劉淼

摘 要：為明確戊唑醇與丙森鋅聯(lián)合作用性質(zhì)并篩選混用的最佳配比，本文采用菌絲生長(zhǎng)速率法測(cè)定不同配比的藥劑對(duì)蘋果斑點(diǎn)落葉病菌的抑制率。室內(nèi)毒力測(cè)定結(jié)果表明，兩者分別以1：4、1：6混配時(shí)表現(xiàn)出一定的增效作用，且以1：4時(shí)增效比值最大。

關(guān)鍵詞：菌絲生長(zhǎng)速率法；戊唑醇；丙森鋅；蘋果斑點(diǎn)落葉?。灰种坡?/p>

中圖分類號(hào)：S432.4+4 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A

DOI：10.19754/j.nyyjs.20190515005

蘋果斑點(diǎn)落葉病也被稱作是早期落葉病，其是蘋果經(jīng)常出現(xiàn)的病害，此病害涵蓋了全部蘋果產(chǎn)區(qū)，在發(fā)病較為嚴(yán)重的時(shí)候，常常出現(xiàn)蘋果樹提前落葉的現(xiàn)象，進(jìn)而對(duì)蘋果樹的正常生長(zhǎng)產(chǎn)生嚴(yán)重的影響，導(dǎo)致蘋果果實(shí)的產(chǎn)量降低。

丙森鋅為丙撐雙二硫代氨基甲酸鋅的聚合物，是一種廣譜的保護(hù)性有機(jī)硫殺菌劑，作用的靶標(biāo)位點(diǎn)較多，產(chǎn)生抗藥性的風(fēng)險(xiǎn)較低，且含有易被葉片吸收的鋅元素，可以提高果實(shí)品質(zhì)和坐果率。戊唑醇主要是幽醇生物經(jīng)過(guò)合成形成的抑制劑，其屬于三唑類殺菌劑，可以有效制約C-14α-脫氧甲基酶的具體火星，進(jìn)而對(duì)真菌的生物合成作用產(chǎn)生干擾作用，充分發(fā)揮出自身的抗真菌作用，然而，三唑類殺菌劑的位點(diǎn)較為簡(jiǎn)單，如若長(zhǎng)時(shí)間進(jìn)行使用會(huì)導(dǎo)致病原真菌出現(xiàn)抗藥性。為延緩抗藥性的產(chǎn)生，本文將戊唑醇和丙森鋅混配，采用菌絲生長(zhǎng)法測(cè)定混配藥劑對(duì)蘋果斑點(diǎn)落葉病菌的抑制率，并找出最佳配比，為田間使用提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 供試靶標(biāo)及培養(yǎng)條件

蘋果斑點(diǎn)落葉病菌（Alternaria mali），主要是實(shí)驗(yàn)室分離之后進(jìn)行儲(chǔ)存，把冰箱4℃儲(chǔ)存的病菌菌種轉(zhuǎn)移到PDA培養(yǎng)基當(dāng)中，并且在28℃的培養(yǎng)箱當(dāng)中進(jìn)行培養(yǎng)，保證其活性，通過(guò)2次轉(zhuǎn)接之后進(jìn)行備用。

1.2 試驗(yàn)藥劑

戊唑醇原藥（tebuconazole），含量97%（百農(nóng)思達(dá)（山東）農(nóng)用化學(xué)品有限公司提供）。

丙森鋅原藥（propineb），含量85%（百農(nóng)思達(dá)（山東）農(nóng)用化學(xué)品有限公司提供）。

藥劑配制方法：取0.103g戊唑醇原藥溶解于20g二甲基甲酰胺，加入0.1%的NP-10水溶液定容至1000mL，制成濃度為100mg/L的透明乳液。

丙森鋅原藥用行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)推薦的方法不能配出試驗(yàn)所需劑量，所以采用以下方法配制。

