曹華琳 劉亞軍

[摘?要]?目的?對比分析核酸檢測與酶聯(lián)免疫檢測對輸血相關(guān)傳染性疾病的檢測效果。方法?選取我站采集的26325份無償獻血的檢驗樣本作為研究對象，通過進行2次酶聯(lián)免疫檢測或者必要時聯(lián)合1次核酸檢測，并對檢測結(jié)果進行分析。結(jié)果?經(jīng)過對26325份血液標本進行酶聯(lián)免疫檢測和核酸檢測，酶聯(lián)免疫檢測檢出318例陽性，核酸檢測檢出373例陽性，其中核酸檢測出含有乙肝表面抗原（HBsAg）的血液樣本296例，檢出含有丙型肝炎病毒（HCV）的血液樣本53例，檢出含有人類免疫缺陷病毒（HIV）的血液樣本24例，兩者比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）;核酸檢測與酶聯(lián)免疫檢測聯(lián)合應(yīng)用后，檢出381例陽性，提示聯(lián)合檢測的檢出率高于任何單獨檢測。結(jié)論?核酸檢測在輸血傳播疾病的篩查過程中具有重要的價值，其能夠降低單獨酶聯(lián)免疫吸附測定的漏診率，提高乙肝病毒、丙肝病毒和HIV病毒等的篩查水平，而核酸檢測聯(lián)合酶聯(lián)免疫檢測具有更高的檢出效果。

[關(guān)鍵詞]?核酸檢測;酶聯(lián)免疫檢測;血液傳播

中圖分類號：R446.6;R446.1

文獻標識碼：A文章編號：1009-816X（2019）02-0171-03

doi：10.3969/j.issn.1009-816x.2019.02.021

乙肝病毒感染、丙肝病毒感染、HIV病毒感染能夠通過血液途徑進行傳播，流行病學(xué)研究證實，每年輸血導(dǎo)致的乙肝病毒傳播的病例可達5萬～10萬人左右[1，2]。臨床上輸血治療前通過對血液制品的相關(guān)傳染性病毒的檢測，能夠提高血液制品的安全性?，F(xiàn)階段臨床上采用酶聯(lián)免疫吸附法檢測輸血相關(guān)病毒的陽性情況，雖然其能夠提高乙肝病毒、丙肝病毒和HIV病毒的檢出水平，但長期的隨訪觀察研究證實，酶聯(lián)免疫吸附法檢測的局限性較為明顯，其漏診率較高，假陰性率可超過8%以上[3]。核酸檢測能夠通過對血液制品中的相關(guān)病毒顆粒DNA或RNA的擴增，特異性的檢測不同的病毒感染情況[4]。部分研究者探討了核酸檢測在輸血相關(guān)感染性疾病中的作用，認為其可以有效預(yù)防輸血相關(guān)疾病的傳播[5]，但與酶聯(lián)免疫吸附測定的對比研究不足。為了提高輸血治療的安全性，本次研究選取我站采集的26325份無償獻血者的檢驗樣本作為研究對象，探討了核酸檢測與酶聯(lián)免疫檢測聯(lián)合預(yù)防輸血相關(guān)疾病傳播的臨床效果，報道如下。

1?資料與方法

1.1?標本：選取我站在2017年2月至2018年2月間采集的26325份無償獻血者的檢驗樣本作為研究對象，獻血者經(jīng)過干式生化儀檢測丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（ALT）和快速金標法檢測乙肝表面抗原（HBsAg）后，分別抽取2管靜脈血，每管5mL，其中一管含有分離膠，用于核酸檢測;另一管不含分離膠，用于酶聯(lián)免疫檢測。含有分離膠的樣本需在4小時內(nèi)進行離心處理，所有血液標本采集處理完畢后均放于2～8℃的冰箱內(nèi)，等待統(tǒng)一檢測。

