并無明顯差異,所以對疫苗免疫后的檢測進行評價時,無需考慮免疫劑量大小的影響。

3.3 通過試驗羊抗體轉(zhuǎn)陽率看,山羊組免疫抗體陽性率較同時期綿羊抗體陽性率普遍偏高,且升降幅度較大,這可能與山羊?qū)σ呙缑庖呙舾行暂^高有關(guān),有待于進一步研究。

3.4 通過多次免疫試驗羊抗體轉(zhuǎn)陽率看,無論綿羊組和山羊組,在首次免疫、二免和三免后30 d左右抗體陽性率均達到最高峰,但綿羊二免后、山羊二免和三免后試驗羊抗體陽性率最高值較首次免疫低,可能與多次免疫造成試驗羊?qū)σ呙缑舾行越档陀嘘P(guān),有待于進一步研究。

3.5 通過100億CFU、200億CFU免疫劑量組綿羊抗體轉(zhuǎn)陽率看,在免疫后150 d,抗體陽性率已降至0%,但后期有出現(xiàn)個別試驗羊抗體轉(zhuǎn)陽現(xiàn)象,選取4只抗體陰轉(zhuǎn)陽的試驗羊進行剖檢,并未發(fā)現(xiàn)剖檢羊臟器出現(xiàn)病理變化,同時進行細菌培養(yǎng),未見布魯菌菌落,說明抗體轉(zhuǎn)陽的羊不是布魯菌自然感染,可能與疫苗免疫有一定關(guān)系,也可能由其他因素引起,需進一步研究。

3.6 通過綿羊組抗體轉(zhuǎn)陽率發(fā)現(xiàn),在一免后150 d和二免后150 d虎紅平板凝集試驗檢測抗體轉(zhuǎn)陽率為0%,初步摸索了羊經(jīng)3次免疫布魯菌S2株疫苗后血清抗體規(guī)律,為鑒別綿羊自然感染和疫苗免疫抗體消長規(guī)律提供參考。

3.7 通過一次免疫試驗羊抗體陽性率發(fā)現(xiàn),在免疫后390 d和740 d抗體陽性率均出現(xiàn)較小幅度升高,可能與多次免疫羊混群飼養(yǎng),羊群互相舔舐及吸入環(huán)境中疫苗有關(guān),同時一次免疫組試驗羊在免疫較長時間后,仍然能夠檢測到陽性動物。

3.8 通過虎紅平板凝集試驗和試管凝集試樣兩種檢測方法對所采集樣品的檢測結(jié)果看,虎紅平板凝集試驗檢測樣品陽性率較試管凝集試驗高,也證實虎紅平板凝集試驗敏感性較高,而試管凝集試驗特異性較高。在日常布病監(jiān)測工作中,先進行虎紅平板凝集試驗篩選,同時對檢測陽性樣品進行試管凝集試驗,有助于更準(zhǔn)確判定羊的感染狀況。