將丙森鋅配制成1%懸浮劑母液，配方是：原藥1.176g，農(nóng)乳500 1.00g，乳化劑1602 2.00g，黃原膠0.20g，去離子水95.62g，砂磨機(jī)研磨1h。

空白對(duì)照：乳化劑1602 2.00g，農(nóng)乳500 1.00g，黃原膠0.20g，二甲基甲酰胺2.00g，用含0.1%的NP-10的水溶液定容至100mL當(dāng)做空白比對(duì)。

1.3 試驗(yàn)處理

1.3.1 劑量設(shè)置

經(jīng)過(guò)相應(yīng)的預(yù)試明確各個(gè)藥劑制約濃度范圍之后，各個(gè)藥劑要根據(jù)其成分的實(shí)際含量設(shè)置5個(gè)劑量，其劑量處理情況如下：

戊唑醇：0.01、0.05、0.5、2、10mg/L

丙森鋅：50、100、200、400、600mg/L

[戊唑醇：丙森鋅（1：1）]：0.1、0.5、1、5、50mg/L

[戊唑醇：丙森鋅（1：2）]：0.1、0.5、2、10、50mg/L

[戊唑醇：丙森鋅（1：4）]：0.1、0.5、5、10、50mg/L

[戊唑醇：丙森鋅（1：6）]：0.1、1、2、10、100mg/L

[戊唑醇：丙森鋅（1：8）]：0.5、1、5、10、100mg/L

空白對(duì)照：空白對(duì)照母液稀釋10倍。

1.3.2 試驗(yàn)重復(fù)

每個(gè)濃度處理重復(fù)4次。

1.3.3 試驗(yàn)時(shí)間和次數(shù)

本試驗(yàn)于2018年12月21日用藥1次。

2 試驗(yàn)方法

試驗(yàn)依據(jù)中華人民共和國(guó)農(nóng)業(yè)行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)（殺菌劑）NY/T 1156.2-2006、NY/T 1156.6-2006進(jìn)行。該試驗(yàn)主要使用菌絲生長(zhǎng)方法明確藥劑是否可以限制蘋果出現(xiàn)斑點(diǎn)落葉，并且制約病毒的活性，其步驟如下：通過(guò)轉(zhuǎn)接火花之后的蘋果病菌菌株使用PDA培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)，在其菌株成長(zhǎng)到3/4的時(shí)候，使用內(nèi)徑是8mm的打孔器在邊緣位置上進(jìn)行打孔操作，之后的菌絲塊當(dāng)做是接種體。選擇配置好的濃度是設(shè)計(jì)10倍的藥液5mL以及45mL的PDA培養(yǎng)基進(jìn)行混合，之后倒進(jìn)4個(gè)培養(yǎng)皿當(dāng)中，在其冷卻之后支撐相應(yīng)的平板，使用藥劑空包比對(duì)和培養(yǎng)基之間進(jìn)行混合，然后進(jìn)行對(duì)照，把經(jīng)過(guò)接種的菌絲塊放入到平板的中間位置，然后放進(jìn)28℃的培養(yǎng)箱當(dāng)中進(jìn)行培養(yǎng)。

3 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析

3.1 調(diào)查方法

在空白對(duì)照的相應(yīng)培養(yǎng)皿當(dāng)中，在其菌絲成長(zhǎng)到2/3的時(shí)候，要及時(shí)調(diào)整菌絲的實(shí)際生長(zhǎng)情況，使用直尺對(duì)其菌落直徑進(jìn)行測(cè)量工作，其單位主要使用mm，各個(gè)菌落使用十字交叉方法測(cè)量其直徑，之后選擇器平均數(shù)值。

3.2 調(diào)查時(shí)間和次數(shù)

在2018年12月26日的時(shí)候進(jìn)行調(diào)查。

3.3 計(jì)算方法

依照實(shí)際調(diào)查結(jié)果，根據(jù)下面的共識(shí)對(duì)菌絲生長(zhǎng)抑制率進(jìn)行計(jì)算，其單位主要是%，而計(jì)算結(jié)果應(yīng)保留到小數(shù)點(diǎn)的后2位數(shù)值。