1.2?儀器與試劑：

1.2.1?主要儀器：酶免檢測系統(tǒng)：全自動酶聯(lián)免疫檢測處理系統(tǒng)（深圳愛康UranusAE280）、Freedom EVO clinical全自動加樣儀（瑞士TECAN公司）;核酸檢測儀器：HAMILTON STAR全自動混樣儀、Roche cobas s 201核酸提取擴增系統(tǒng)（瑞士Roche公司）。

1.2.2?主要試劑：HBsAg ELISA試劑（北京萬泰生物藥業(yè)股份有限公司、美國雅培公司），抗-丙型肝炎病毒（（HCV）ELISA試劑（北京萬泰生物藥業(yè)股份有限公司、珠海麗珠診斷試劑有限公司），抗-人類免疫缺陷病毒（HIV）ELISA試劑（法國伯樂公司、北京萬泰生物藥業(yè)股份有限公司），HBV、HCV、HIV核酸提取和擴增檢測試劑（羅氏診斷公司，MPX1試劑）。所有試劑均經(jīng)過批批檢，嚴格按照SOP進行操作并在有效期內(nèi)使用。

1.3?檢測方法：

1.3.1?ELISA檢測：對獻血者的血液標本采用2種ELISA試劑平行檢測HBsAg、抗-HCV、抗-HIV。其中：HBsAg檢測S/CO值在0.8～1.0設(shè)置為灰區(qū)，S/CO值≥0.8即判為有反應(yīng)性;抗-HCV檢測S/CO值在0.7～1.0設(shè)置為灰區(qū)，S/CO值≥0.7即判為有反應(yīng)性;抗-HIV檢測S/CO值在0.7～1.0設(shè)置為灰區(qū)，S/CO值≥0.7即判為有反應(yīng)性。雙試劑有反應(yīng)性的標本直接判為不合格;單試劑有反應(yīng)性標本采用同種試劑對標本進行2孔復(fù)測，復(fù)測結(jié)果2孔均無反應(yīng)性為合格，2孔任1孔有反應(yīng)性判為不合格。

1.3.2?核酸檢測：將2種ELISA檢測結(jié)果呈陰性的26007份標本送陜西省血液中心進行核酸集中化檢測。采用6個標本混合檢測模式，對有反應(yīng)性的標本進行拆分，混合檢測有反應(yīng)性拆分后還呈有反應(yīng)性的標本判為有反應(yīng)性，混合檢測有反應(yīng)性拆分無反應(yīng)性的標本判為無反應(yīng)性。拆分有反應(yīng)性的標本，在進一步鑒別后結(jié)果為有反應(yīng)性的最終判定為有反應(yīng)性，鑒別為無反應(yīng)性的最終判定為不確定，拆分后為有反應(yīng)性結(jié)果的所有血制品均做報廢處理。

1.4?統(tǒng)計學(xué)處理：統(tǒng)計軟件采用SPSS 16.0計數(shù)資料采用百分率表示，組間比較采用χ2檢驗;P<0.05表示差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。

2?結(jié)果

2.1?酶聯(lián)免疫檢測與核酸檢測的結(jié)果比較：通過對26325份血液標本進行酶聯(lián)免疫檢測，檢測出318例陽性，通過核酸檢測，檢測出373例陽性，結(jié)果顯示存在部分含有病毒且處于變異、窗口期、隱性感染時的樣本，使用酶聯(lián)免疫檢測無法檢出的情況，其中核酸檢測新檢出含有HBsAg的血液樣本37例，新檢出含有HCV的血液樣本14例，新檢出含有HIV的血液樣本4例，兩者比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05），見表1。

2.2?不同檢測方法的結(jié)果比較：經(jīng)過對26325份血液標本中進行酶聯(lián)免疫檢測和核酸檢測，并對結(jié)果進行匯總，分別統(tǒng)計單獨應(yīng)用酶聯(lián)免疫、核酸檢測與聯(lián)合檢測的結(jié)果，顯示聯(lián)合檢測具有更好地檢出效果，將各種檢測方法的結(jié)果進行匯總對比，結(jié)果顯示聯(lián)合檢測的檢出率更高，可以進一步提高檢測結(jié)果的準確性，降低輸血傳播疾病的風(fēng)險。

