周華 王林萍 李明東

1淄博市中心醫(yī)院消化內(nèi)二科，山東淄博 255025；2淄博市中心醫(yī)院科教科，山東淄博 255025

【提要】 采用免疫組織化學法檢測126例胰腺癌組織和20例癌旁胰腺組織中Notch1、低氧誘導因子-1α(HIF-1α)、血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)蛋白表達。Notch1、HIF-1、VEGF蛋白在胰腺癌組織中的陽性表達率分別為56.3%、71.4%、68.2%，均顯著高于癌旁組織。Notch1表達與TNM分期和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關，HIF-1α和VEGF表達均與TNM分期、腫瘤大小及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關，且三者之間均呈兩兩正相關。聯(lián)合檢測3種蛋白的表達可作為判斷腫瘤侵襲與轉(zhuǎn)移的重要指標。

胰腺癌是一種惡性程度非常高的消化道惡性腫瘤，診斷困難，缺乏有效的治療手段，5年生存率不足1%。近年研究發(fā)現(xiàn)， Notch1、低氧誘導因子-1α(hypoxia-inducible factor, HIF-1α)和血管內(nèi)皮生長因子(vascular endothelial growth factor, VEGF)等多種基因參與胰腺癌的發(fā)生、發(fā)展、侵襲及轉(zhuǎn)移[1-3]。本研究采用免疫組織化學SABC法檢測胰腺癌組織Notch1、HIF-1α和VEGF蛋白的表達，分析三者間的相關性以及與腫瘤臨床病理參數(shù)的相關性，探討其臨床意義。

一、資料和方法

1．病例資料：收集淄博市中心醫(yī)院普外科2014年10月至2017年10月間手術切除并經(jīng)病理證實的126例胰腺癌組織及20例相匹配的癌旁正常胰腺組織，126例患者中男性70例，女性56例；年齡37～81歲，平均(59±10)歲，其中≤60歲68例，>60歲58例；腫瘤長徑≤2 cm 26例，>2 cm 100例；低分化42例，高中分化84例；淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移59例，無轉(zhuǎn)移67例；TNM Ⅰ～Ⅱ期67例，Ⅲ～Ⅳ期59例。

2．Notch1、HIF-1α和VEGF蛋白檢測：組織標本經(jīng)10%甲醛溶液固定后石蠟包埋，連續(xù)切片。采用免疫組織化學SABC法檢測Notch1、HIF-1α和VEGF蛋白表達。兔抗人Notch1單克隆抗體購自Santa Cruz公司，兔抗人HIF-1α單克隆抗體購自青島宏達生物技術有限公司，兔抗人VEGF單克隆抗體購自Abcam公司。免疫組織化學SABC試劑盒和DAB顯色劑均購自北京索萊寶科技有限公司。設已知胰腺癌陽性切片作為陽性對照，以PBS溶液代替一抗作為陰性對照。

由病理科醫(yī)師進行讀片。Notch1、VEGF和HIF-1α陽性的標準分別為以胞質(zhì)(Notch1，VEGF)以及胞核和胞質(zhì)(HIF-1α)內(nèi)出現(xiàn)棕黃色顆粒為陽性表達。參考文獻[4-5]的標準進行病理評分：(1)染色強度：無，0分；淺黃色，1分；棕黃色，2分；棕褐色，3分；(2)陽性細胞百分比：無，0分；1%～25%，1分；26%～50%，2分；51%～75%，3分；75%以上4分。兩項積分相加，≥4分判定為陽性。

3．統(tǒng)計學處理：應用SPSS13.0統(tǒng)計軟件進行數(shù)據(jù)分析。計數(shù)資料比較用χ2檢驗，與腫瘤臨床病理參數(shù)的相關性用Spearman相關分析。P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