凈生長(zhǎng)量（mm）=測(cè)量菌落直徑-8

菌生抑制率（%）=照生量-理生量照生量×100

3.4 統(tǒng)計(jì)分析

使用DPS軟件依照藥劑的實(shí)際濃度回歸分析菌絲的生長(zhǎng)抑制率，計(jì)算各個(gè)藥劑的EC50值、EC90值、95%置信限和相應(yīng)的b值、標(biāo)準(zhǔn)誤（SD）。

SR=EC50（理值）EC50（察值）

EC50（理值）=a+baA的EC50+bB的EC50

其中：a、b分別為戊唑醇和丙森鋅在組合中的百分含量

A為戊唑醇；B為丙森鋅

依照Wadley方法對(duì)兩個(gè)藥劑經(jīng)過(guò)配比之后的聯(lián)合增效比值（SR）進(jìn)行對(duì)比，SR<0.5代表具備拮抗作用，0.5≤SR≤1.5代表具備相加作用，SR>1.5代表具備增效作用。

4 結(jié)果與分析

試驗(yàn)結(jié)果表明：空白對(duì)照盤內(nèi)菌絲擴(kuò)展至培養(yǎng)皿的2/3時(shí)，與清水對(duì)照盤內(nèi)處理相比，菌絲生長(zhǎng)無(wú)明顯差異，說(shuō)明本配方篩選試驗(yàn)為有效試驗(yàn)。

戊唑醇、丙森鋅及戊唑醇與丙森鋅的各個(gè)占比混配情況對(duì)蘋果病菌生長(zhǎng)抑制率的結(jié)果如下表1，每個(gè)藥劑的EC50值、EC90值及95%置信限和相應(yīng)的b值、標(biāo)準(zhǔn)誤差（SD）見(jiàn)表1。

由表1可知，戊唑醇、丙森鋅對(duì)蘋果斑點(diǎn)落葉病菌的EC50分別為0.28mg/L和195.73mg/L。戊唑醇、丙森鋅對(duì)蘋果斑點(diǎn)落葉病菌的EC90分別為54.61mg/L和1283.25mg/L。戊唑醇與丙森鋅配比1：1、1：2、1：4、1：6、1：8的增效比值分別為1.08、1.24、1.90、1.68和1.41，雙方使用1：4以及1：6的混配方法展現(xiàn)出相應(yīng)的增效作用，且以1：4時(shí)增效比值最大，其增效機(jī)理、作用方式及田間藥效尚待進(jìn)一步驗(yàn)證。

戊唑醇為三唑類內(nèi)吸性殺菌劑，具有保護(hù)、治療和鏟除作用，是真菌麥角甾醇生物合成抑制劑，用于防治多種植物的各種高等真菌病害，現(xiàn)已經(jīng)登記用于蘋果斑點(diǎn)落葉病防治。丙森鋅是一種速效、長(zhǎng)殘留的重要?dú)⒕鷦?。其所具備的殺菌機(jī)制并不明確與特定，可以使用的位置比較多，主要用來(lái)制約病原菌當(dāng)中的丙酮酸氧化現(xiàn)象，對(duì)作物真菌引起的多種病害具有很好的防治效果。本試驗(yàn)結(jié)果表明，戊唑醇對(duì)蘋果斑點(diǎn)落葉病菌的毒力要高于丙森鋅，但戊唑醇對(duì)病原菌作用位點(diǎn)單一，容易產(chǎn)生抗藥性。因此將內(nèi)吸性與保護(hù)性殺菌劑混合使用，可有效延緩病原菌抗藥性的產(chǎn)生，減少用藥量，降低用藥成本，是藥劑開發(fā)的一個(gè)重要途徑。

參考文獻(xiàn)

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