3?討論

乙肝病毒感染、丙肝病毒感染、HIV病毒感染通過輸血傳播的風(fēng)險明顯上升，乙肝病毒感染、丙肝病毒感染等感染導(dǎo)致的患者多器官功能衰竭和遠期并發(fā)癥的發(fā)生率也明顯的升高[5]。特別是在偏遠或者經(jīng)濟欠發(fā)達的地區(qū)，由于檢測技術(shù)的落后，血制品乙肝病毒感染、丙肝病毒感染等漏診而導(dǎo)致疾病傳播的風(fēng)險有進一步增高的趨勢[6]。對于相關(guān)血液制品中不同感染性病毒的檢測，不僅能夠保證血液制品的安全性，同時還能夠降低輸血相關(guān)因素導(dǎo)致的正常人群的感染和感染性疾病的擴散。臨床上通過酶聯(lián)免疫吸附測定法檢測血清中乙肝病毒等顆粒蛋白，其檢測環(huán)境要求相對較低，檢測試劑盒的操作較為簡便[7]。但一項囊括了217例樣本量的血液制品的病毒篩查分析結(jié)果提示，兩次酶聯(lián)免疫吸附測定篩查相關(guān)傳染性病毒感染的靈敏度不足78%，漏診率或者誤診率可達6%～10%[8]。核酸檢測能夠通過對于相應(yīng)病毒顆粒RNA的擴增，采用PCR方式檢測基因的擴增產(chǎn)物，進而識辨不同病毒感染的風(fēng)險。核酸檢測對于血液制品中相關(guān)病毒的基礎(chǔ)性濃度要求較低，在較低的基線水平上即可實現(xiàn)對于病毒的檢測效果。同時核酸檢測不受到環(huán)境溫度的影響，對處于窗口期、免疫變異病毒或無應(yīng)答狀態(tài)的病毒顆粒等，均具有較高的檢測靈敏度[9]。在本次研究中，對病毒處于窗口期、病毒變異或者隱性感染的患者中，酶聯(lián)免疫吸附測定的局限性較為明顯，其無法進行相關(guān)血液標本的檢測。而核酸檢測在酶聯(lián)免疫檢測陰性的標本中篩查出了不同數(shù)量的乙肝病毒、丙肝病毒和HIV病毒感染情況，表明酶聯(lián)免疫檢測存在明顯的漏診情況，而核酸檢測能夠提高輸血相關(guān)病毒的檢測能力。通過匯集不同的相關(guān)文獻，認為這主要考慮與下列幾個原因有關(guān)[10～12]：（1）核酸檢測的特異性較高，不論病毒是否處于窗口期、靜止期或隱性感染期，核酸檢測方法均能夠通過對于病毒DNA的擴增，從而實現(xiàn)篩查作用;（2）核酸檢測受操作方法、步驟、試劑盒的影響較小，由于病毒DNA短期內(nèi)不存在變異，因此HBsAg變異等并不會影響到核酸檢測的靈敏度。趙紅娜等[13]也發(fā)現(xiàn)，核酸檢測能夠提高5%左右的輸血相關(guān)傳播性疾病的篩查靈敏度，同時能夠顯著降低酶聯(lián)免疫檢測的漏診水平。單獨應(yīng)用酶聯(lián)免疫與核酸檢測檢查結(jié)果分析可見，單獨采用核酸檢測的檢出效果更為明顯，這主要由于核酸檢測的穩(wěn)定性、對于標本的要求相對較低、檢測結(jié)果的抗干擾能力較強。特別是對于氣候或溫度變化較為明顯的地區(qū)，核酸通過擴增病毒顆粒DNA進而進行檢測的方式，穩(wěn)定性更高。本研究還發(fā)現(xiàn)聯(lián)合核酸檢測+酶聯(lián)免疫檢測能夠進一步提高單獨核酸檢測的效果，提示了聯(lián)合篩查在血液制品檢測過程中的作用。但部分研究者并不認為聯(lián)合核酸檢測+酶聯(lián)免疫檢測的效果優(yōu)于單獨核酸檢測，認為聯(lián)合檢測的費用較高而靈敏度并無明顯的上升[14]，這與本次研究的結(jié)論存在一定的差別，考慮可能與PCR儀器的精度、PCR引物設(shè)計等的差異有關(guān)。