二、結(jié)果

1．胰腺癌組織Notch1、HIF-1α、VEGF的蛋白表達：126例胰腺癌組織中Notch1陽性表達71例，陽性率56.3%；HIF-1α陽性表達90例，陽性率為71.4%；VEGF陽性表達86例，陽性率68.2%。20例匹配的癌旁胰腺組織Notch1、HIF-1α、VEGF的陽性率分別為25.0%、0、5.0%。胰腺癌組織Notch1、HIF-1α、VEGF表達均顯著高于癌旁組織，差異有統(tǒng)計學意義(χ2值分別為6.797、37.245、28.679，P值均<0.05)。

2．胰腺癌組織Notch1、HIF-1α、VEGF表達與臨床病理參數(shù)的相關性：胰腺癌組織Notch1表達與TNM分期和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關；HIF-1α和VEGF表達均與TNM分期、腫瘤大小及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關。三者的表達均與患者年齡、性別及腫瘤分化程度無關(表1)。

經(jīng)Spearman等級相關分析發(fā)現(xiàn)，Notchl與HIF-1α、VEGF蛋白的表達及HIF-1α與VEGF蛋白的表達均呈顯著正相關。

表1 胰腺癌組織Notch1、HIF-1α和VEGF表達與臨床病理特征的關系(例數(shù))

討論Notch信號通路具有高度保守性，在細胞生理進程中起重要作用[4]。哺乳動物Notch受體家族中的Notch1與腫瘤的關系最為密切，它在乳腺癌、食管癌、黑色素瘤、子宮頸癌、胰腺癌、肺癌等組織中高表達[5-6]。本研究結(jié)果顯示，Notch1在胰腺癌組織中表達高于癌旁胰腺組織，且與TNM分期和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關，表明胰腺癌組織Notchl可作為判斷胰腺癌侵襲、轉(zhuǎn)移的指標。

HIF-1α是在缺氧狀態(tài)下仍具有活性的轉(zhuǎn)錄因子，在常氧下被降解，而缺氧狀態(tài)中保持穩(wěn)定[7]。研究表明，HIF-1α在肺癌、乳腺癌、結(jié)腸癌、胰腺癌、食管癌等多種腫瘤組織中過度表達，與腫瘤的生長、侵襲轉(zhuǎn)移以及預后不良關系密切[8-9]。本研究結(jié)果顯示，HIF-1α在胰腺癌組織中表達高于癌旁胰腺組織，且與TNM分期、腫瘤大小及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關，表明HIF-1α參與胰腺癌腫瘤生長和促進腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移。

VEGF是促進血管生長的重要因子[10]。大量研究發(fā)現(xiàn)VEGF表達與微血管密度有關，同時增加血管內(nèi)皮通透性，刺激新生血管形成，促進腫瘤的生長、浸潤和轉(zhuǎn)移，且VEGF高表達與患者預后不良有關[11]。本研究發(fā)現(xiàn)VEGF在胰腺癌組織中表達高于癌旁胰腺組織，且與TNM分期、腫瘤大小及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關，表明VEGF高表達與胰腺癌發(fā)生、發(fā)展及轉(zhuǎn)移有關。

研究報道，乳腺癌[12]、胃癌[13]、非小細胞肺癌[14]、卵巢癌[15]中發(fā)現(xiàn)Notch1與HIF-1α、VEGF分別呈正相關，并且Notch1、HIF-1α、VEGF表達與腫瘤浸潤深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關。其機制可能因為腫瘤組織處于低氧狀態(tài)，腫瘤細胞產(chǎn)生大量HIF-1α，從而激活VEGF，誘導其高表達，以促進新生腫瘤血管形成和提高腫瘤組織內(nèi)部能量轉(zhuǎn)運，使腫瘤組織適應低氧環(huán)境，繼續(xù)生長、浸潤和轉(zhuǎn)移[16-17]。本研究結(jié)果顯示，Notch1與HIF-1α、VEGF在胰腺癌組織中的表達分別呈正相關，且均與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和臨床分期有關，提示胰腺癌細胞分泌的Nolchl可能誘導HIF-1α表達，繼而通過上調(diào)VEGF表達促進新生血管形成和腫瘤的侵襲轉(zhuǎn)移。

利益沖突所有作者均聲明不存在利益沖突