綜上所述，核酸檢測在輸血傳播性疾病的篩查過程中具有重要的價值，其能夠降低單獨酶聯(lián)免疫吸附測定的漏診率，提高乙肝病毒、丙肝病毒和HIV病毒等的篩查水平，而聯(lián)合核酸檢測和酶聯(lián)免疫檢測具有更高地檢出效果。

參考文獻

[1]Yang H， Anderson S， Forshee R， et al. Modeling complete removal of risk assessment questions in the USA predicts the risk of HIV exposure in blood recipients could increase despite the use of nuckic acid testing[J]. Vox Sanguinis，2016，110（4）：324-328.[2]Babic I， Maslovic M， Vuk T， et al. Detection of three blood donors with multiple myeloma by routine viral individual-donor nucleic acid testing screening[J]. Transfusion，2017，57（11）：2813-2814.

[3]虢娟，鄧凱航，林雪珍，等.分析核酸檢驗與酶聯(lián)免疫檢測血液病毒的應(yīng)用及檢驗準確率[J].中國現(xiàn)代藥物應(yīng)用，2017，11（13）：57-58.

[4]李玉泉.核酸檢測與酶聯(lián)免疫檢測血液病毒的比較分析[J].中國衛(wèi)生產(chǎn)業(yè)，2016，13（31）：45-47.

[5]劉麗，楊忠思，單玉.血液檢測新模式在無償獻血者血液篩查中的應(yīng)用分析[J].中國輸血雜志，2015，28（3）：304-306.

[6]Mafirakureva N， Mapako T， Khoza S， et al. Cost effectiveness of adding nucleic acid testing to hepatitis B， hepatitis C， and human immunodeficiency virus screening of blood donations in Zimbabwe[J]. Transfusion，2016，56（12）：3101-3103.

[7]黃成垠，蔣昵真，陳顯，等.血液HIV、HBV和HCV篩查策略的探討[J].中國輸血雜志，2015，28（7）：784-786.

[8]高景波，劉艷春，王芳.血站實驗室酶聯(lián)免疫檢測性能驗證方法的探討[J].中國衛(wèi)生檢驗雜志，2016，26（21）：3186-3187.

[9]吳寶軍.核酸檢測與酶聯(lián)免疫檢測血液病毒的對比分析[J].中國實用醫(yī)藥，2015，10（7）：115-116.

[10]張巧琳，田耘博，張琴，等.2012～2013年重慶市無償獻血者HIV感染情況分析[J].重慶醫(yī)學(xué)，2015，44（8）：1120-1121.

[11]周麗君，郭偉鵬，譚湘濤，等.病毒核酸檢測對降低輸血傳播疾病殘余風(fēng)險的分析研究[J].新疆醫(yī)科大學(xué)學(xué)報，2014，37（2）：214-217.

[12]陳肖瀟，田綠波，樊學(xué)軍，等.2007～2013年出入境人群丙肝實驗室檢測結(jié)果分析及檢測流程探討[J]. 中國國境衛(wèi)生檢疫雜志，2015，25（2）：99-102.[13]趙紅娜，王藝芳，李俊英，等.核酸檢測與酶免檢測在鄭州地區(qū)血液篩查中的聯(lián)合應(yīng)用[J].中國輸血雜志，2015，28（10）：1269-1271.

[14]Sertz R， Biceroglu S， Kayin M， et al. Nucleic acid testing of blood donors-Ege University Hospital short term experience[J]. J Clin Viro，2016，82（5）：35-36.

（收稿日期：2018-9-6）